結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)、結(jié)核分枝桿菌抗體檢查應(yīng)用于肺結(jié)核患者診斷中的價(jià)值對(duì)比

黃銀娜

肺結(jié)核是由結(jié)核分枝桿菌感染肺部導(dǎo)致的常見(jiàn)慢性傳染性疾病[1]。隨著病情的進(jìn)展，可引起呼吸困難、氣促、咯血，嚴(yán)重者可危及生命，故對(duì)該疾病進(jìn)行早期診斷、治療尤為重要[2-3]。臨床診斷肺結(jié)核的金標(biāo)準(zhǔn)為痰涂片、痰培養(yǎng)尋找結(jié)核分枝桿菌，但該檢查耗時(shí)、費(fèi)力，且陽(yáng)性率低，易漏診、誤診，耽誤治療[4]。目前結(jié)核感染T 細(xì)胞斑點(diǎn)（T-SPOT.TB）試驗(yàn)主要通過(guò)檢測(cè)結(jié)核患者機(jī)體內(nèi)活化的特異性T 細(xì)胞，可對(duì)潛伏期、疑似結(jié)核的患者進(jìn)行篩查[5]。結(jié)核分枝桿菌抗體（TB-Ab）檢查通過(guò)檢測(cè)機(jī)體血清中所含的IgG 抗體，但對(duì)于處于靜止期、既往感染結(jié)核桿菌后產(chǎn)生抗體仍存留于機(jī)體亦檢測(cè)陽(yáng)性率[6-7]。為尋找快速、可靠的早期診斷肺結(jié)核患者的方法，本研究選取120 例患者作為研究對(duì)象，探討T-SPOT.TB 試驗(yàn)與TB-Ab 檢查對(duì)肺結(jié)核診斷價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018 年6-12 月本院收治的活動(dòng)性肺結(jié)核患者80 例作為肺結(jié)核組。納入標(biāo)準(zhǔn)：明確診斷為肺結(jié)核患者[8]；年齡＞18 歲；臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他呼吸系統(tǒng)疾病患者；既往未接受系統(tǒng)抗結(jié)核藥物治療。另選取同期本院收治的非結(jié)核病患者40 例作為對(duì)照組。所有患者及家屬均知情同意并簽署知情同意書(shū)，本研究已經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法 所有患者均進(jìn)行TB-Ab 檢查與T-SPOT.TB試驗(yàn)。

1.2.1 T-SPOT.TB 試驗(yàn) 選取真空采血管（含肝素抗凝）采集患者約8 mL 外周靜脈血，充分混勻后室溫（18～25 ℃）保存4 h 內(nèi)進(jìn)行送檢，嚴(yán)格按照使用說(shuō)明操作，首先分離單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs），其次是單個(gè)核細(xì)胞洗滌和計(jì)數(shù)，然后制備工作濃度細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液和抗原加入微孔培養(yǎng)板進(jìn)行培養(yǎng)。選擇TB 特異性ESAT-6（抗原A）、CFP-10（抗原B）肽段作為刺激原。孵化后，選擇PBS 洗滌微孔板并加入酶標(biāo)抗體，再洗滌微孔板加入底物反應(yīng)液，最后采用ELISPOT 讀板儀對(duì)斑點(diǎn)數(shù)進(jìn)行閱讀、統(tǒng)計(jì)。陽(yáng)性診斷標(biāo)準(zhǔn)，其中ESAT-6（A 孔）、CFP-10（B孔）任一孔內(nèi)檢測(cè)出現(xiàn)以下情況之一即診斷陽(yáng)性：（1）對(duì)照孔內(nèi)斑點(diǎn)數(shù)≥6 時(shí)且抗原A 或B 孔斑點(diǎn)數(shù)≥2×（空白對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)）；（2）對(duì)照組孔內(nèi)斑點(diǎn)數(shù)＜6 時(shí)，且（抗原A 或B 孔斑點(diǎn)數(shù)）-（空白對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)）≥6。如果上述標(biāo)準(zhǔn)不符合且陽(yáng)性質(zhì)控對(duì)照孔正常時(shí)檢測(cè)結(jié)果為陰性。檢測(cè)試劑盒由英國(guó)牛津大學(xué)生產(chǎn)，上海復(fù)興醫(yī)藥股份有限公司提供，各檢測(cè)步驟按照說(shuō)明書(shū)嚴(yán)格規(guī)范執(zhí)行。

1.2.2 TB-Ab 檢查 采用膠體金免疫層析技術(shù)檢測(cè)患者血清、血漿或外周血中的結(jié)核分枝桿菌抗體IgG，各檢測(cè)步驟按照說(shuō)明書(shū)嚴(yán)格規(guī)范執(zhí)行，加入標(biāo)本及稀釋液，仔細(xì)觀察顯色情況，明確檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：（1）反應(yīng)孔中顯現(xiàn)紅色質(zhì)控線（C）和紅色檢測(cè)線（T）的為陽(yáng)性，說(shuō)明檢出結(jié)核分枝桿菌IgG 抗體；（2）反應(yīng)孔中只顯現(xiàn)紅色質(zhì)控線（C）為陰性，說(shuō)明未檢出結(jié)核分枝桿菌IgG 抗體；（3）反應(yīng)孔中未顯現(xiàn)紅色質(zhì)控線（C），結(jié)果無(wú)效，表示操作失誤或試劑失效，應(yīng)進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)。檢測(cè)試劑盒北京健乃喜生物技術(shù)有限公司。

