4269例羊水MLPA非整倍體檢測結果分析

宋居杰 寧思思 溫圓圓 秦雪

摘要：目的 探討多重連接探針擴增技術（MLPA）聯合羊水染色體核型分析在產前檢測中的應用價值。方法 同時采用MLPA及染色體核型分析技術對4269例羊水進行非整倍體檢測。結果 兩種方法共檢出102例非整倍體，包含嵌合型非整倍體19例，在MLPA的提示下染色體核型分析額外檢出1例低比例嵌合體，除9例嵌合體僅在核型分析檢出外，其余結果基本一致，故兩種方法檢測結果的符合率為99.79%。結論 MLPA非整倍體技術聯合羊水染色體核型分析應用于非整倍體的產前檢測，可顯著縮短非整倍體的診斷周期，提高嵌合型非整倍體的檢出率。

關鍵詞：MLPA;非整倍體;核型分析;產前診斷;嵌合體

【中圖分類號】R4 ?【文獻標識碼】A ?【文章編號】1673-9026（2021）14--01

非整倍體是染色體數目異常的一種，即染色體數目的減少或者增加，主要包含單體綜合征、三體綜合征、嵌合體等[1]。臨床上的染色體非整倍體最常見于13、18、21、X和Y這5條染色體，約占產前診斷中有臨床意義的染色體異常的86%[2] 。染色體非整倍體異常發生于胎兒細胞可導致流產或出生缺陷[3]。染色體病目前并沒有很好的治療方法，對家庭和社會都帶來巨大的負擔，因而在產前診斷胎兒染色體非整倍體異常降低出生缺陷顯得尤為重要。MLPA技術是由 schouten 等[4]在2002年首先報道的，該技術高效、特異，在單管里可一次性完成至少40個核苷酸序列的檢測，主要針對大片段的缺失和重復突變，可用于染色體非整倍體的快速產前診斷。本研究主要探討MLPA 非整倍體檢測技術在常見染色體非整倍體中的應用價值。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2017年1月至2020年12月在玉林市婦幼保健院優生遺傳科進行產前優生遺傳咨詢的4269例符合產前診斷指征的孕婦，年齡 18-47 歲，孕周17-27w。在充分知情告知并簽署產前診斷知情同意書后進行羊膜腔穿刺并獲取羊水樣本20ml， 并分裝到3支15ml無菌離心管中，每支管6～8ml，其中2支用于細胞培養進行染色體核型分析，另1支用于MLPA檢測。

1.2 方法

1.2.1 染色體核型分析

羊水標本離心后棄上清，留約0.5 ml，加入4ml羊水培養基混勻后接種。選擇適宜時機行本實驗室常規細胞收集、低滲、固定、滴片、G顯帶及吉姆薩染色等處理。按人類細胞基因組學國際命名體系（ISCN）2016 版描述核型。

1.2.2 MLPA方法

按照本實驗室羊水細胞DNA提取、PCR擴增、毛細管電泳和結果分析等常規步驟進行。

2 結果

在4269例樣本中，4167例兩種方法均未檢測出染色體非整倍體異常。在檢出的102例常見染色體非整倍體異常樣本中，兩種方法共同檢出93例常見非整倍體異常，染色體核型分析比MLPA多檢出9例異嵌合型常見染色體非整倍體，總體符合率99.79%（4260/4269），102例異常結果分布情況見表1。

3 討論

產前診斷染色體異常的傳統方法是進行胎兒染色體核型分析[5]，核型分析也是診斷染色體非整倍體的金標準，但該方法檢測周期長、操作繁瑣、要求較高的操作技術，影響因素多，且最終的培養結果有時不一定能夠達到核型分析的要求從而能導致核型判讀失敗[6]。因此，臨床工作中迫切需要新的診斷技術來彌補染色體核型分析的缺陷[7]。MLPA是目前已報道的快速產前診斷技術之一，具有高通量、檢測時間短（可在收到標本 24-48h 后出結果），特異性好，靈敏度高等優點。

本研究中，羊水細胞培養及染色體核型分析成功率100%，MLPA檢測成功率100%，兩種方法均能在行業標準規定期限內得到結果。MLPA可在接收標本48h內得到結果，核型分析則需要20d，兩者聯合檢測，可以對MLPA方法提示異常的病例優先進行核型分析，最快能在2W左右得到核型分析的結果，大大提高了產前診斷的效率。

4269例樣本的檢測結果中，MLPA技術檢出常見染色體（21、18、13、X和Y染色體）非整倍體93例，結果均與核型分析一致，4167例未見異常，核型分析也未檢出常見（21、18、13、X和Y染色體）非整倍體，有9例嵌合體是核型分析發現，而MLPA未見異常，故兩種方法的結果符合率達到99.79%（4260/4269），與覃宋強等[8]報道的一致。其中MLPA檢出1例18號長臂的等臂異常，有了MLPA結果的驗證，染色體核型分析可以直接出具準確的結果，可見該技術對相關染色體的非平衡性結構異常也具有提示作用。

MLPA非整倍體檢測技術在染色體嵌合體中的應用。染色體嵌合體，即兩個或兩個以上不同細胞系同時存在于同一個體，在人類囊胚植入前后普遍存在，可能導致遺傳異常、流產、死產[9]。在本研究中，染色體核型分析共檢測出19例嵌合體，MLPA檢出其中的10例（52.6%）。其中7例嵌合體兩種方法的結果是一致的，3例染色體核型分析結果為性染色體嵌合體，MLPA結果提示為純合體，結果有所差異，其中1例染色體核型分析的結果為45，X[65]/46，X，+mar[35]，MLPA結果提示為45，X，可能是因為mar染色體并未攜帶基因，或者攜帶的基因不在MLPA的檢測范圍，由于45，X占大多數，遺傳咨詢可按特納綜合征進行;1例染色體核型分析的結果為45，X[48]/46，X，del（X）（p22.1）[41]，MLPA結果提示為45，X，可能是嵌合比例失真所致;1例染色體核型分析的結果為45，X[9]/47，XYY[42]，MLPA結果提示為47，XYY，嵌合比例較低，MLPA未能提示嵌合。Koope 等[10]研究認為 MLPA 能夠檢測出異常核型比例高于 20% 的嵌合體，本次研究MLPA檢出2例嵌合比例低于20%，其中1例嵌合比例只有5.7%，這個病例是在MLPA提示異常的情況下進行了加大計數分析，如果沒有MLPA結果的提示，很可能會漏診，給臨床帶來不夠準確的產前診斷結果。在MLPA未能準確提示的9例嵌合體中，僅有1例染色體核型分析結果嵌合比例>20%（22.2%），可能是由于羊水細胞經過培養，出現優勢生長，導致嵌合比例不真實。本次研究MLPA結果均在染色體核型結果之前得出，可以給核型分析工作提供更多的信息，提高嵌合體檢出率。

綜述所述，MLPA檢測方法操作簡單、周期短、結果準確，聯合染色體核型分析應用于常見染色體非整倍體的快速產前檢測，可大幅提高產前診斷效率，同時還可以提高染色體嵌合體的檢出率，為臨床遺傳咨詢提供更準確的診斷依據，對降低出生缺陷有重要意義。

參考文獻：

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