三味拳參口服液中氧化苦參堿、苦參堿薄層鑒別檢測方法研究

2021-01-19 09:02:18郭艷欽王夢雪李云波杜西翠李澤庭劉格格位壽朋李瑩潔肖亞彬李淑娜邊青巖

飼料博覽 2020年12期

郭艷欽，王夢雪，李云波，杜西翠，李澤庭，張趁，劉格格，武珊，位壽朋，李瑩潔，肖亞彬，李淑娜，邊青巖

（1.河北錦坤動物藥業有限公司，河北辛集 052360；2.河北省獸用中藥制劑技術創新中心，河北辛集 052360；3.河北省獸藥監察所，石家莊 050035；4.辛集市動物疫病預防控制中心，河北辛集 052360；5.樂亭縣農業農村局，河北樂亭 063600；6.饒陽縣農業農村局留楚動物防疫站，河北饒陽 053900）

中藥苦參為豆科植物苦參（Sophora flavescens Ait.）的干燥根。春、秋二季采挖，除去根頭和小支根，洗凈，干燥。性苦、寒。歸心、肝、胃、大腸、膀胱經。具有清熱燥濕、殺蟲去積、利水的功效。主治濕熱瀉痢、黃疸、水腫、疥癬[1]。

苦參中含有大量的生物堿，其中苦參堿和氧化苦參堿含量最高，加起來占苦參藥材根總干重的2%，其中大部分以氧化苦參堿形式存在，同時還有其他相近的生物堿[2]。

三味拳參口服液為獸藥成方制劑，收載于《獸藥質量標準》（2017 年版）中藥卷。由拳參、穿心蓮、苦參三味中藥提取濃縮而成。具有清熱解毒、燥濕止痢的功效，主治濕熱泄瀉[3]。《獸藥質量標準》規定了氧化苦參堿薄層鑒別方法，但在實際檢測中發現，按照該標準規定方法進行薄層檢測時，氧化苦參堿對照品斑點在原點位置，無法根據氧化苦參堿對照品斑點判定樣品是否合格。通過多次試驗摸索，對原標準檢測方法進行了改進：在三氯甲烷加入前調節pH 對電極損傷比較小；樣品制備過程中用超聲提取代替加熱回流提取；展開過程用極性比較大的甲醇代替丙酮。改進后的方法可以達到比較滿意的檢測結果，現介紹如下。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

AUW220D 型十萬分之一電子分析天平，感量為0.000 01 g，島津國際貿易有限公司生產；KH-500E 型超聲波清洗器，昆山禾創超聲儀器有限公司生產；DK-98-Ⅱ型恒溫水浴鍋，天津市泰斯特儀器有限公司生產；硅膠G薄層板，青島海洋化工廠生產；層析缸，上海信誼儀器廠有限公司生產。

1.2 試劑

苦參堿對照品，中國食品藥品檢定研究院提供，含量為98.7%，產品批號為110805-201709；氧化苦參堿對照品，中國食品藥品檢定研究院提供，含量為92.9%，產品批號為110780-201909；三味拳參口服液樣品，河北錦坤動物藥業有限公司生產，產品批號為 20191201、 20191202、20191203；三氯甲烷、濃氨溶液、乙醇、苯、丙酮、甲醇、乙酸乙酯等均為分析純；試驗用水為高純水。

2 方法

2.1 改進前方法

2.1.1 溶液的制備

（1）氧化苦參堿對照品溶液：精密稱取氧化苦參堿對照品適量，加乙醇溶液制成含量為1 mg·mL-1的溶液，即得。

（2）供試品溶液：取三味拳參口服液10 mL，加三氯甲烷25 mL，搖勻，然后加濃氨溶液調pH至9.5，加熱回流1 h，放冷，取三氯甲烷液蒸干，殘渣加乙醇2 mL使溶解，即得。

2.2 改進后方法

2.2.1 溶液的制備

（1）氧化苦參堿對照品溶液：精密稱取氧化苦參堿對照品適量，加乙醇溶液制成含量為1 mg·mL-1的溶液，即得。

（2）苦參堿對照品溶液：精密稱取苦參堿對照品適量，加乙醇溶液制成含量為1 mg·mL-1的溶液，即得。

（3）供試品溶液：取三味拳參口服液10 mL，先加濃氨溶液調pH 至9.5，再加三氯甲烷25 mL，搖勻，超聲（220 V/50 Hz）提取30 min，放冷，取三氯甲烷液蒸干，殘渣加乙醇2 mL 使溶解，即得。

3 結果

3.1 改進前薄層色譜層析結果

吸取2.1.1 中氧化苦參堿對照品溶液和供試品溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G 薄層板上，以苯-丙酮-乙酸乙酯-濃氨試液（2∶3∶4∶0.2）為展開劑，展開，展距為10.5 cm，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液顯色。顯色結果見圖1。

3.2 改進后薄層色譜層析結果

吸取氧化苦參堿對照品溶液、苦參堿對照品溶液、供試品溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以苯-甲醇-乙酸乙酯-濃氨試液（2∶3∶4∶0.2）為展開劑，展開，展距為10.5 cm，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液顯色。顯色結果見圖2，在供試品色譜中，與對照品色譜相應位置上顯示相同顏色的斑點。

圖1 改進前薄層色譜層析結果

4 討論

4.1 pH調節

在實際檢測過程中發現，樣品加入三氯甲烷后調節pH，對電極損傷非常大，認為先調節pH后再加三氯甲烷更為合理，改變方法后對試驗結果沒有影響。

4.2 樣品制備過程

原標準是加熱回流1 h，其過程可能會造成氧化苦參堿轉化成苦參堿。陸蘊如等[4]研究了苦參在復方中化學成分的變化，結果表明，含苦參的復方制作成制劑時，受水、加熱等因素及與共存的還原性成分的作用，使氧化苦參堿含量逐漸降低直至消失，苦參堿含量逐漸增加。室溫超聲提取[5]時，薄層色譜法可以檢出明顯的氧化苦參堿斑點。因此將樣品制備方法加熱回流1 h 改為超聲（220 V/50 Hz）提取30 min，效果更好。

4.3 展開劑選擇

原標準展開劑為苯-丙酮-乙酸乙酯-濃氨試液（2∶3∶4∶0.2），展開顯色后，氧化苦參堿對照品在原點位置形成一個橙紅色斑點，沒有得到上行展開的斑點，根據對照品無法判定樣品斑點中是否有氧化苦參堿斑點，從而無法得出產品是否合格的結論。經過多次試驗摸索，將展開劑[6]中的丙酮用極性比較大的甲醇代替，其他色譜條件不變，展開顯色后，氧化苦參堿和苦參堿都可以得到清晰的斑點。