藏藥甲地然果中化學成分、微量元素及礦物元素含量測定方法研究進展*

劉學良，陳 鵬，韓達斌，俞雅瓊，祝艷年，劉海青

（青海省食品藥品監督管理局食品藥品審評中心，青海 西寧 810007）

甲地然果［1－2］又名吉合斗拉果瑪和賈滴仁高瑪［3］，為龍膽科Gentianaceae花錨屬植物橢圓葉花錨Halenia ellipiticaD.Don的干燥地上部分，味苦，性寒，清熱利濕，平肝利膽，為藏醫藥系統中用于治療肝膽系統疾病的常用藥材品種“蒂達”的主要原植物之一，泛稱藏茵陳［4］，現收載于《衛生部藥品標準·藏藥（第一冊）》［1］。目前已從橢圓葉花錨中分離得到了酮及其苷類、黃酮類、環烯醚萜類、三萜類和生物堿等成分［5－6］。在此，綜述了橢圓葉花錨化學成分的含量測定方法，為更好研究、開發、利用橢圓葉花錨提供參考。

1 主要化學成分、微量元素及礦物元素含量測定

紀蘭菊等［7］以甲醇為溶劑對橢圓葉花錨成分進行加熱回流提取，再經C18硅膠小柱做脫脂處理，以VP－ODS C18柱為色譜柱，乙腈－水－0.1%磷酸溶液為流動相進行梯度洗脫，采用HPLC法測定橢圓葉花錨中青蘭苷、去甲氧基花錨苷和花錨苷的含量。結果表明，野生花錨藥材中去甲氧基花錨苷含量高于花錨苷，栽培花錨中花錨苷和去甲氧基花錨苷含量與野生花錨無明顯差異，初步證明栽培植物藏藥花錨可代替野生花錨入藥。

王宏［8］、王瓊［9］分別以三氯甲烷為溶劑加熱回流提取乙肝健片（A）橢圓葉花錨為原料的單方制劑中的2種酮類成分，以C18柱為色譜柱，以乙酸乙酯－甲醇（70∶30，V/V）為流動相，采用HPLC法測定2種酮類成分（1－羥基－2，3，5，7－四甲氧基酮和1－羥基－2，3，5－三甲氧基酮）的含量。

俞培忠等［10］以甲醇為溶劑對橢圓葉花錨藥材進行超聲提取，以Kromasil C18柱為色譜柱，以0.01 mol/L磷酸氫二鉀溶液（pH8.0）－甲醇（20∶80，V/V）為流動相，采用HPLC法測定橢圓葉花錨中4種酮類成分（1－羥基－2，3，5－三甲氧基酮，1－羥基－2，3，4，5－四甲氧基酮，1－羥基－2，3，7－三甲氧基酮，1－羥基－2，3，4，7－四甲氧基酮）的含量，結果4個酮類成分的含量分別為0.38%，0.82%，0.28%，0.21%。

古銳等［11］以90%甲醇（酸水解）為溶劑對不同產地的橢圓葉花錨藥材進行水浴回流提取，以Welchrom C18柱為色譜柱，以乙腈－水（43∶57，V/V）為流動相，采用HPLC法測定橢圓葉花錨中4種酮類成分（1－羥基－2，3，4，7－四甲氧基酮，1－羥基－2，3，7－三甲氧基酮，1－羥基－2，3，4，5－四甲氧基酮，1－羥基－2，3，5－三甲氧基酮）的含量。結果不同產地橢圓葉花錨藥材中4種酮類成分在植株花和葉中的含量高于莖和根，水解后前者的含量約為后者的4倍，提示在藥材采集后的干燥、儲存過程中應注意避免因花、葉脫落而導致藥材質量降低。

申曉娟等［12］以甲醇為溶劑對橢圓葉花錨、花錨藥材進行超聲提取（提取液冷置后過濾除去雜質），以Kromasil C18柱為色譜柱，以甲醇－水（65∶35，V/V）為流動相，采用反相高效液相色譜（RP－HPLC）法測定2種藥材中異龍膽黃素（1，3－二羥基－7－甲氧基酮）的含量。結果表明，2種藥材中異龍膽黃素的含量相差較大。

