4 ℃低溫處理的自體脂肪對顳額部填充效果的效果分析

郭榮 邵星星 王穎 羅莎 陳歡 張倩 肖曼娜 王芳 余墨聲

隨著年齡的增長，皮膚會漸漸衰老并因失去水分而逐漸松弛下垂，甚至引起面部的局部凹陷[1]。移植填充自體脂肪顆粒可重新擁有年輕的容顏，但在自體脂肪移植過程中，即使多次填充常常因為自體脂肪的成活率低下填充效果仍不理想。有效提高自體脂肪的成活率，減少并發癥的發生是臨床關注的重點。有研究表明，4 ℃低溫處理的脂肪細胞在耐受缺氧性損傷以及在移植于裸鼠后成活率方面，都表現出良好的實驗效果[2-4]。我們采用4 ℃低溫處理的自體脂肪顆粒細胞移植填充額顳部，觀察脂肪顆粒細胞的填充效果及美容者滿意度。

對象與方法

一、對象

2018年1月～2019年4月，自愿接受額顳部自體脂肪顆粒移植填充的女性美容者100例，年齡21～32歲，均無明顯重要臟器及精神疾病史，亦無明顯顏面部凹陷填充術禁忌證。采用數字表法將美容者隨機分為兩組：常溫組50例，將抽取的自體脂肪用常溫生理鹽水洗滌純化并常溫保存；低溫組50例，將抽取的自體脂肪用4 ℃低溫生理鹽水洗滌純化并低溫保存。兩組美容者在術后1、3、6 個月時面訪。本研究經我院倫理委員會批準。

二、方法

1.自體脂肪顆粒獲取及純化：選取美容者大腿內側或外側處為吸脂區并根據擬采集脂肪量標記手術區域。對吸脂區進行消毒鋪單，靜脈全麻下常規行局部腫脹麻醉，待局部腫脹麻醉完善后再以20 ml注射器連接針管直徑3.0 mm、側孔直徑1 mm且2開孔吸脂針對皮下脂肪進行人工手動吸取脂肪，脂肪吸取量根據美容者所需移植總量事先評估。常溫組(常溫組)將上述抽取的脂肪與等量的常溫生理鹽水混勻靜置后在普通常溫離心機以1 000 r/min 離心3分鐘，去除上層的油脂和下層的液體部分，提取的中間層脂肪細胞再與等量的常溫生理鹽水混勻、離心，再次提取中間層的脂肪細胞，如此洗滌離心3次后，把收集的脂肪細胞分裝于10 ml注射器并放置于常溫生理鹽水中保存備用。低溫組獲取脂肪細胞的方法和常溫組類似，但洗滌用水為4 ℃生理鹽水及用低溫離心機(4 ℃)離心，收集的脂肪細胞放置于4 ℃生理鹽水中低溫保存備用。上述所有操作均在無菌環境中進行。

2.自體脂肪顆粒移植：對需脂肪移植注射部位標記消毒鋪單，所有美容者均在靜脈麻醉下在標記區域較為隱蔽部位(顳部發際線后面)用20G針頭做穿刺孔，選擇直徑1.4 mm單孔鈍頭注脂針，自上往下、從淺往深采取多注射點、多角度、多層次、少量脂肪注射，在注射時邊注射邊退針邊塑形，適當輕柔按摩注射部位，保證脂肪顆粒能夠均勻分布，不引起局部明顯隆起為標準，以免注射量過大導致面部腫脹變形[5]。術后24小時內間斷冷敷填充區，以減輕局部水腫。

3.評價指標:(1) 醫師對修復的滿意度：非常滿意：美容者的凹陷區得到矯正，臉部輪廓自然，填充區飽滿柔和，且無不良反應；一般滿意：凹陷區得到矯正，臉部輪廓和表情較為自然，不良反應較少；不滿意：凹陷區改善不明顯，且發生嚴重不良反應。總滿意率=(非常滿意+一般滿意)/例數×100%[6]。(2)美容者對修復的滿意度：移植后6個月，通過問診的形式統計美容者對面部修復術的滿意度。滿意度評分為0～10分，10分為最滿意，0分為最不滿意，評分等于或超過6分為滿意，評分低于6分為不滿意。(3)其他評價指標：記錄美容者額顳部紅腫消退時間、并發癥人數(包括感染、囊腫、硬結等)以及術后6個月累計2次填充人數。

