CYFRA21-1基因多態性與肺癌臨床特征的相關性

胡蕓海 鄭琇山 張智光 陳志遠

肺癌為最常見惡性腫瘤之一，多由肺炎、肺部結節等發展而來。隨著醫學技術的發展，部分肺癌患者經過手術切除后具有很好的預后，但是5年生存率一直比較低[1-2]。主要在于肺癌患者的早期診斷率比較低，缺乏有效的診斷手段，很多患者在就診時已為中晚期[3-4]。細胞角蛋白19片段抗原(Cytokeratin 19 Fragment Antigen，Cyfra21-1)與肺癌的發生與發展密切相關，其主要分布于單層和復層上皮腫瘤細胞的胞漿內，當細胞發生凋亡或死亡時，其以溶解片段的形式釋放入血清中，導致血清Cyfra21-1表達水平上升[5-6]。rs17561作為Cyfra21-1基因上重要的功能性位點，屬于非同義單核苷酸多態性(single nucleotide polymorphism，SNP)，rs17561在多種炎癥和免疫性疾病中有著重要促進作用，其原因可能與rs17561的主要等位基因上C突變為次要等位基因A，形成的A114S具有促進Cyfra21-1釋放作用，進而促進炎癥反應，同時可能涉及人類疾病的易感性[7-8]。有研究發現，Cyfra21-1 rs17561基因多態性與惡性腫瘤有一定的相關性，可能是引起消化道腫瘤的一種遺傳因素[9-10]，但在肺癌中的報道比較少。本研究對Cyfra21-1 rs17561基因多態性與肺癌臨床特征的相關性進行分析。具體報道如下。

資料與方法

一、研究對象

本研究經醫院倫理委員會審核批準與所有患者的知情同意。選取本院2017年6月到2019年11月收治的肺癌患者78例作為肺癌組，納入標準：①肺癌的診斷標準；②年齡在30～70歲；③無嚴重的自身免疫系統、血液系統疾病；無嚴重的心腦血管、肝腎等器官組織疾病；④臨床與病理資料完整。排除標準：①合并其他惡性腫瘤；②伴有遺傳代謝性疾病；③伴有其他基因疾病患者。同期選擇性別相同(按比例匹配)和年齡相近的健康人群78例作為健康組。

肺癌組中男性40例，女性38例；年齡最小35歲，最大68歲，平均年齡54.29±2.18歲。健康組中男性41例，女37例；年齡最小35歲，最大68歲，平均年齡54.29±2.18歲。兩組患者的性別、年齡等一般資料對比差異無統計學意義(P>0.05)。

二、血清Cyfra21-1基因多態性檢測

清晨空腹靜脈抽取兩組患者的外周靜脈血2 ml，提取基因組DNA(上海生工公司提供)，放置于-20℃低溫箱保存備用。Taqman探針由大連TAKARA公司合成與提供，上游引物序列：5′-ACATTGCTCAGGAAGCTAAAAGGTG-3′，下游引物序列：5′-TGACCTAGGCTTGATGATTCTAAA-3′。采用Bio-Rad CFX manager軟件對Cyfra21-1 rs17561基因的基因型PCR擴增結果進行分析。

三、臨床特征調查

調查所有肺癌患者的臨床資料，包括年齡、性別、腫瘤最大直徑、病理類型、臨床分期與淋巴結轉移情況等。

四、統計方法

采用SPSS22.0軟件進行統計學分析，計數數據以%表示，組間比較采用卡方χ2檢驗或Fisher精確概率法檢驗；計量資料以均數±標準差表示，組間比較采用t檢驗，關聯性分析采用直線相關分析與二分類變量Logistic回歸分析(選入變量與剔除變量P值分別為0.05和0.1)，統計結果以P<0.05 表示差異有統計學意義

結 果

一、Cyfra21-1 rs17561基因多態性對比

Cyfra21-1 rs17561基因共有CC、CA、AA三種基因型，兩組人群的Cyfra21-1 rs17561基因分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律，因此研究對象具有群體代表性。兩組入選者的Cyfra21-1 rs17561基因型分布差異具有統計學意義(P<0.05)，肺癌組的Cyfra21-1 rs17561基因CC基因型比例顯著高于健康組(P<0.05)，肺癌組等位基因C頻率顯著高于健康組(P<0.05)(見表1)。