馮麗娟等［13］以甲醇為溶劑，對不同時間段采集的野生和栽培橢圓葉花錨藥材（C18硅膠小柱除去色素）進行回流提取，以VP－ODS C18柱為色譜柱，乙腈－0.1%磷酸溶液（梯度洗脫）為流動相，采用RP－HPLC法測定含量。結果表明，夏季采收的栽培與野生藥材中有效成分的含量最高，秋季采收的最低；人工管理措施不同等因素可能造成去甲氧基花錨苷、花錨苷等有效成分含量的差異。

王琰等［14］以甲醇為溶劑對橢圓葉花錨藥材進行超聲提取（提取液離心處理），以Alltima C18柱為色譜柱，乙腈－0.5%磷酸溶液（梯度洗脫）為流動相，大氣壓化學電離（APCI）為離子源，正離子為掃描模式，采用HPLC－DAD－MS法測定采集和市售橢圓葉花錨中6種酮類成分，即5個酮苷元［1－羥基－2，3，5－三甲氧基－酮（HM－1），1－羥基－2，3，4，7－四甲氧基－酮（HM－2），l－羥基－2，3，4，5－四甲氧基－酮（HM－3），1，7－二羥基－2，3，4，5－四甲氧基－酮（HM－4），l，5－二羥基－2，3－二甲氧基－酮（HM－5）］及1個酮苷1－O－［β－D－木糖－（1－6）－β－D－葡糖］－2，3，5－三甲氧基－酮（HM－2－10）的含量。結果表明，采集樣品中酮苷（HM－2－10）的含量明顯高于市售樣品，雖然不同樣品中酮的含量差異較大，但所有藥材中均以HM－1和HM－3的含量最高，HM－4和HM－5的含量最低。

吉文鶴等［15］以甲醇為溶劑對不同時間段采集的野生和栽培橢圓葉花錨藥材（C18硅膠小柱除去色素）中的成分進行回流提取，以VP－ODS C18柱為色譜柱，乙腈－0.1%磷酸溶液（梯度洗脫）為流動相，采用RP－HPLC法測定花錨中花錨苷和去甲氧基花錨苷的含量。結果表明，去甲氧基花錨苷的含量高于花錨苷，且2種苷的含量由6月至9月逐漸降低。

1.2 黃酮類化合物

黃酮類化合物的基本骨架為C6—C3—C6，包括黃酮類、二氫黃酮類、異黃酮類、查耳酮類、黃酮醇類、橙酮類、黃烷醇類等，具有抗心肌缺血、降壓、抗胃潰瘍、保護神經、保護生殖系統、抗炎、抗腫瘤、降血糖等藥理學作用［16］。橢圓葉花錨中的黃酮類成分主要有5－羥基－2－甲氧基色原酮、木犀草素－7－O－龍膽雙糖苷、芹菜素－7－O－龍膽雙糖苷、木犀草素－7－O－β－D－葡萄糖苷等化合物［17］。楊曉泉等［18］以甲醇為溶劑，在50℃條件下超聲提取橢圓葉花錨樣品中的成分，以Thermo Syncronis－C18柱為色譜柱，以乙腈－0.04%磷酸溶液（梯度洗脫）為流動相，采用HPLC法測定云南3個產地橢圓葉花錨中芒果苷的含量，并與其他“蒂達”類藥材進行比較。結果表明，橢圓葉花錨作為藏藥“蒂達”在民間使用最廣泛的基原植物，與傳統對藏藥“蒂達”的認識保持一致。

