阿克蘇地區禽流感抗體的檢測與分析

伍麥爾·麥海提，徐遠遠，阿迪萊·卡哈曼，布帕提買木·麥麥提，張秋林，陳薈旭，孫鵬亮，李蓮瑞★

（1.塔里木大學動物科學學院 843300；2.新疆生產建設兵團塔里木動物疫病診斷與防控工程實驗室 843300）

禽流感 （avian influenza） 是由禽流感A 型病毒 （avian influenza virus）引起，在各種家禽和野生鳥類中感染的高度接觸性傳染病[1]。 根據毒性大小，禽流感還可分低致病性和非致病性禽流感[2]。 其中能引起高致病性禽流感的主要為H5 和H7 亞型毒株[3]。H5 和H7 血清型可以引起高致病性禽流感，以高發病率，高死亡率為主要特征，并且這兩種血清型的病毒能夠在禽與禽，禽與人，人與人之間快速傳播，不管是禽類還是人類被傳染后都存在高燒持續不退的癥狀，甚至比較嚴重可能會就此喪命[4]。 因此，家禽進行禽流感抗體的檢測對預防禽流感的暴發至關重要。

本實驗為了準確掌握阿克蘇地區H5 和H7 亞型禽流感強制免疫效果，取阿克蘇地區八個縣一個市的屠宰場、交易市場、散養農戶以及規模化養殖場家禽血清并檢測其抗體水平。 通過這一環節，始終掌握禽流感的最新動態，將預防放在首位，對免疫狀況較差的禽類進行補免， 為后續免疫程序提供精準的指導與計劃，從而更好的預防和控制禽流感的暴發供科學依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 樣品采集 2020 年，從阿克蘇地區8 縣1 市的規模化養殖場、屠宰場、交易市場和散養戶的家禽中采集血清。 在取樣過程中，采集者應清楚并完整的記錄從哪采集的家禽、家禽的免疫情況、各個地方家禽血清采集的數量，以便為后期免疫提供準確方向。

1.1.2 主要試劑 H5、H7 亞型禽流感病毒的標準抗原、陰性和陽性血清均購自哈爾濱維科生物技術開發公司； 在無菌條件下，健康的公雞血液用肝素進行抗凝，1%的紅細胞懸液按常規制備和儲存，以備后續使用。

1.2 試驗方法

1.2.1 血凝（HA）試驗（微量法） 在微量反應板的第1～12 孔均加入0.025mL PBS，換滴頭。吸取0.025mL 抗原，加入第1 孔混勻。 從第一孔吸取0.025mL 抗原液加入第2 孔。 混勻后吸取0.025mL 加入第3 孔，如此進行對比稀釋至第11 孔，從第11 孔吸取0.025mL 棄之，換滴頭。每孔再加入0.025mL PBS。每孔均加入0.025mL 體積分數為1%雞紅細胞懸液。 振蕩混勻， 在室溫（20℃～25℃）下靜置40min 后觀察結果（如果環境溫度太高，可置4℃環境下）。 對照孔紅細胞將成明顯的鈕扣狀沉到孔底。

結果判定:將板傾斜，觀察紅細胞有無淚滴狀流淌。 完全血凝（不流淌）的抗原最高稀釋倍數代表1 個血凝單位（HAU）。 本試驗的一個血凝單位為1∶256。

1.2.2 血凝抑制（HI）試驗（微量法） 根據2.1 試驗結果配制4HAU 的抗原，以完全血凝的抗原最高稀釋倍數作為終點，終點稀釋倍數除以4 即為含4HAU 的抗原的稀釋倍數。 例如，如果血凝的終點滴定為1∶256，則4HUA 抗原的稀釋倍數應是1∶64（256除以4）。 在微量反應板的第1～11 孔加入0.025mL PBS，第12 孔加入0.05mL PBS。吸取0.025mL 血清加入第1 孔。充分混勻后吸取0.025mL 加入第2 孔，依次對倍稀釋至第10 孔，從第10 孔吸取0.025mL 棄 之。 1 ～11 孔 均 加 入 含4HAU 混 合 的 抗 原 液0.025mL，室溫約20℃靜置至少30min。每孔加入0.025mL 體積分數為1%的雞紅細胞懸液混勻，輕輕混勻，靜置約40min（室溫約20℃，若環境溫度太高可治4℃條件下進行），對照紅細胞將呈現鈕扣狀沉于孔底。

結果判定:以完全抑制4 個HAU 抗原的血清最高稀釋倍數作為HI 滴度。 如果HI≤3log2，抗體為陰性。HI≥4log2 為抗體陽性，符合抗體標準。

3 結果與分析

3.1 2020 年春季規模化養殖場禽流感免疫抗體水平

表1 2020 年春季規模化養殖場禽流感免疫抗體水平監測情況

從表1 的檢驗結果顯示，2020 年采自春季阿克蘇地區規模化養殖場中的家禽血清， 在H5 亞型禽流感免疫抗體檢測中，除了阿克蘇市H5 亞型禽流感免疫抗體合格率為90%以外，其他八個縣H5 亞型禽流感免疫抗體合格率均為100%，免疫效果較好；在H7 亞型禽流感免疫抗體檢測中，沙雅縣的H7 亞型禽流感免疫抗體合格率極低（55%）。其次，新和縣的H7 亞型禽流感免疫抗體合格率為95%，阿克蘇市是90%，其他縣H7 亞型禽流感抗體免疫良好。

