不同產地苦參質量評價

王夢桐,孫瑩瑩,榮樹良,朱鍵勛,李 勇,林 喆*

(1.長春中醫(yī)藥大學藥學院,吉林 長春 130117;2.梅河口市澤泉中草藥種植專業(yè)合作社,吉林 梅河口 135014)

苦參為豆科植物苦參Sophora flavescens Ait.的干燥根。春、秋二季采挖,除去根頭和小支根,洗凈,干燥,或趁鮮切片,干燥[1]。近年來,國內外對苦參的研究十分廣泛,涵蓋化學、活性、質量、藥理作用、臨床應用等,通過近幾年來的研究表明,苦參的化學成分主要有生物堿類和黃酮類[2-4]。生物堿中苦參型生物堿為主要活性成分,有多方面的藥理作用,如抗心律失常、抗菌、抗炎、抗風濕、抗腫瘤、抗過敏、抗病毒及生物反應調節(jié)作用等[5-10]。因此,本研究以擴大苦參藥用資源為目標,對吉林產區(qū)栽培苦參進行含有量測定,并依據2020 年版《中國藥典》 苦參項下相關內容與方法,同河北、河南、甘肅、內蒙古、山西等常用5 個產區(qū)的苦參藥材中苦參堿和氧化苦參堿進行含有量對比,以期為6 個產地苦參的質量評價提供實驗依據,進而實現對苦參藥用資源的進一步擴大和科學合理應用。

1 材料

1.1 儀器 高效液相色譜儀(日本島津公司)；XS205 型電子分析天平(瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司)；ST-2000 旋轉蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；KQ200B 型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試劑與藥物 苦參堿對照品(批號110805-201709)、氧化苦參堿對照品(批號110780-201508) 均購自中國食品藥品檢定研究院。乙腈、無水乙醇為色譜純；其他試劑均為分析純；水為超純水。

1.3 樣品 苦參樣品于2017 年10 月采收于內蒙古、河南、甘肅、河北、山西、吉林梅河口6 個地區(qū),經長春中醫(yī)藥大學藥學院林喆教授鑒定為豆科植物苦參Sophora fla-vescens Ait.的干燥根。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 Platisil NH2色譜柱(150 mm×4.6 mm,5 μm)；流動相乙腈-無水乙醇-3% 磷酸溶液(8∶1∶1)；檢測波長220 nm；體積流量1.0 mL/min；進樣量對照品溶液5 μL,供試品溶液10 μL；理論板數按氧化苦參堿峰計算不低于2 000。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液 采用2020 年版《中國藥典》 一部苦參項下含有量測定方法制備對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 采用2020 年版《中國藥典》 一部苦參項下含有量測定方法制備供試品溶液。

2.3 方法學考察

2.3.1 系統(tǒng)適用性試驗 取“2.2” 項下對照品溶液和供試品溶液適量,在“2.1” 項色譜條件下進樣測定,記錄色譜圖,見圖1?？鄥A標準品液相色譜圖中苦參堿保留時間為17 min,氧化苦參堿保留時間29 min,理論板數均大于2 000。

2.3.2 線性關系考察 精密吸取“2.2.1” 項下對照品溶液100、200、300、400、500、600 μL 至10 mL 量瓶中,乙腈-無水乙醇(80∶20) 定容至刻線,在“2.1” 項色譜條件下進樣,以色譜峰面積積分值為縱坐標(Y),對照品濃度為橫坐標(X),分別進行線性回歸,得回歸方程分別為苦參堿Y=298 782X+607.14 (r=0.999 8)、氧化苦參堿Y=400 655X -5 890.3 (r=0.999 0),分別在0.04～0.37、0.12～1.83 μg 范圍內線性關系良好。

圖1 苦參中苦參堿、氧化苦參堿HPLC 色譜圖

2.3.3 精密度試驗 取質量濃度為50 μg/mL 苦參堿和0.15 mg/mL 氧化苦參堿對照品溶液,在“2.1” 項色譜條件下分別連續(xù)進樣6 次,測定峰面積。測得RSD 為1.95%,表明儀器精密度良好。

2.3.4 重復性試驗 取山西苦參樣品約0.5 g,按“2.2.2” 下方法制備供試品溶液5 份,在“2.1” 項色譜條件下進行含有量測定,測得RSD 為1.56%,表明該方法重復性良好。

2.3.5 穩(wěn)定性試驗 取山西苦參樣品,按“2.2.2” 下方法制備供試品溶液,在“2.1” 項色譜條件下,分別于0、2、4、6、8、10、12 h 進樣測定峰面積,測得氧化苦參堿和苦參堿RSD 分別為1.68%、1.27%,表明供試品溶液在12 h 內穩(wěn)定性良好。

2.3.6 加樣回收率試驗 取山西苦參樣品0.3 g 共18 份,分兩大組,兩大組分3 小組分別精密加入苦參堿、氧化苦參堿對照品相當于樣品濃度的80%、100%、120%。按“2.2.2” 項下方法制備供試品溶液,另取“2.2.1” 項下苦參堿、氧化苦參堿對照品溶液進樣測定照,并計算苦參堿、氧化苦參堿低、中、高3 個濃度的加樣回收率。結果表明,苦參堿加樣回收率為97.9%～101.0%,平均回收率99.9%,RSD 為1.05%；氧化苦參堿加樣回收率為97.8%～101.9%,平均回收率100.1%,RSD 為1.19%。

2.4 樣品含有量測定 取6 個產區(qū)的苦參樣品,粉碎成粉末,過3 號篩。精密稱取0.3 g,河北、河南、甘肅、內蒙古、山西5 個產地各3 份；吉林梅河口產地取3 批樣品,每批3 份,共9 份。按“2.2.2” 項下方法制備供試品溶液。另取“2.2.1” 項下苦參堿、氧化苦參堿對照品溶液進樣測定,在“2.1” 項色譜條件下進樣,測得6 個不同產區(qū)供試品的中苦參堿、氧化苦參堿總含有量均大于1.2%,結果符合2020 年版《中國藥典》 規(guī)定,見表1。

表1 不同產區(qū)樣品中苦參堿、氧化苦參堿含有量測定結果（%，n=3）

3 討論

2020 年版《中國藥典》 一部項下規(guī)定苦參中苦參堿、氧化苦參堿總量不得低于1.2%[1]。實驗結果表明,6 個產地苦參藥材飲片均符合《中國藥典》 標準,其中河南含有量最高。

各產地間含有量及兩者相對含有量存在較大差異,除產地影響外,也可能與采收季節(jié)和生長年限有關[11],苦參堿與氧化苦參堿之間是否會隨著時間推移而相互轉化,或轉化成其他物質還有待進一步研究。2 種生物堿的藥理作用存在差別[12-15],雖然飲片符合《中國藥典》 含有量要求,但在臨床應用過程中藥效不穩(wěn)定及能否真正達到某種特定藥效仍有待商榷。同時兩者均有一定毒性[16],其毒性與劑量的關系尚不明確。

苦參為常用傳統(tǒng)中藥,主要藥效物質基礎為生物堿與黃酮類,具有多種生物活性,而且苦參堿和氧化苦參堿并非專屬性有效成分,在質量評價方法中增加苦參指紋圖譜鑒定,建立真正的質量評價標志物,以期進一步提高苦參飲片質量的評價標準。