熒光原位雜交技術在前列腺疾病致男性不育的臨床應用

劉萍

【摘要】目的：探究熒光原位雜交技術在前列腺疾病致男性不育的應用價值。方法：選取2016年 12月至2020年 12月來定西市中醫院就診的有關男性不育的患者25例納入患病組，并選取同時段有正常生育能力的25例男性納入對照組。分析兩組精液中精子的常規參數，并利用熒光原位雜交技術檢測診斷脫落細胞 DNA 的異常特征。結果：患有前列腺疾病的患者精液中精子常規各項指數均低于正常男性精液精子各項指數，精子畸形率的變化也明顯增大（P <0.05）;用熒光原位雜交技術檢測發現患有前列腺疾病的患者，其精液精子染色體都發生了異常變化，其中前列腺疾病中患有前列腺癌患者的精液精子染色體在數目和結構上都不同程度的發生了變化，導致精子畸形率升高，男性不育率也隨之發生變化。結論：熒光原位雜交技術能準確檢測分析前列腺疾病患者精液精子染色體的異常特征變化，在臨床上用于早期篩查前列腺疾病和早期診斷前列腺癌，以及治療監測前列腺癌的預后和復發情況。也可以鑒別診斷發生男性不育癥的原因，因此熒光原位雜交技術在臨床應用方面還有更好的發展前景。

【關鍵詞】熒光原位雜交;前列腺癌;前列腺疾病;男性不育

【中圖分類號】R737.25 R698+.2【文獻標識碼】A 【文章編號】2096-5249（2021）18-0168-02

在男性泌尿生殖系統中前列腺癌是一種常見的老年性惡性腫瘤。國內外的有關報道顯示[1]，其前列腺癌的發病率差別也很大。在中國，前列腺的發病率和前列腺癌的死亡率雖明顯低于西方國家，但近幾年來前列腺的發病率也出現了上升趨勢，并且其發病的年齡也趨向年輕化[2]。對于前列腺患者的臨床診斷，其臨床體征和癥狀表現非常重要，但一般在患者出現癥狀就診時已經到了晚期，所以需要早期進行診斷和發現。前列腺癌是發生在前列腺的上皮惡性腫瘤，在疾病早期階段，許多患者屬于隱性病例，一旦前列腺癌開始快速生長或擴散到前列腺外，病情則比較嚴重[3]。由于職業環境和多種復雜因素的影響，現中年青年引起前列腺炎癥的也比較普遍，長期處于炎癥狀態時會引起不育，且轉變為癌癥的概率也會增高。早期篩查前列腺癌的傳統的手段是前列腺特異抗原（PSA）測定以及前列腺直腸指檢檢查，這兩種檢查方法是目前前列腺癌的最佳初篩方法，但是這兩種檢查診斷精準率并不是太高[4]。由于前列腺直腸指檢并不是一種定量的檢測方法，且所有前列腺癌細胞和非癌細胞均都可以產生血清PSA，同時血清PSA的檢測值受許多因素的影響，而導致其檢測值升高，致使不能早期預測前列腺疾病。為此，本次研究選取25 例前列腺疾病的患者以及25例正常男性，探究熒光原位雜交技術在前列腺疾病致男性不育的應用價值，現報道如下。

1對象與方法

1.1 研究對象

從2016年12月至2020年 12月來在定西市中醫院就診的相關男性不育的患者中選取25例患有前列腺疾病的患者（患病組），年齡為23～35（28.50±4.14）歲，病程2～5（3.46±0.82）年;并選取同時段有正常生育能力的25例男性（正常組），年齡為22～35（28.39±3.98）歲。兩組受檢者年齡等一般資料差異無統計學意義（P>0.05）。

納入標準：（1）患者對本研究知情并同意實施;（2）育齡男性與女方同居2年以上，有正常性生活，未采取任何避孕措施，女方生殖機能正常;（3）年齡18歲以上者;（4）除前列腺疾病外沒有其他疾病者。

排除標準：（1）對本研究有異議者;（2）除前列腺疾病外有其他疾病者;（3）沒有正常性生活者;（4）年齡不足18歲者。

1.2 方法

（1）精液標本的收集與保存。在收集標本前，囑咐所有受檢者要保持良好的健康狀況，近期無其他疾病的發生，不要過度疲勞、不要酗酒、也不要熬夜，心情要放松。囑咐受檢者采集良好精液標本的全部注意事項并采集全部精液，以便收集到一份良好的精液標本，標本采集后保持溫度在 20℃～37℃。

（2）所用試劑與儀器。采用精子分析儀（上海北昂醫藥科技，型號為 BEION S3-3）、熒光原位雜交（FISH）分析系統（上海北昂醫藥科技股份有限公司，型號為BEION V4.90）;試劑采用康錄有限責任公司試劑盒。

（3）實驗分析方法。將收集到的精液標本按照常規分析步驟正確分析其精液常規數值以及觀察其精液中精子的畸形率和精子形態學的異常變化;并采用熒光原位雜交檢測方法進行檢測，操作步驟按照試劑盒說明進行一系列的標本處理、玻片預處理（破壞細胞膜有利于探針雜交;蛋白酶消化、 HCI處理）、變性、雜交、洗滌和復染操作，制片完成后，在熒光顯微鏡下觀察其圖像的采集情況和保存圖像以及進行 Fish 結果的分析判定。

