癌組織標(biāo)本PMS2蛋白表達(dá)與前列腺癌患者Gleasom分級關(guān)聯(lián)性分析①

陳大偉 (河南電力醫(yī)院病理科，河南 鄭州 450000)

前列腺癌是男性生殖系統(tǒng)常見惡性腫瘤，會壓迫尿道導(dǎo)致排尿困難，同時(shí)易發(fā)生轉(zhuǎn)移至膀胱、血管神經(jīng)束等部位，嚴(yán)重威脅生命健康[1]。相關(guān)研究表明，我國男性前列腺發(fā)生例數(shù)高達(dá)8.14萬，死亡率為3.32/10萬[2]。前列腺癌發(fā)生早期因素為腫瘤細(xì)胞異常合成、增殖，其中癌細(xì)胞DNA錯(cuò)配是關(guān)鍵因素。PMS2蛋白屬于DNA錯(cuò)配修復(fù)基因(MMR)，能為錯(cuò)配基因提供糖蛋白配體或與線粒體蘋果酸脫氫酶(MDH2)形成二聚體，參與癌細(xì)胞DNA異常增殖[3]。臨床可通過研究PMS2蛋白在前列腺癌組織中表達(dá)情況，為其治療方案提供實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)。本研究選取我院前列腺癌患者104例，旨在探討PMS2蛋白表達(dá)與Gleasom分級的相關(guān)性。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料

本研究符合我院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準(zhǔn)，選取我院2018-04～2019-04前列腺癌患者104例，其中年齡58～80歲，平均(69.52±5.15)歲；TNM分期：Ⅰ期15例，Ⅱ期33例，Ⅲ期35例，Ⅳ期21例；血清前列腺特異性抗原(PSA)49例<4ng/mL，55例≥4ng/mL；Gleasom分級54例<7分，50例≥7分；遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移37例，未轉(zhuǎn)移67例。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)及排除標(biāo)準(zhǔn)

(1)納入標(biāo)準(zhǔn)：均經(jīng)肛門指檢、病理活檢、超聲、術(shù)后病理活檢確診為前列腺癌；均簽署知情同意書。(2)排除標(biāo)準(zhǔn)：接受過放化療；前列腺手術(shù)史；血液系統(tǒng)疾病。

1.3 方法

(1)標(biāo)本制作：采用免疫組化方法，采用石蠟切片進(jìn)行脫蠟，切片厚度為3mm，采用3%過氧化氫(H2O2)處理，于室溫下孵育5min，采用去離子水沖洗3次，3min/次，并將1g蛋白加入100mL純水中配制為濃度為10%牛奶蛋白進(jìn)行封閉，于室溫下孵育5min，加入南京凱基生物有限公司生產(chǎn)的PMS2蛋白抗體，于37℃溫度下孵育2h，并利用PBS緩沖液沖洗3次，5min/次，滴加HRP標(biāo)記過的二抗(羅氏檢測公司)，于37℃溫度下孵育30min，再次利用PBS緩沖液沖洗3次，5min/次，加入氯化硝基四氮唑藍(lán)(NBT/BCIP)染色劑進(jìn)行顯色，并于5min后復(fù)染，脫水、透明、封片。采用上海精密儀器有限公司生產(chǎn)的Olipics電子顯微鏡下觀察，其余配套試劑購自南京泰康生物科技有限公司。(2)PSA檢測方法，抽取5mL清晨空腹靜脈血，以4000r/min速度離心15min，離心半徑為10cm，取上清液置于-80℃冰箱保存，采用化學(xué)發(fā)光法檢測。

1.4 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

PMS2蛋白在細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核中陽性表達(dá)明顯，免疫組化法觀察顏色為褐色、棕色、黃色，(1)根據(jù)陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)后計(jì)算百分比評分：>75%計(jì)為4分，51%～75%計(jì)為3分，10%～50%計(jì)為2分，<10%計(jì)為1分；(2)根據(jù)著色程度評分：褐色或黑色計(jì)為3分，棕黃色計(jì)為2分，淡黃色計(jì)為1分，無色計(jì)為0分。結(jié)果以陽性細(xì)胞百分比與染色程度評分相乘判斷：<3分計(jì)為(-)，3～5分計(jì)為(+)，6～9分計(jì)為(++)，>9分計(jì)為(+++)；<3分計(jì)為陰性，≥3分計(jì)為陽性。

