新支流法四聯新型佐劑滅活疫苗臨床應用效果評價

王順山，楊文文，王志龍，唐乃鑫，祝希輝，郭鵬，賀亞奇，李玉保*

（1.北京華夏興洋生物科技有限公司北京 102600；2.聊城大學農學院山東聊城25205）

新城疫（ND）、傳染性支氣管炎（IB）、H9 亞型禽流感（H9 AIV）以及傳染性法氏囊炎（IBD）是肉雞常見的病毒性疾病，疫苗免疫是目前有效預防方案。滅活苗具有安全性好、穩定性高、便于運輸和保存等優勢，使用不同的佐劑能夠提高滅活苗免疫效果[1,2]。獸用疫苗生產中廣泛使用礦物油佐劑，在免疫應答和免疫持續期方面具有獨特的優勢，但也存在疫苗黏度大、不易注射、不易吸收、疫苗副反應大等問題。北京生泰爾生物科技有限公司申請獲批含有高分子膠和植物提取物的“新型疫苗佐劑”發明專利[3]，應用該發明專利生產新支流法四聯滅活疫苗。為客觀評價新型疫苗佐劑新支流法四聯疫苗在肉雞臨床應用效果以及1 日齡防疫新支流法對肉雞后期抗體滴度提升效果，設計開展了臨床試驗。

1 材料與方法

1.1 疫苗

新支流法四聯新型佐劑疫苗（批號2020012），由北京華夏興洋生物科技有限公司提供；新支流法四聯礦物油佐劑疫苗，采購于市場流通商品。

1.2 主要試劑

IBD、IB 抗體檢測試劑盒，均購自上海酶聯生物科技有限公司；ND、H9 AIV 血凝抑制試驗抗原，均購自哈爾濱維科生物技術開發公司。

1.3 試驗動物

1 日齡雛雞62,400 只，平均分為A、B、C、D 共4 棟。A 棟和B棟為新支流法四聯新佐劑疫苗試驗組，1 日齡頸部皮下注射0.2mL/ 只；C 棟和D 棟為新支流法四聯礦物油佐劑疫苗對照組，1日齡頸部皮下注射0.2mL/ 只。試驗組與對照組其余疫苗免疫程序相同，1 日齡新支二聯弱毒苗噴霧免疫（0.6 羽份/ 只），7 日齡新支二聯弱毒苗飲水免疫（1.5 羽份/ 只）。

1.4 免疫應激

1 日齡注射滅活苗，觀察雛雞進入雞舍后，雛雞在養殖籠內的分布、飲水、采食情況，記錄數據并拍照。

1.5 疫苗吸收

分別在7、14 日齡時，每組剖殺10 只試驗雞只，觀察頸部滅活苗注射部位疫苗吸收情況，并拍照。

1.6 免疫器官指數

分別在7、14、21、35 日齡，各棟隨機抽取10 只，控飼3h，稱重、剖殺，稱取胸腺、脾臟、法氏囊等免疫器官重量，計算免疫器官指數。

免疫器官指數=免疫器官鮮重（g）÷體重（kg）

1.7 抗體滴度檢測

分別在7、14、21、28 和35 日齡及出欄時，各棟隨機采血10份，分離血清，利用ELISA 試劑盒、血凝/ 血凝抑制試驗檢測IBD、IB、H9 AIV、ND 抗體滴度。

1.8 數據分析

試驗數據采用SPSS 20 軟件對所得數據進行單因素方差分析（One-way ANOVA），試驗結果以平均值±標準差表示。

2 結果

2.1 免疫應激

各組雛雞進入雞舍后，開始飲水時間、開始吃料時間、早期耗料量以及在養殖籠內雛雞分布無明顯差異（圖1）。

2.2 疫苗吸收情況

于7、14 日齡剖殺各棟雛雞，觀察疫苗吸收情況。試驗組疫苗吸收稍優于對照組（圖2）。

2.3 免疫器官指數

7 日齡時，試驗組A 棟胸腺指數極顯著高于對照組C 棟和D棟（P≤0.01）；21 日齡時，試驗組A 棟和B 棟胸腺指數顯著高于對照組C 棟和D 棟（P≤0.05）。脾臟指數和法氏囊指數，試驗組與對照組無顯著性差異。

表1 試驗雞只免疫器官指數

2.4 抗體水平

21 日齡時，H9 抗體滴度試驗組顯著高于對照組C 棟（P≤0.05）；ND 抗體滴度，各日齡試驗組與對照組均無顯著性差異（表2）。IB及IBD 抗體滴度，各日齡試驗組與對照組差異均無顯著性差異（未附數據）。

3 討論與結論

新支流法四聯新型疫苗佐劑疫苗免疫效果具有一定的優勢。新型疫苗佐劑含有高分子膠和植物提取物[3]，能夠提高機體非特異性免疫[4]，在免疫早期能夠促進胸腺發育，提高胸腺指數；抗體結果顯示，雖然只有在21 日齡時，試驗組H9 AIV 抗體滴度顯著高于對照組，但從數據可以看出，在21 日齡前，試驗組H9 抗體滴度和ND 抗體滴度平均值皆高于對照組，證明新支流法四聯新型疫苗佐劑疫苗在肉雞早期具有一定的優勢。

圖1 雛雞分布 A.試驗組；B.對照組

圖3 7 日齡、14 日齡疫苗吸收情況 A7-D7.各組7 日齡；A14-D14.各組14 日齡

表2 試驗雞只ND和H9亞型流感HI抗體水平

1 日齡防疫新支流法疫苗，對肉雞40 日齡前能夠提高較好的保護。長期以來，新流滅活疫苗或新支流滅活疫苗的防疫，多在養殖場7～9 日齡進行。隨著養殖規模擴大，在養殖場進行注射免疫存在應激大、操作困難、對生物安全構成威脅等不足，因此，希望肉雞防疫孵化場完成，但1 日齡進行滅活疫苗防疫對后期抗體滴度是否滿足需要存在爭議。目前白羽肉雞出欄時間多在40 日齡左右，通過1 日齡防疫新支流法四聯疫苗，可以對4 種主要的流行病提供較好的抗體保護。但抗體數據顯示，35 日齡后，各組抗體皆有所降低，且從標準差可以看出，抗體離散度明顯擴大。因此，飼養周期超過40 日齡的雞群，建議加強免疫。