3.2 2020 年春季屠宰場禽流感免疫抗體水平

表2 2020 年春季屠宰場禽流感免疫抗體水平監測情況

從表2 的檢測結果顯示，2020 年春季采自阿克蘇地區屠宰場中的家禽血清，在H5 亞型禽流感免疫抗體檢測中，除了溫宿縣H5 亞型禽流感免疫抗體合格率為90%以外，其他七個縣一個市H5 亞型禽流感免疫抗體合格率均為100%，免疫效果較好；在H7 亞型禽流感免疫抗體檢測中， 沙雅縣和新和縣的H7 亞型禽流感免疫抗體合格率較低，分別為40%和75%。 溫宿縣與阿瓦提縣的H7 亞型禽流感免疫抗體合格率為95%，低于其他H7 亞型禽流感免疫抗體合格率100%的縣市。

3.3 2020 年春季散養戶禽流感免疫抗體水平

表3 2020 年春季散養戶禽流感免疫抗體水平監測情況

從表3 的檢測結果顯示，2020 年春季采自阿克蘇地區散養戶的家禽血清，在H5 亞型禽流感免疫抗體檢測中，除了阿瓦提略低外，總體的免疫效果還是比較良好的；在H7 亞型禽流感免疫抗體檢測中，沙雅（60%）、新和（70%）、阿瓦提（75%）偏低，有待于進一步補免，其他縣市免疫效果良好。

3.4 2020 年春季交易市場禽流感免疫抗體水平

表4 2020 年春季交易市場禽流感免疫抗體水平監測情況

從表4 的檢測結果顯示，2020 年春季采自阿克蘇地區交易市場的家禽血清，在H5 亞型禽流感免疫抗體檢測中，新和縣的H5 亞型禽流感免疫情況還有待加強， 阿瓦提的H5 亞型禽流感出現了很明顯的免疫不合格問題，應提醒注意防患；在H7 亞型禽流感免疫抗體檢測中，沙雅縣和阿瓦提縣免疫效果仍然不佳，拜城縣的免疫情況也需加強。

3.5 2020 年春季H5 亞型禽流感免疫抗體水平

表5 2020 年春季H5 亞型禽流感免疫抗體監測情況匯總

從表5 的檢測結果顯示，2020 年春季采自阿克蘇地區的家禽血清，總體來看，H5 亞型禽流感免疫抗體獲得情況良好。 但有個別縣免疫效果沒有達到100%，新和縣、阿克蘇市、溫宿縣、阿瓦提縣免疫過程可能進行的不完善，需要進一步加強免疫。

3.6 2020 年春季H7 亞型禽流感免疫抗體水平

表6 2020 年春季H7 亞型禽流感免疫抗體監測情況匯總

從表6 的檢測結果顯示，2020 年春季采自阿克蘇地區的家禽血清，H7 亞型禽流感免疫抗體的獲得情況較差。 其中，沙雅縣對于H7 亞型禽流感的免疫抗體獲得情況極差，需及時進行補免措施。 結合表5 分析，庫車、烏什以及柯坪縣對禽流感的防控很好；沙雅、阿瓦提縣需要防范禽流感的潛在威脅。

4 討論

本次監測結果顯示， 阿克蘇地區8 個縣和1 個市的禽流感整體免疫效果較好， 少數縣H7 亞型禽流感的免疫效果仍需加強，應盡早加強免疫，以抵抗野生毒株的感染。 本試驗結果表明，不同飼養條件下的免疫效果具有些許差異。 禽流感抗體水平在規模化養殖場是最高的。 造成這種現象的原因可能是規模化養殖場的衛生環境干凈整潔，通風系統良好，管理水平高，免疫程序合理，因此，規模化養殖場的禽流感抗體水平最高；屠宰場的禽流感抗體水平較好， 出現這種現象原因可能是屠宰場中一般是肉用雞以及淘汰蛋雞，肉雞養殖周期比較短，因此免疫數量較少，可能存在禽流感病毒；散養戶的禽流感抗體水平普遍較低，形成這種現象的原因可能是散戶飼養數量少， 對免疫接種的重要性沒有得到很深的認識；交易市場的禽流感抗體水平也一般，形成這種現象的原因可能是交易市場主要從事為規模化養殖場和散養戶銷售飼養的家禽，造成抗體水平不平均，流動性高，禽流感傳播的可能性高。 因此，需要做好禽流感的免疫工作以知道及時進行調查處理。 除此之外，在免疫中需要注意以下方面，疫苗應妥善保存，防止應保存不當而降低免疫原性；選擇合適的天氣條件，按疫苗接種規定使用培養箱；避免免疫時的繁重工作，以避免防疫人員在追求速度的時忽略質量，降低免疫效果；注射用針頭避免倒刺，以防止注射部位感染，影響免疫應答[5]。

5 結論

本實驗為了監測阿克蘇地區禽流感免疫抗體水平， 通過采集阿克蘇地區的家禽血清， 采用血凝和血凝抑制法檢測禽流感免疫抗體。結果顯示，目前，阿克蘇地區H5 亞型禽流感免疫抗體合格率良好，可以再更一步完善和提高；但是，部分縣對于H7 亞型禽流感的接種情況較差，易造成禽流感暴發的潛在可能性。 在這項研究中，通過抗體水平檢測，及時反饋各養雞場，并指導補免加強和后期監測， 可以使得免疫不格的雞場的抗體陽性率有大幅度提升，起到了良好的預警作用和指導作用[6]。