1.3 觀察指標

（1）精液常規參數。包括液化時間、酸堿度、精液量、精子數量;（2）精子活動率主要通過檢測兩組前向運動（PR）、非前向運動（NP）和不動精子（IM）的活動情況;（3）精液生殖細胞的形態變化。包括精原細胞、初級精母細胞、次級精母細胞、精子細胞;（4）染色體和精子畸形率以及精子畸形率變化。用熒光原位雜交技術分析具有正常生育能力的和患有疾病的受檢者染色體變化和精子畸形率變化、并分析前列腺疾病中前列腺炎以及前列腺發生惡性病變情況下的染色體變化和精子畸形率變化和精子畸形率。

1.4 統計學方法

采用 SPSS 24.0軟件進行分析。計量資料用（ ±s）表示，行 t檢驗;計數資料采用χ2檢驗，以率（%）表示，當 P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1 精液常規參數比較

兩組精液酸堿度以及精液量比較無明顯差異（P>0.05）;但患病組精液液化時間較正常時延長，且精子數量明顯低于正常組（P<0.01），見表1。

2.2 精子活動率參數比較

患病組PR精子數明顯低于正常組（P<0.05）;患病組IM 高于正常組，但NP無差異（P>0.05），見表2。

2.3 精液生殖細胞的形態變化比較

患病組精液各類生殖細胞數值中，精原細胞、初級精母細胞和次級精母細胞數值均高于正常組數值，精子細胞數目低于正常組（P<0.05）;且患病組和正常組的次級精母細胞、精子細胞數值均有明顯差異（P<0.05）。見表3。

2.4 Fish檢測結果數據分析

用熒光原位雜交技術進行精子核DNA染色時，其熒光染料與患者精子核中DNA結合以后，在熒光顯微鏡下可以觀察到顯示紅色或黃色的熒光。上述數據統計了具有正常生育能力的受檢者和男性不育患者的精子染色體異常變化和精子畸形率的變化以及患有前列腺疾病時其脫落細胞DNA 的特征變化，篩選患有前列腺疾病病例25例進行染色體分析，分析前列腺疾病中前列腺炎癥和前列腺惡性病變時導致患者精液精子畸形率和染色體變化以及脫落細胞DNA 的變化情況。當前列腺發生惡性病變時，其脫落細胞DNA 的變化特征在臨床上提供了診斷依據。見圖1。

3討論

目前診斷前列腺癌的方法有 PSA 的檢查、直腸指檢和前列腺穿刺活檢。臨床上常用來診斷前列腺癌的金標準是進行前列腺穿刺活檢，由于前列腺穿刺活檢時組織較少，且為微小的癌灶，在光鏡下就很難區分良性與惡性的變化[5]。但目前前列腺穿刺活檢技術很難診斷早期前列腺癌，因此利用FISH 技術的檢測可以早期準確地對前列腺癌進行篩查和診斷。

本次研究結果顯示，患病組精液中精子常規各項指數均低于正常組，精子畸形率的變化也明顯增大（P<0.05）;用熒光原位雜交技術檢測發現患有前列腺疾病的患者，其精液精子染色體都發生了異常變化，其中前列腺疾病中患有前列腺癌患者的精液精子染色體在數目和結構上都不同程度的發生了變化，導致精子畸形率升高，男性不育率也隨之發生變化。究其原因，精液常規分析是對精液理學檢查和動力學及形態學進行分析，但由此來判斷其男性生育能力很不全面，它只能確定患者精液精子的質量問題。而臨床上在分析男性不育患者精子質量來診斷和治療其患者時沒有考慮到細胞遺傳學異常在臨床上導致男性不育的因素。熒光原位雜交技術是一種利用熒光物質依靠核酸探針雜交的原理在核中或染色體中顯示DNA（或 RNA）序列位置的方法，根據堿基互補配對的原則，將已知的熒光素標記的單鏈DNA（或 RNA）與待檢材料中未知的單鏈DNA（或 RNA）進行特異性結合，形成可被檢測的雜交雙鏈核酸。該技術安全、速度快、靈敏度高、檢測信號強、雜交特異性高、能同時顯示多種顏色等，不僅能顯示細胞中期分裂相，還能顯示間期核[6-8]。其可以通過檢測精子染色體的異常變化來對診斷男性不育的病因和指導分析臨床治療，在診斷前列腺炎時必須對泌尿生殖系統及直腸進行全面檢查，利用新興的熒光原位雜交技術檢測其染色體的特異變化，確定疾病類型，針對病因選擇其治療方案，為男性不育等方面提前做好預防與治療。

綜上所述，熒光原位雜交技術能準確檢測分析前列腺疾病患者精液精子染色體的異常特征變化，在臨床上可用于早期篩查前列腺疾病和早期診斷前列腺癌，以及治療、監測前列腺癌的預后和復發情況;也可鑒別診斷發生男性不育癥的原因。因此，熒光原位雜交技術在臨床應用方面還有更好的發展前景。

參考文獻

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[8] 《熒光原位雜交檢測技術共識》編寫組 . 熒光原位雜交檢測技術共識 [J]. 中華病理學雜志，2019，48（9）：677-681.

（收稿日期：2021-03-23）