CXCR4、VEGF在非小細胞肺癌組織中的表達及意義

趙苑池 莫秋榮 易華宇 梁云彩 宋柳萍

摘要：目的探究非小細胞肺癌（NSCLC）組織中趨化因子受體-4（CXCR4）、血管內皮生長因子（VEGF）的表達及意義。方法回顧性分析2019.03～2020.02本院70例NSCLC組織標本及20例正常肺組織標本，均采用免疫組化SP法檢測CXCR4、VEGF的陽性表達，觀察兩種組織、不同TNM分期NSCLC組織中CXCR4、VEGF的表達情況，對比高表達率。結果NSCLC組織中CXCR4、VEGF的高表達率分別為42.86%、67.14%，均高于正常肺組織的5.00%、25.00%（P<0.05）;Ⅲ+Ⅳ期NSCLC組織中CXCR4、VEGF的高表達率分別為58.33%、80.56%，均高于Ⅰ+Ⅱ期的26.47%、52.94%（P<0.05）。結論CXCR4、VEGF在NSCLC組織中的表達水平高于正常肺組織，且與NSCLC患者的臨床分期存在一定的聯系。

關鍵詞：非小細胞肺癌;CXC趨化因子受體-4;血管內皮生長因子;TNM分期

【中圖分類號】R734.2 ?【文獻標識碼】A ?【文章編號】1673-9026（2021）14--01

非小細胞肺癌（NSCLC）是主要的肺癌類型，多數患者就診時已處于中晚期階段，所有肺癌患者的5年生存率僅達到19.7%，侵襲和轉移是臨床治療失敗的重要因素[1]。目前認為，趨化因子受體-4（CXCR4）參與腫瘤器官的特異性轉移，血管內皮生長因子（VEGF）在腫瘤的侵襲、轉移中發揮著重要作用。因此，了解NSCLC組織中上述指標的表達，對于疾病的早期診斷、治療及預后均有著積極意義。為進一步深入臨床對NSCLC的深入認識，本研究對NSCLC與正常肺組織、不同TNM分期NSCLC組織中CXCR4、VEGF的表達情況進行觀察，分析如下。

1 資料與方法

1.1一般資料

回顧性分析以免疫組化SP法檢測CXCR4、VEGF陽性表達的70例NSCLC組織標本及20例正常肺組織標本，對應的研究對象分別為NSCLC患者及肺部良性病變者，均選自2019.03～2020.02期間。納入標準：NSCLC患者及肺部良性病變者均經病理檢查確診;既往無惡性腫瘤病史;未接受過放療、化療;無其他肺部感染性疾病。排除標準：患免疫系統疾病;行姑息性切除者;術中未行淋巴結清掃者。NSCLC患者：男46例，女24例;年齡41～75歲，平均（60.23±6.59）歲;有吸煙史32例;TNM分期：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期分別為9、25、29、7例。肺部良性病變者：男12例，女8例;年齡41～75歲，平均（60.14±6.52）歲;有吸煙史8例。兩組性別、年齡、吸煙史對比無差異（P>0.05）。

1.2 方法

使用4%中性甲醛固定液對所有組織標本進行固定（6～48h），脫水包埋后石蠟切片，厚度3μm。采用免疫組化SP法進行檢測：切片65℃烤片30min以上;環保透明劑連續脫蠟10min×4;梯度乙醇洗脫環保透明劑5min×4，將切片在流水中沖洗5min;使用已稀釋成工作液的EDTA抗原修復液在電磁爐（2100W）上進行高壓抗原修復，噴氣后1.5～2min停止加熱;待高壓鍋自然冷卻10min后，用流水沖洗高壓鍋外壁加速冷卻取出切片;切片取出后在流水下沖洗1～3min;滅活內源性過氧化氫阻斷10min;PBS緩沖液浸洗3min×4;使用免疫組化筆標記切片組織范圍;滴加一抗CXCR4（abcam公司，稀釋濃度為1：150）、VEGF（福州邁新試劑），室溫孵育3h;PBS緩沖液浸洗切片3min×4;滴加二抗并在室溫下孵育15min;PBS緩沖液浸洗切片3min×4次;DAB顯色3～10min;流水浸洗1～5min;蘇木素染色10～30s;分化5s;返藍5s，梯度乙醇脫水透明后封片。實驗過程中設置陰性對照，使用PBS緩沖液代替一抗。嚴格按照試劑盒相關操作執行。