1.3 環烯醚萜及其他萜類化合物

橢圓葉花錨中的環烯醚萜類化合物包括獐牙菜苦苷、獐牙菜苷、龍膽苦苷，均為龍膽科植物的重要活性成分，具有保肝、調脂、降血糖、抗炎、抗腫瘤、保護神經等多種藥理學作用，對肝臟疾病，尤其是治療高血糖、高脂血癥療效較好，主要通過絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號途徑、膽汁酸合成通路、過氧化物酶體增殖物激活受體（PPAR）信號通路產生藥效。同時，具有抗腫瘤和保護神經等生物活性［19］。齊墩果酸和熊果酸等三萜類化合物具有保肝、護肝、降低轉氨酶、增加白細胞、清熱、消炎、抑菌等作用［20－21］。熊果酸除具有抗促癌、抗突變、抗氧化作用外，還具有誘導消化道腫瘤細胞、白血病細胞凋亡作用［22］。目前，主要采用HPLC法測定萜類化合物的含量。

高光躍等［23］以甲醇為溶劑對橢圓葉花錨樣品中的成分進行超聲提取，以水－甲醇－異丙醇－四氫呋喃（65∶30∶5∶1，V/V/V/V）為流動相，采用HPLC法測定橢圓葉花錨中3種環烯醚萜苷類成分（獐牙菜苷、獐牙菜苦苷、龍膽苦苷）的含量，并與其他“蒂達”類藥材進行比較。結果表明，橢圓葉花錨外形與獐牙菜屬植物極為相似，在西南地區二者常混淆使用，但其色譜圖與獐牙菜屬植物相差很大，且不含龍膽苦苷，故建議二者區別使用。

俞青芬［24］以甲醇為溶劑對不同產地橢圓葉花錨樣品中的成分進行超聲提取，以Kromasil C18柱為色譜柱，以甲醇－0.04 %磷酸溶液（梯度洗脫）為流動相，采用HPLC法測定青海省樂都和循化兩地區野生橢圓葉花錨中2種環烯醚萜苷類成分（落干酸和龍膽苦苷）的含量。結果表明，樂都地區樣品中落干酸的含量最高，循化地區樣品中龍膽苦苷的含量最高。

楊慧玲等［25］以無水乙醇為溶劑對橢圓葉花錨中的成分進行超聲提取，以Phenomenex Kromasic C18柱為色譜柱，以甲醇－水－磷酸（94∶4∶2，V/V/V）為流動相，采用HPLC法測定栽培條件下不同生長期、野生狀態下不同海拔的橢圓葉花錨中齊墩果酸的含量。結果表明，齊墩果酸的含量受物候期和海拔變化的影響，花期階段熊果酸含量最高；橢圓葉花錨中齊墩果酸的含量隨海拔的增加而增加；栽培藥材的含量低于野生藥材。

李志軍［26］、朱鵬程等［27］均以95%乙醇為溶劑對不同產地橢圓葉花錨中的成分進行超聲提取，以Thermo C18柱為色譜柱，以甲醇－0.4%磷酸溶液（85∶15，V/V）為流動相，采用HPLC法測定青海省青沙山、大通寶庫鄉兩地野生橢圓葉花錨中2種三萜類成分（熊果酸、齊墩果酸）的含量。結果表明，青沙山產地藥材中熊果酸和齊墩果酸的含量較高，2個產地花錨中熊果酸的含量均高于齊墩果酸。

馮京等［28］以甲醇為溶劑對橢圓葉花錨中的成分進行超聲提取，以Diamonsl C18柱為色譜柱，以甲醇－0.5%磷酸水溶液（85∶15，V/V）為流動相，采用HPLC法測定橢圓葉花錨中2種三萜類成分（熊果酸、齊墩果酸）的含量。結果表明，溫度對花錨藥材中齊墩果酸和熊果酸的分離度影響最大，低溫會延長組分保留時間，增大分離度，20℃為最佳柱溫；流速為0.8 mL/min時可提高分離度，同時能保持良好的峰形。

1.4 揮發油類化合物

楊紅澎等［29］采用氣相色譜質譜（GC－MS）技術和參考美國國家標準與技術研究院（NIST）質譜庫，首次從橢圓葉花錨的揮發油中發現并鑒定了其中的51種成分，并采用色譜峰面積歸一化法計算了各成分的相對含量。結果表明，絕大部分檢出物為醇、酯、酮、酸類化合物，其中含量在1%以上的組分有17種，占揮發油總量的51.56%，通過鑒定，初步明確了其揮發油的主要成分及含量。