1.5 觀察指標(biāo)

(1)前列腺癌組織與癌旁組織中PMS2蛋白表達(dá)情況。(2)前列腺癌組織中PMS2蛋白表達(dá)情況與Gleasom分級關(guān)聯(lián)性。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 前列腺癌組織與癌旁組織中PMS2蛋白表達(dá)情況

前列腺癌組織中PMS2蛋白陽性表達(dá)74例(71.15%)；陰性表達(dá)30例(28.85%)；且前列腺癌組織PMS2蛋白陽性表達(dá)率71.15%高于癌旁組織36.54%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 前列腺癌組織與癌旁組織中PMS2蛋白表達(dá)情況[n(%)]

2.2 前列腺癌組織中PMS2蛋白表達(dá)情況與Gleasom分級關(guān)聯(lián)性

前列腺癌組織中PMS2蛋白陽性表達(dá)與年齡、Gleasom分級、PSA水平、TNM分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。見表2。

表2 PMS2蛋白表達(dá)情況與Gleasom分級關(guān)聯(lián)性[n(%)]

3 討論

前列腺癌早期易發(fā)生轉(zhuǎn)移，5年內(nèi)生存率低于35%，生存時(shí)間少于32個(gè)月，臨床上多采用Gleasom分級評估其惡性程度，但缺少相關(guān)預(yù)后評估指標(biāo)[4]。前列腺腫瘤細(xì)胞發(fā)生發(fā)展過程中，DNA錯(cuò)配修復(fù)發(fā)揮重要作用，能參與原核及真核細(xì)胞自身修復(fù)機(jī)制中，避免癌細(xì)胞DNA長期擴(kuò)增紊亂導(dǎo)致癌基因富集，穩(wěn)定染色體末端的端粒結(jié)構(gòu)，調(diào)節(jié)G1/S期細(xì)胞比例與細(xì)胞周期，抑制早期病變細(xì)胞低方向分化[5]。

PMS2是常見DNA錯(cuò)配修復(fù)基因，包含2個(gè)內(nèi)含子與12個(gè)外顯子，全長16kb，主要糾正增強(qiáng)子或啟動(dòng)子起始部分、小片段性及單堿基失調(diào)錯(cuò)配，在真核生物中可與MLH1互相結(jié)合，形成異源二聚體MLH1-PMS2(MutLα)；并誘導(dǎo)磷酸鹽結(jié)構(gòu)重塑與降解，穩(wěn)定DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)[6,7]。本研究選取我院104例前列腺癌患者，經(jīng)測定前列腺癌組織中PMS2蛋白陽性表達(dá)71.15%，陰性表達(dá)28.85%，且前列腺癌組織PMS2蛋白陽性表達(dá)率71.15%高于癌旁組織36.54%(P<0.05)。PMS2蛋白參與到前列腺癌發(fā)生發(fā)展過程中，PMS2表達(dá)增加，影響DNA錯(cuò)配、染色體端粒結(jié)構(gòu)、癌基因表達(dá)等多方面發(fā)揮綜合性作用，因此前列腺癌患者中PMS2蛋白表達(dá)會增加且大于癌旁正常組織[8]。本研究結(jié)果還顯示，前列腺癌組織中PMS2蛋白陽性表達(dá)與年齡、Gleasom分級、PSA水平、TNM分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。分析其原因?yàn)椋琍MS2蛋白陽性表達(dá)可影響堿基嘧啶二聚體螺旋骨架結(jié)構(gòu)耐降解程度、穩(wěn)定性、可逆性，并促進(jìn)癌基因表達(dá)，抑制抑癌基因表達(dá)，影響早期癌細(xì)胞異常病變；PMS2蛋白陽性表達(dá)在前列腺癌病情變化、惡性程度、轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用，且其陽性表達(dá)率與癌細(xì)胞Gleasom分級等制定前列腺癌治療方案的重要參考指標(biāo)具有相關(guān)性，可據(jù)此判斷分級、PSA水平、腫瘤分期、是否轉(zhuǎn)移，從而間接指導(dǎo)臨床治療。

綜上所述，前列腺癌組織PMS2蛋白陽性表達(dá)率較高，且與年齡、Gleasom分級、PSA水平、TNM分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移均有關(guān)，可指導(dǎo)臨床治療方案的確定。