1.3觀察指標

于高倍視野下進行觀察，參照Andre評分標準，隨機選取5個高倍視野（×400），胞漿內觀察到一致的淡黃色至棕褐色顆粒為陽性，計算染色腫瘤細胞百分率。根據半定量方法，結合染色陽性細胞百分率及染色強度進行綜合評定，評定標準[2]：①陽性細胞：0分：陽性細胞占0%～5%;1分：陽性細胞占6%～30%;2分：陽性細胞占31%～60%;3分：陽性細胞占61%～100%;②染色強度：0分：無著色;1分：淡黃色;2分：棕色;3分：棕褐色。取上述兩項評分之和，總分0～3分：低表達;總分4～6分：高表達。①觀察NSCLC組織及正常肺組織中CXCR4、VEGF的表達情況;②觀察不同TNM分期NSCLC組織中CXCR4、VEGF的表達情況。

1.4 統計學處理

以SPSS21.0統計軟件進行分析，計數資料以%表示，采用X2檢驗;計量資料以（）表示，采用t檢驗，P<0.05代表差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩種組織中CXCR4、VEGF的表達情況

NSCLC組織中CXCR4、VEGF的高表達率分別為42.86%、67.14%，與正常肺組織中的5.00%、25.00%對比均有統計學差異（P<0.05），見表1。

2.2 不同TNM分期NSCLC組織中CXCR4、VEGF的表達情況

Ⅲ+Ⅳ期NSCLC組織中CXCR4、VEGF的高表達率分別為58.33%、80.56%，與Ⅰ+Ⅱ期的26.47%、52.94%對比均有統計學差異（P<0.05），見表2。

3 討論

近年來，靶向藥物的應用為惡性腫瘤患者提供一種新的治療途徑，在改善預后方面取得良好的效果，故趨化因子成為臨床研究的熱點。由于不同臨床分期，NSCLC的治療方案存在差異，而對于早期患者，其相對而言可采取手術治療，在促進預后方面有一定的積極意義。鑒于此，本研究主要從NSCLC組織與正常肺組織、NSCLC組織不同TNM分期兩個方面進行比較，為NSCLC的診斷及治療提供參考。

CXCR4是G蛋白耦聯的7次跨膜蛋白受體，可與配體基質細胞衍生因子（SDF-1）相結合，促進靶細胞支架的重構，CXCR4/SDF-1反應軸可能在胚胎發育、骨髓造血、細胞遷移、器官發育等病理生理過程中發揮著至關重要的作用[3]。高磊[4]等表示，CXCR4在NSCLC中呈高表達狀態;是否存在淋巴結轉移、不同TNM分期NSCLC組織中的CXCR4陽性率均存在顯著差異，證實該蛋白與NSCLC的發生、發展以及轉移有著密切聯系。本研究結果顯示，NSCLC組織中CXCR4的高表達率為42.86%，高于正常肺組織的5.00%;Ⅲ+Ⅳ期NSCLC組織中CXCR4的高表達率為58.33%，高于Ⅰ+Ⅱ期的26.47%，與上述研究相似，說明CXCR4在NSCLC組織中呈高表達，且與腫瘤的發展存在密切聯系。VEGF是一種血管生成促進因子，可促進內皮細胞增殖，誘導腫瘤血管生成，在腫瘤細胞的浸潤、轉移中發揮著重要作用，目前以VEGF為靶點的抗血管生成藥貝伐珠單抗用于晚期NSCLC的治療[5]。本研究發現NSCLC組織中VEGF的高表達率為67.14%，高于正常肺組織的25.00%;Ⅲ+Ⅳ期NSCLC組織中VEGF的高表達率為80.56%，高于Ⅰ+Ⅱ期的52.94%，提示VEGF在腫瘤的發生、發展中有著重要意義。

綜上所述，CXCR4、VEGF在NSCLC組織中呈高表達狀態，在腫瘤的發生、發展中有著一定的促進作用。

參考文獻：

[1]姚益，曾小飛，李衛，等.非小細胞肺癌中GPR120、VEGF的表達及臨床意義[J].臨床與實驗病理學雜志，2020，36（6）：671-676.

[2]熊海林，孫愛華，周思維.聯合檢測CXCR4與E-Cad在非小細胞肺癌中的表達與腦轉移的相關性研究[J].現代診斷與治療，2017，28（1）：1-3.

[3]陳曉東，任開明，段瓊玉，等.CCR7蛋白和 CXCR4蛋白表達水平與非小細胞肺癌患者的預后及相關性研究[J].河北醫藥，2016，38（3）：331-334.

[4]高磊，朱曉峰，喬峰，等.Ⅰ～Ⅱ期非小細胞肺癌組織中HIF-1α和 CXCR4的表達及臨床意義[J].醫學理論與實踐，2018，31（14）：2059-2060，2083.

[5]王晨亮，彭麗姿，周兵.非小細胞肺癌組織Smac、TLR、VEGF及其受體的表達變化研究[J].中國醫學創新，2021，18（25）：1-4.

課題名稱：崇左市科技計劃項目合同（崇科攻2019020）