1.5 微量元素及礦物元素

必需微量元素是人體代謝和健康生存不可缺少的，鈣可降低毛細血管通透性，增加毛細血管壁的致密度，減少滲出，具有消炎、消腫、抗過敏作用；鋅與人體內多種酶、核酸及蛋白質的合成密切相關；鐵是血紅蛋白、肌紅蛋白和某些酶的重要組成部分［30］；銅、錳是許多酶的組分或活化中心；銅、鋅、錳、鐵等元素對機體免疫功能均有重要影響；鎂是生物體內多種酶的激活劑，對周圍血管有舒張作用；鉀、鈉對維持體液的正常滲透壓及酸堿平衡、細胞的新陳代謝、神經肌肉的興奮性均有重要意義［31］。

巨占云等［32］采用主成分分析法對青海省不同地區花果期野生橢圓葉花錨藥材中銅、鋅、鐵、鈷、錳、鎳等微量元素含量進行分析。結果表明，不同地區野生橢圓葉花錨的微量元素含量差異較大，對測定數據進行綜合分析，進一步說明了微量元素是決定中藥功效的主要因素，提示微量元素含量和中藥功效之間存在相關性。

牛迎鳳等［33］采用原子吸收光譜法（空氣－乙炔火焰）測定了橢圓葉花錨中8種微量元素的含量，并與其他6種藏藥材的含量進行了比較。結果表明，橢圓葉花錨中的鈣、銅、鐵、錳、鋅、鉀、鎂、鈉含量分別為0.44，0.014，0.16，4.3，2.2，0.014，1.7，0.041 g/kg，7種藏藥材中鉀、鎂、鈉元素的含量普遍較高，橢圓葉花錨中鋅元素的含量最高。

李天才等［34－35］采用原子吸收光譜法對青海省不同地區野生橢圓葉花錨中6種微量元素的含量進行了測定。結果不同地區花果期野生橢圓葉花錨中銅、鋅、鐵、錳、鈷、鎳等微量元素含量隨生長地區不同而有差異，同一元素在不同地區的含量相差數倍，表明野生青海橢圓葉花錨中微量元素含量具有地區性特征；各種微量元素含量與植物生長的土壤、水分、日照、氣候等生態因子密切相關；生長周期內不同微量元素之間的協同性和拮抗性相互作用較復雜。

李佩佩等［36］采用微波消解－電感耦合等離子體－發射光譜（ICP－OES）法測定了橢圓葉花錨中21種礦物元素的含量，并與花錨進行了比較。結果表明，橢圓葉花錨中鈣、鎂含量較高，其鈣含量是花錨的1.6倍；鈹、鎘、鈷、鋰、鉬、鉛、錫、鈦8種元素中鈣和鎂的含量基本接近；其余11種元素在橢圓葉花錨中含量較低。同時，參考相應標本采集地的土壤背景值，推測植物中元素含量與其所處生長環境有關。

2 問題與展望

受生長環境、土壤性質、采收時間、晾曬加工等多方面因素影響，橢圓葉花錨中的成分種類、含量等有所不同，表現為不同產區，甚至是同一產區的藥材質量存在一定差異。結果發現，花、葉部位中酮類成分含量明顯高于莖、根部位，提示在藥材采集、干燥、儲存過程中，要避免因花、葉脫落導致藥材質量降低的情況發生；花期后抗肝炎主要活性成分（甲氧基花錨苷、花錨苷、熊果酸等）含量逐漸降低，這與部頒藏藥標準中花期采收的規定相吻合；隨著海拔的上升，齊墩果酸等成分含量呈上升趨勢，可能與其生長環境的土壤、氣候有關，還需進一步研究；野生橢圓葉花錨藥材中酮類成分與栽培品接近，鑒于其在部分藏區被列為三級瀕危藏藥材，應在可持續利用的前提下加強橢圓葉花錨人工種植方面的研究，用栽培品代替野生藥材，以便更好地保護和利用資源。