蛋雞脂肪肝出血綜合征對肝臟組織形態及血清生化指標的影響

吳雍 何菊/貴州省六盤水市水城區動物疫病預防控制中心 553600

脂肪肝出血綜合征（FLHS）是一種因脂類代謝紊亂而導致的疾病。該病作為產蛋雞常見的一種營養代謝病，多發生于籠養蛋雞，尤其是膘情較好的高產蛋雞，可引起病雞肝臟脂肪的異常沉積，產蛋率明顯下降。近年來，在現代化養殖快速發展的生產的條件下，該病的發生呈日趨升高的趨勢，該病已成為較多國家和地區蛋雞養殖常見易發疾病。目前研究表明，飼料配方不合理是發病原因之一，其中，高能低蛋白的日糧可誘發此病，當蛋雞采食能量高，低蛋白含量低的飼糧后，由于飼糧能量比值高，促使肝臟大量合成甘油三酯，而飼糧蛋白比值低，造成機體營養不均衡，導致肝臟載脂蛋白合成減少，從而造成肝內脂肪轉運受阻，破壞了肝細胞、脂肪細胞、血液之間脂肪代謝的動態平衡，導致脂質在肝細胞內過度沉積，其中以中性脂肪為主。本試驗參照Thomas Lionel Barton 評分標準，分為FLHS 輕度和FLHS 重度。選用220 日齡健康海蘭褐蛋雞為試驗動物，隨機分成正常組、病理組，采用高能低蛋白日糧誘導蛋雞發病。于試驗開始第80d 對蛋雞進行肝臟指數測定、血清生化指標測定及肝臟組織形態學觀察，旨在探討FLHS 對蛋雞生長性能及血清生化指標的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗動物選取精神狀態良好且體重相近的220 日齡蛋雞60 羽，隨機分成正常組、病理組兩組，按蛋雞飼養標準進行常規免疫。預飼期7d，預飼期結束后，正常組飼喂標準蛋雞日糧，病理組飼喂高能低蛋白日糧，于試驗開始第80d采取組織樣品以備試驗研究。

1.2 主要試劑無水乙醇、二甲苯、伊紅、蘇木紫、鹽酸、多聚甲醛、氯化鈉、氫氧化鈉、冰醋酸、依地酸二鈉、二水合磷酸氫二鈉、十二水合磷酸氫二鈉。

1.3 試驗耗材10ml 離心管、一次性手套、一次性口罩、樣品袋、標記筆、10ml 帶針注射器等。

1.4 采取雞肝臟

（1）緣肋軟骨剪開，使腹腔充分暴露，去除肝臟連接的結締組織，去除與肝門靜脈等與腹部鏈接的部位，使肝臟與機體脫離。（2）取出后清洗肝臟表面（用0.75%的生理鹽水），用吸水紙吸干后進行稱重。（3）選取肝臟右葉部分組織，放入含有4%多聚甲醛溶液的容器中固定，后期進行石蠟切片制作。

1.5 血清生化指標TG、TC、ALT、AST 的測定，嚴格按照相應試劑盒說明操作。

2 FLHS 對蛋雞肝臟組織形態學的影響

通過研究，正常組蛋雞肝臟顏色鮮艷，明亮有光澤，質地柔軟。而病理組蛋雞肝周腫大，邊緣鈍圓，肝臟表面有大小不一的浸潤性出血點，肝表面色澤泛黃，油脂滲出，有明顯的油膩感，觸摸質地變脆。肝臟H&E 染色結果顯示，正常蛋雞細胞界限清晰可見，肝細胞排列整齊。病理蛋雞肝細胞中脂滴在切片制作過程中被有機溶劑溶解后成大小不等的空泡狀。隨著FLHS 的發病程度的增加，空泡面積不斷增大，按照Thomas Lionel Barton 評分標準及空泡面積，將病理組分為FLHS 輕度組和FLHS 重度組，FLHS 輕度組中的肝細胞排列相對基本規則，肝細胞形態有略微腫脹，胞漿顯示疏松，肝細胞發生輕度的脂肪變性，肝細胞中可見含有少量脂滴；FLHS 重度組中有大面積肝細胞發生脂肪變性，變性后肝細胞發生腫脹，體積明顯增大，肝細胞中含有較多脂滴，細胞核被推向周邊，由于受擠壓肝竇變窄，甚至消失。

3 FLHS 對蛋雞肝臟指數的影響

3.1 甘油三酯（TG）測定結果通過研究，FLHS 輕度組甘油三酯含量約是正常組的1.8 倍，FLHS 重度組甘油三酯含量約是正常組的3.1 倍。

3.2 膽固醇（TC）測定結果通過研究，FLHS 輕度組、FLHS 重度組膽固醇含量分別高出正常組約1.3 倍、2.2 倍；FLHS 重度組約是FLHS 輕度組的1.69 倍。

3.3 谷丙轉氨酶（ALT）測定結果通過研究，輕度FLHS組ALT 含量約是正常組的1.39 倍，重度FLHS 組ALT 含量約是正常組的1.55 倍。

3.4 谷草轉氨酶（AST）測定結果通過研究，重度FLHS組AST 含量比正常組和輕度FLHS 組分別多14.73%、13.96%。

4 結果與討論

根據現有的FLHS 研究報道和臨床診斷資料顯示，本試驗采用能量高蛋白低的飼糧飼喂蛋雞，成功誘導出FLHS，并按照Thomas Lionel Barton 評分標準及肝細胞脂滴面積將病理組分為FLHS 輕度組和FLHS 重度組。禽類脂肪合成的主要場所為肝臟，且與脂類代謝息息相關。有研究表明，肝內脂肪堆積對肝細胞的毒性強度與TG 含量呈正相關，其作用機理可能是脂肪損害細胞線粒體和溶酶體酶從而導致肝細胞功能障礙，自由基未能及時清除，致使肝實質細胞發生變性、壞死及炎性細胞浸潤。此外，由于飼料蛋白比值低，導致病理組蛋雞肝臟載脂蛋白合成減少，從而造成肝臟中合成的甘油三酯轉運受阻，使得肝細胞內脂肪過度沉積進而發生肝臟脂肪變性。

膽固醇是細胞膜成分，家禽血液中的膽固醇部分在組織中構成細胞結構成分，而其中的部分轉變為重要的固醇衍生物VD3，促進機體鈣的吸收或類固醇激素的代謝。機體大部分組織都具備能力，可有效合成膽固醇，而合成速度及總合成量不盡一致。由于FLHS 對肝臟的損傷，導致TC 含量顯著升高，肝臟脂類代謝受到嚴重影響。

目前肝臟內發現的活性最高的兩種轉氨酶分別是谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶，這兩種酶與脂肪變性、肝細胞炎癥和壞死等病變的發生密切相關，是體現肝臟細胞損傷的主要指標。這可能是由于受FLHS 的影響，使得肝細胞的代謝發生異常，肝細胞器及細胞膜等亞顯微結構發生改變，進而肝細胞內轉氨酶產生過剩而大量外溢，血清轉氨酶活性急劇升高，肝臟內脂質代謝異常，肝細胞功能受到損傷。