三、統計學方法

結果

1.醫師對修復的滿意情況:自體脂肪填充后，隨著時間的延長，醫師對兩組美容者不同時間總滿意率逐漸降低。常溫組1、3、6 個月分別為100%、94%和86%；低溫組分別為100%、98%和94%。但總滿意率兩組間比較差異無統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 醫師對修復的滿意情況(例，%)

2.美容者對修復的滿意度評分見表2。術后6個月時常溫組美容者不滿意例數較術后1個月時多，且多于同時期低溫組例數，差異有統計學意義(P<0.05)；低溫組美容者自體脂肪填充后，不滿意人數均較少，組內各時間點比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。

表2 美容者對修復的滿意度評分(例，%)

3.其他評價指標見表3。常溫組美容者紅腫消退時間較低溫組長，常溫組要求二次填充的人數較低溫組多,差異有統計學意義(P<0.05)，兩組術后發生并發癥人數比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

表3 兩組美容者術后其他評價指標

討論

隨著年齡的不斷增長，面部將逐漸出現萎縮、凹陷、皺紋、松弛等現象，主要是因為面部脂肪組織不斷減少、老化以及深層軟組織結構松弛下垂，皮膚彈力纖維漸漸減少、變粗等引起，自體脂肪填充使美容者面部的皺紋和凹陷部位均得到有效矯正，且移植后面部的形態和質感自然，是改善面部容貌，恢復皮膚視覺年輕化的一種有效方法[7]。

有研究表明，在添加或不添加冷凍保護劑的情況下，將脂肪細胞經梯度低溫即使凍存于-80 ℃長達6個月，仍有脂肪顆粒細胞存活，解凍移植于生物體后有新生血管生成，并能達到較滿意的填充效果[2-4，8]。抽取的脂肪顆粒細胞在室溫下保存1小時脂肪細胞膜破壞率為(33.0±2.5)%，室溫保存5小時脂肪細胞膜破壞率已高達為(70.0±3.5)%，此時已不再適合用于做自體脂肪移植，但4 ℃保存3小時脂肪細胞膜破壞率仍較低[(9.7±1.8)%]，4 ℃保存24小時脂肪細胞膜破壞率也僅為(20.0±2.6)%；同時檢測不同保存溫度及不同保存時間脂肪細胞GAPDH的活性說明，室溫下保存3小時的脂肪細胞活性值已較低，但4 ℃保存3小時的脂肪細胞仍能保持著原有活性，說明在4 ℃低溫下采集的脂肪細胞其細胞膜的完整性能保持在更佳狀態，同時脂肪細胞的活性也較高。在ADSCs的提取效率及增殖能力方面，室溫下保存3小時后脂肪細胞其細胞增殖活性值已很低，而4 ℃環境中保存時間較短的脂肪細胞其ADSCs增殖能力較好，即使保存24小時其所提取的ADSCs在提取效率及增殖能力方面亦能與室溫保存1小時相似，該實驗結果表明在4 ℃環境中采集、處理的體外脂肪顆粒可以保證其在24小時內保持著絕大部分的增殖活性，進一步提示在脂肪細胞采集、處理及轉運的各個環節中都應盡力在低溫下進行[9]。

有研究表明，移植前熱缺血時間長短對移植物的存活時間以及移植物功能的恢復有明顯影響[10-11]，縮短移植物熱缺血時間是移植手術追求的目標之一。移植前對抽取的脂肪細胞在低溫下進行洗滌純化操作，降低熱缺血時間，降低脂肪細胞的代謝率和耗氧量，有利于保存細胞活性，對脂肪細胞的成活率有顯著的提高，同時，術后冰敷也可以降低局部組織水腫和脂肪細胞的代謝率，從而有利于移植的脂肪細胞在血供尚未建立的情況下，能適應營養匱乏的惡劣環境，存活的更多。

本研究中，脂肪細胞被提取后，立即與4 ℃冰鹽水混合，以降低脂肪細胞的溫度，起到低溫保護作用，在洗滌純化脂肪細胞的全程操作過程中亦均在4 ℃低溫中進行，脂肪細胞移植后，額顳部皮膚給予局部冰敷以降低溫度，也有利于脂肪細胞能緩慢恢復活力，避免了急速低溫、急速高溫的不良影響。