穿心蓮有效成分的提取工藝研究

郭佳佳，曹智威，杜鴻章，馮亞莉

（鄭州工業應用技術學院 藥學與化學工程學院，河南新鄭 451100）

穿心蓮一般指爵床科植物穿心蓮[Andrographis paniculate（Birm. f.）Ness]的干燥地上部分[1]，藥用葉或全草，秋初莖葉茂盛時采割，曬干。穿心蓮性寒、味苦，歸心、肺、大腸、膀胱經，具有清熱解毒、涼血、消腫之功效，被廣泛用于治療多種感染性疾病及毒蛇咬傷[2-3]。現代藥理研究表明，穿心蓮還具有抗癌、抗病毒、抗腫瘤及治療糖尿病等作用[4-6]。穿心蓮的主要生物活性成分是二萜內酯類和黃酮類，其中以穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的藥理作用最為廣泛。因此，穿心蓮內酯與脫水穿心蓮內酯的含量是評價穿心蓮藥材質量的重要指標[7]。由于穿心蓮內酯在水溶液中易水解、開環，異構化為脫水穿心蓮內酯[8]。為更好地開發和利用穿心蓮藥材，對該藥材中脫水穿心蓮內酯進行薄層色譜鑒別、紫外分析及含量測定的研究，以期為中藥材穿心蓮的質量控制提供技術參考。

1 材料與方法

1.1 主要儀器與試劑

穿心蓮購于河北一禾藥業有限公司，經鄭州工業應用技術學院謝新年教授鑒定為爵床科植物穿心蓮的干燥地上部分，粉碎后備用。

對照品脫水穿心蓮內酯（批號0854-200204，純度≥98%），購自中國食品藥品檢定研究院；蒸餾水、超純水，自制；甲醇、乙醇，色譜級，天津市科密歐化學試劑有限公司；其他所用試劑和溶劑均為分析純。

UV-2550型紫外-可見分光光度計，日本島津公司；HPLC-1260高效液相色譜儀，美國安捷倫科技有限公司；DAD檢測器：安捷倫色譜工作站；色譜柱：SB-C18柱；SQP電子天平，賽多利斯科學儀器公司；超聲波清洗機，濟南巴克超聲波科技有限公司；RE-52AA型旋轉蒸發儀，上海亞榮生化儀器廠；SHSL調溫電熱套，常州翔天實驗儀器廠；HH-2數顯恒溫水浴鍋，常州普天儀器制造有限公司；SHZ-D（Ⅲ）循環水式多用真空泵，天津華鑫儀器廠；LG10-2.4A離心機，深圳永業昌機電有限公司；FW177中藥粉碎機，天津市泰斯特儀器有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 提取方法

（1）水提法。取干燥穿心蓮粗粉10.00 g，以蒸餾水為溶劑，電熱套煎煮提取2次，溶劑用量為10倍量，時間為2.0 h，合并煎煮液，靜置30 min，抽濾，將濾液在水浴鍋上（96 ℃）濃縮成流浸膏，于70 ℃條件下干燥成干浸膏，稱重。

（2）水提醇沉法。取干燥穿心蓮粗粉10.00 g，以蒸餾水為溶劑，回流提取2次，溶劑用量為10倍量，時間為2.0 h，合并煎煮液，靜置30 min，抽濾，濃縮，加入乙醇使醇含量為60%，靜置24 h，抽濾，濾液濃縮成流浸膏，再干燥成干浸膏，稱重。

（3）醇提法。取干燥穿心蓮粗粉10.00 g，以85%乙醇為溶劑，回流提取2次，溶劑用量為10倍量，時間為2.0 h，合并煎煮液，抽濾，濾液濃縮成流浸膏，再干燥成干浸膏，稱重。