1.3 觀察指標(biāo) 計(jì)算并比較T-SPOT.TB 試驗(yàn)與TB-Ab 檢查診斷肺結(jié)核的靈敏度、特異度、診斷準(zhǔn)確率、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值及陰性預(yù)測(cè)值。比較肺結(jié)核組中涂陽(yáng)、涂陰結(jié)核患者與對(duì)照組T-SPOT.TB 試驗(yàn)斑點(diǎn)計(jì)數(shù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 20.0 軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（）表示，比較采用t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料 肺結(jié)核組男48 例，女32 例；平均年齡（52.12±5.01）歲。其中涂陽(yáng)肺結(jié)核34例，涂陰肺結(jié)核46 例。對(duì)照組男27 例，女13 例；平均年齡（54.62±3.03）歲，其中肺部感染23 例，慢性支氣管炎6 例，慢性阻塞性肺疾病5 例，其他疾病（包括肺癌、呼吸道出血、病毒性感冒等）6 例。兩組性別、年齡比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

2.2 T-SPOT.TB 試驗(yàn)診斷結(jié)果 120 例患者中陽(yáng)性72 例，陰性48 例。其診斷的靈敏度87.50%（70/80）、特異度95.00%（38/40）、診斷準(zhǔn)確率90.00%（108/120）、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值97.22%（70/72）、陰性預(yù)測(cè)值79.17%（38/48）。見(jiàn)表1。

表1 T-SPOT.TB試驗(yàn)診斷結(jié)果 例

2.3 TB-Ab 檢查診斷結(jié)果 120 例患者中陽(yáng)性62例，陰性58 例。其診斷的靈敏度67.50%（54/80）、特異度80.00%（32/40）、準(zhǔn)確度71.67%（86/120）、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值87.10%（54/62）、陰性預(yù)測(cè)值55.17%（32/58）。見(jiàn)表2。

表2 TB-Ab檢查診斷結(jié)果 例

2.4 兩種檢查方法診斷效能比較 T-SPOT.TB 試驗(yàn)診斷肺結(jié)核的靈敏度、特異度、診斷準(zhǔn)確率、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值及陰性預(yù)測(cè)值均高于TB-Ab 檢查，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表3。

2.5 涂陽(yáng)、涂陰結(jié)核患者與對(duì)照組T-SPOT.TB 試驗(yàn)斑點(diǎn)計(jì)數(shù)比較 涂陽(yáng)、涂陰結(jié)核患者T-SPOT.TB試驗(yàn)A、B 孔內(nèi)斑點(diǎn)計(jì)數(shù)均高于對(duì)照組，其中涂陽(yáng)結(jié)核患者均高于涂陰患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表4。

表3 兩種檢查方法診斷效能比較 %

表4 涂陽(yáng)、涂陰結(jié)核患者與對(duì)照組T-SPOT.TB試驗(yàn)斑點(diǎn)計(jì)數(shù)比較[個(gè)，（）]

表4 涂陽(yáng)、涂陰結(jié)核患者與對(duì)照組T-SPOT.TB試驗(yàn)斑點(diǎn)計(jì)數(shù)比較[個(gè)，（）]

*與涂陽(yáng)組比較，P＜0.05；#與涂陰組比較，P＜0.05。

3 討論

肺部是結(jié)核分枝桿菌感染人群最常累及的臟器之一，當(dāng)機(jī)體免疫功能下降后，常可導(dǎo)致肺結(jié)核[9-10]。世界衛(wèi)生組織于2016 年對(duì)全球確診為肺結(jié)核患者進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，總數(shù)約1 040 萬(wàn)，而中國(guó)肺結(jié)核發(fā)病人數(shù)高居世界第三位[11]。而實(shí)際結(jié)核分枝感染人數(shù)遠(yuǎn)超過(guò)該數(shù)值，大部分患者感染后無(wú)明顯臨床癥狀，導(dǎo)致漏診、誤診，嚴(yán)重影響肺結(jié)核的治療[12]。因此如何早期快速、準(zhǔn)確的診斷肺結(jié)核，對(duì)該疾病的病情進(jìn)展、預(yù)后意義重大。細(xì)菌學(xué)檢查仍是肺結(jié)核診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但結(jié)核菌涂片檢測(cè)靈敏度較低，易引起漏診，而結(jié)核菌培養(yǎng)周期需6～8 周，均較為局限[13]。而TB-Ab 檢查、T-SPOT.TB 試驗(yàn)具有操作簡(jiǎn)單、快速、可重復(fù)性等優(yōu)勢(shì)，目前均廣泛用于臨床，但兩者在臨床中選擇存在爭(zhēng)議[14]。本研究選取120 例研究對(duì)象進(jìn)行分析，比較T-SPOT.TB 試驗(yàn)與TB-Ab 檢查對(duì)肺結(jié)核的診斷價(jià)值，旨在為臨床選擇提供一定價(jià)值。