表1 兩組入選者的Cyfra21-1 rs17561基因型和等位基因分布比較[例(%)]

二、Cyfra21-1 rs17561基因型與肺癌臨床特征的關系

在肺癌組78例患者中，不同年齡、性別、病理類型患者的CC基因型構成比差異無統計學意義(P>0.05)，不同腫瘤最大直徑、臨床分期、淋巴結轉移患者的CC基因型構成比差異具有統計學意義(P<0.05)(見表2)。

表2 Cyfra21-1 rs17561基因CC基因型與肺癌臨床特征的相關性[例(%)]

三、Cyfra21-1 rs17561基因CC基因型的影響因素分析

將2.2單因素分析中有統計學意義的項目作為自變量并進行賦值,將Cyfra21-1 rs17561基因CC基因型設為因變量,進行Logistic多因素分析，結果顯示腫瘤最大直徑、臨床分期、淋巴結轉移為影響Cyfra21-1 rs17561基因CC基因型的主要因素(P<0.05)(見表3,4)。

表3 變量賦值表

表4 影響肺癌患者Cyfra21-1 rs17561基因CC基因型的多因素分析

討 論

當前隨著人類基因組計劃的深入開展，基因多態性逐漸成為研究熱點，其研究重點主要集中在啟動子區的多態性對基因表達的影響，可能關系到疾病易感性[11-12]。編碼區域的非同義突變是指位于編碼區可造成翻譯后相應氨基酸序列改變的單核苷酸突變，能改變蛋白質結構及功能，被普遍認為是增加疾病易感性的主要原因[13]。Cyfra21-1是細胞角蛋白家族成員之一，也是一個分子量為4kD的酸性細胞蛋白，由細胞角蛋白19片段的兩個單克隆抗體組成[14]。已有研究顯示肺癌患者的血清與胸水中CYFRA21-1濃度升高，其敏感性隨病情進展而發生變化，與肺癌的臨床分期、淋巴結轉移呈正相關。rs17561作為Cyfra21-1基因上的非同義突變，當主要等位基因C改變為次要等位基因A時，則可產生變異體A114S，從而將rs17561基因114位置上的編碼氨基酸由丙氨酸(Ala)轉變為絲氨酸(Ser)[15-16]。有研究顯示，Cyfra21-1 rs17561的次要等位基因能增強婦科腫瘤的易感性，還可增加子宮內膜異位癥的易感性。也有研究顯示Cyfra21-1 rs17561的次要等位基因可促進炎癥因子的釋放，增強免疫反應，從而提高炎性相關疾病的易感性[17-18]。本研究顯示兩組入選者的Cyfra21-1 rs17561基因型分布差異具有統計學意義(P<0.05)，肺癌組的Cyfra21-1 rs17561基因CC基因型比例顯著高于健康組(P<0.05)，肺癌組等位基因C頻率顯著高于健康組(P<0.05)，表明肺癌患者的rs17561基因CC基因型比例比較高。

目前臨床上仍以病理活檢作為肺癌診斷的金標準，但是其為一種創傷性檢查，臨床上的應用有一定的局限性，也比較難以反映患者的病理特征[19-20]。Cyfra21-1是肺鱗癌生存及復發的一種獨立預后因素，血清Cyfra21-1增高還可見于膽道癌、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌等腫瘤性疾病[21-23]。本研究顯示在肺癌組78例患者中，不同年齡、性別、病理類型患者的CC基因型比例對比，差異無統計學意義(P>0.05)，不同腫瘤最大直徑、臨床分期、淋巴結轉移患者的CC基因型比例對比，差異具有統計學意義(P<0.05)；Logistic回歸分析顯示腫瘤最大直徑、臨床分期、淋巴結轉移為影響Cyfra21-1 rs17561基因CC基因型的主要因素(P<0.05)。表明Cyfra21-1 rs17561基因CC基因型與肺癌患者的病理特征顯著相關，其影響機制可能與主要等位基因在機體發揮的某種調控作用有關[24-25]。本研究也存在一定的不足，沒有發現CYFRA21-1基因多態性調控肺癌的具體調控機制，且納入病例數量較少，需要后續進一步研究證實。

綜上所述，Cyfra21-1 rs17561基因在肺癌患者中呈多態性分布，Cyfra21-1 rs17561基因CC基因型與患者的臨床特征顯著相關。