（3）堿提酸沉法。取干燥穿心蓮粗粉10.00 g，分別用0.5%、0.04%、0.01%的碳酸鈉堿水煎煮提取3次。溶劑用量分別為10、6、4倍量，時間分別為2.0 h、2.0 h、1.5 h，合并提取液，用鹽酸調pH至中性，再濃縮干燥成干浸膏，稱重。

（4）超聲提取法。取干燥穿心蓮粗粉10.00 g，加85%的乙醇200 mL，浸泡30 min，超聲處理30 min，過濾，殘渣用適量85%乙醇洗滌3次，洗液并入濾液中，濃縮干燥成干浸膏，稱重。

1.2.2 紫外分光光度法鑒別

標準品溶液的制備[1]：精密稱定脫水穿心蓮內酯標準品1.00 mg，加甲醇制成濃度為1 mg/mL的溶液，作為脫水穿心蓮內酯標準品溶液。

不同提取物樣品供試液的制備[8]：精密稱定不同提取物的干浸膏100 mg，用甲醇溶解并定容至100 mL量瓶中，取上清液，過濾，濾液備用。

1.2.3 高效液相法定量分析

（1）色譜條件。色譜柱：ZORBAX SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；甲醇-水（體積比52∶48）為流動相，流速為1 mL/min；柱溫為25 ℃；檢測波長為254 nm；采集時間40 min。理論塔板數按脫水穿心蓮內酯計算應不低于2 000，在該條件下可使基線分離良好。

（2）線性關系的測定。用甲醇分別將對照品溶液依次稀釋成 1 000 μg/mL、500 μg/mL、250 μg/mL、125 μg/mL和62.5 μg/mL的系列溶液進行分析，以脫水穿心蓮內酯的濃度為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y）進行線性回歸，得回歸方程為Y=0.646 2X+2 599.6，R2=0.997 3，脫水穿心蓮內酯標準曲線見圖1，脫水穿心蓮內酯在濃度為62.5～1 000 μg/mL時線性關系良好。

（3）方法學驗證。對液相色譜定量分析方法進行穩定性、精密度以及重現性考察。

圖1 脫水穿心蓮內酯標準曲線

2 結果與分析

2.1 紫外分析鑒別結果

由圖2可以看出，不同提取方法的穿心蓮提取物與脫水穿心蓮內酯標準品圖譜的最大吸收波長有重疊，說明不同提取方法的干浸膏中均存在脫水穿心蓮內酯。

圖2 與脫水穿心蓮內酯標準品對比的紫外光譜圖

2.2 穿心蓮內酯含量測定結果

由表2可看出超聲法所得脫水穿心蓮內酯含量最高。

表1 不同提取方法中脫水穿心蓮內酯含量

2.3 含量測定方法學驗證

2.2.1 穩定性測定

取各提取物干浸膏，按樣品溶液制備方法制備樣品供試液，在12 h內，每隔1 h進樣測定1次，結果見表2。

表2 各提取物穩定性實驗數據

2.2.2 精密度考察

精密稱取脫水穿心蓮內酯標準品1 mg，置于1 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度線，超聲溶解，搖勻。按照“1.2.3”色譜條件進行測定，重復進樣8次，結果見表3。

表3 各提取物精密度考察數據

2.2.3 重現性考察

選擇同一批次的樣品，精密稱量樣品0.1 mg，用甲醇定容于容量瓶中，配制成0.1 mg/mL的樣品溶液。按照“1.2.3”色譜條件，對樣品測定5次，結果見表4。

表4 各提取物重現性考察數據

3 結論

采用水提、醇提、水提醇沉、超聲、堿提酸沉法提取穿心蓮中脫水穿心蓮內酯，結果表明超聲法所得脫水穿心蓮內酯含量最高為0.853%；堿提酸沉法中，0.01%堿水提取出來的內酯含量較高為0.213%；水提法雖成本低，但提取量少，內酯成分幾乎損失殆盡，建議不采用。因此，穿心蓮采用以超聲法和0.01%碳酸鈉堿水回流提取工藝較為合理科學。