T-SPOT.TB 試驗(yàn)屬于細(xì)胞免疫檢查技術(shù)，患者受結(jié)核桿菌感染后，機(jī)體外周T 淋巴細(xì)胞參與免疫應(yīng)答，受結(jié)核桿菌特異抗原激活后，即轉(zhuǎn)化為效應(yīng)T 淋巴細(xì)胞，可分泌γ-干擾素，而T-SPOT.TB 試驗(yàn)則通過(guò)酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法進(jìn)行斑點(diǎn)計(jì)數(shù)推測(cè)機(jī)體是否存在分泌γ-干擾素的效應(yīng)T 淋巴細(xì)胞，以此診斷機(jī)體是否感染結(jié)核桿菌[15-16]。TB-Ab 檢查體液免疫檢查技術(shù)，患者受結(jié)核桿菌感染后，機(jī)體將產(chǎn)生一組免疫球蛋白，而TB-Ab 檢查則通過(guò)免疫應(yīng)答機(jī)制檢測(cè)機(jī)體抗結(jié)核免疫反應(yīng)，以此診斷機(jī)體是否感染結(jié)核桿菌[17]。

本研究結(jié)果顯示T-SPOT.TB 試驗(yàn)診斷肺結(jié)核的靈敏度為87.50%、特異度為95.00%、診斷準(zhǔn)確率為90.00%、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為97.22%、陰性預(yù)測(cè)值為79.17%；TB-Ab 檢查診斷肺結(jié)核的靈敏度為67.50%、特異度為80.00%、診斷準(zhǔn)確率為71.67%、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為87.10%、陰性預(yù)測(cè)值為55.17%。說(shuō)明T-SPOT.TB 試驗(yàn)與TB-Ab 檢查對(duì)肺結(jié)核均具有較高的診斷價(jià)值，且T-SPOT.TB 試驗(yàn)診斷效能更高，與文獻(xiàn)[18-19]結(jié)果基本一致。TB-Ab 檢查屬于體液免疫檢查技術(shù)，機(jī)體感染結(jié)核分枝桿菌后，由于該細(xì)菌的胞壁上38 kD 蛋白抗原定位于菌壁質(zhì)膜上，可有效刺激淋巴B 細(xì)胞而產(chǎn)生相應(yīng)的抗體。而TB-Ab 檢查則通過(guò)純化的結(jié)核分枝桿菌胞壁蛋白38 kD 抗原，檢測(cè)出相應(yīng)的IgG 抗體判斷結(jié)果。但可由于患者既往感染過(guò)結(jié)核桿菌、機(jī)體存在免疫抗體造成假陽(yáng)性，還可因?yàn)榛颊咦陨眢w質(zhì)導(dǎo)致假陰性，從而降低診斷靈敏度、特異度。T-SPOT.TB試驗(yàn)屬于細(xì)胞免疫檢查技術(shù)，機(jī)體遭結(jié)核分枝桿菌感染后，體內(nèi)免疫淋巴T 細(xì)胞則被激活，可產(chǎn)生一系列免疫反應(yīng)，而T-SPOT.TB 試驗(yàn)采用酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法可有效地檢測(cè)肺結(jié)核患者所含的活化的特異性T 淋巴細(xì)胞，可減少卡介苗接種、其他分枝桿菌所致的假陽(yáng)性結(jié)果，對(duì)潛伏期、疑似結(jié)核患者的篩查價(jià)值更高。

本研究結(jié)果顯示，涂陽(yáng)肺結(jié)核患者T-SPOT.TB試驗(yàn)A、B 孔斑點(diǎn)計(jì)數(shù)均高于涂陰肺結(jié)核患者與對(duì)照組（P＜0.05），與向瑜等[20]研究結(jié)果基本一致。這一結(jié)果可能提示T-SPOT.TB 試驗(yàn)斑點(diǎn)計(jì)數(shù)越多，則肺結(jié)核的活動(dòng)程度可能越高，通過(guò)斑點(diǎn)計(jì)數(shù)可有助于區(qū)別肺結(jié)核的活動(dòng)程度。

綜上所述，與TB-Ab 檢查比較，T-SPOT.TB 試驗(yàn)對(duì)肺結(jié)核的診斷價(jià)值更高；T-SPOT.TB 試驗(yàn)斑點(diǎn)計(jì)數(shù)越多，則肺結(jié)核的活動(dòng)程度可能越高，對(duì)臨床篩查提供一定理論依據(jù)。