豬細小病毒疫苗的研究進展

歐陽海平，潘永飛，宋延華

（廣東省云浮市溫氏食品集團股份有限公司 527400）

豬細小病毒病是由豬細小病毒（Porcine parvovirus， PPV）引起的母豬繁殖障礙病，主要引起初產母豬流產，產死胎、木乃伊胎及斷奶仔豬多系統衰弱綜合征等。 豬細小病毒為無囊膜單鏈線狀DNA 病毒，病毒粒子平均直徑約20nm。 目前，疫苗接種是有效防控PPV 的主要措施。 國內PPV 商品疫苗均為全病毒滅活苗。 由于PPV 對環境抵抗力強，出于疫苗安全性考慮，滅活手段也在不斷改進，但是滅活苗始終有滅活失敗的風險。 研發安全、高效的疫苗對清除PPV 尤為關鍵。因此，人們利用生物技術開發新型基因工程疫苗以克服現有疫苗的缺點。 本文僅就國內的豬細小病毒疫苗研究現狀作一綜述。

1 豬細小病毒病滅活疫苗

豬細小病毒滅活疫苗是將PPV 感染的細胞培養物通過理化方法處理，使其喪失感染性但仍保持良好的免疫原性，然后加入佐劑乳化制備而成。

目前國內共有18 家企業獲得PPV 疫苗批準文號 （表1），毒 株 包 括CP-99 株、S-1 株、BJ-2 株，WH-1 株，NJ 株，CG-05株，YBF01 株，L 株。

2 PPV 基因工程苗

2.1 PPV 亞單位疫苗

PPV VP2 蛋白是最主要的結構蛋白，具有血凝活性，在自然條件下能組裝成病毒樣顆粒， 誘導機體產生很強的免疫應答反應，是制作亞單位疫苗的潛在蛋白。

陳玉梅等[1]通過優化密碼子，使用伴侶蛋白質粒共表達策略，使用原核表達系統成功表達出可溶性的VP2 蛋白，并在體外裝配成具有血凝活性的VLPs。 小鼠免疫試驗表明制備的VLPs疫苗能刺激機體產生特異性HI 抗體和中和抗體。 宋品等[2]將合成的密碼子優化的PPV VP2 基因克隆到帶有His 標簽和小分子泛素相關修飾物（SUMO）標簽的pSMK 表達載體中，在大腸桿菌中表達可溶性VP2 蛋白。對表達的重組融合蛋白，用特異性蛋白酶切除其SUMO 標簽，在一定的鹽離子條件下，VP2 蛋白可自我組裝成VLPs。 李茜等[3]使用Bac-to-Bac 昆蟲桿狀病毒表達系統表達VP2 蛋白，也能組裝成VLPs，免疫BALB/c 小鼠后能刺激小鼠產生抗PPV 的特異性抗體。 這些研究為研制豬細小病毒基因工程疫苗提供了科學依據。

2.2 重組PPV 活載體疫苗

采用弱毒或無毒病原微生物作為表達載體， 對其導入外源抗原基因，制成疫苗后接種動物，誘導機體產生特異性免疫應答反應，這類新型疫苗稱為活載體疫苗。

謝永興等[4]使用同源重組技術表達豬圓環病毒2 型Cap 蛋白和豬細小病毒VP2 蛋白的重組偽狂犬病病毒。 重組病毒感染的PK-15 細胞中能檢測到VP2 蛋白， 免疫小鼠后可產生低水平VP2 抗體。付朋飛、宋文博等[5，6]成功構建了PPV VP2 外源抗原基因的重組偽狂犬病毒rPRV-VP2 株。

表1 國內批準銷售的PPV 商業化疫苗

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3 PPV 聯合疫苗

聯合免疫具有一針防多病， 省時省力， 減少豬群應激等優勢。目前國內暫無豬細小病毒的聯苗獲批。根據中國知識產權專利局公開資料顯示，2016 年至今，已有多家科研機構申請了豬生殖與呼吸道綜合征病毒[7]，豬圓環病毒3 型、豬細小病毒和豬流感三聯滅活疫苗[8]，豬偽狂犬病/豬細小病毒病二聯滅活疫苗[9]，豬丹毒、豬細小病毒二聯滅活疫苗[10]，豬丹毒、豬細小病毒、豬流感病毒三聯滅活[11]，豬細小病毒、豬流行性腹瀉、大腸埃希氏菌三聯疫苗[12]，豬細小病毒和豬流行性腹瀉二聯滅活疫苗[13]，豬圓環病毒2 型與豬細小病毒二聯滅活疫苗[14]相關專利。研究結果表明聯苗的免疫保護效果不差于PPV 單苗， 也證實了抗原組合物之間無相互干擾，甚至起到了協同作用。

4 結語

豬細小病毒病仍是當今危害養豬業的一大難題。 豬細小病毒病沒有特效的治療措施，只能靠疫苗接種來防控。 隨著分子生物學技術和基因工程技術的不斷發展，PPV 新型疫苗研制已經取得了很大進展，相信在不久的將來必將研制出安全、高效、廉價的新型基因工程疫苗。