LOXL1基因rs2165241位點多態(tài)性與剝脫綜合征性青光眼易感性關(guān)系的Meta分析

唐文婷，喻 謙，田 美

剝脫綜合征(exfoliation syndrome，XFS)是一種與年齡相關(guān)的全身性疾病，常以細(xì)胞外基質(zhì)中剝脫物質(zhì)異常聚集為主要病理生理特征[1]。此疾病可累及全身多個臟器，如眼、皮膚、心腦血管、肝臟、肺等，其中眼為其主要受累器官[2]。XFS一般具有較高的青光眼發(fā)生率，GAYATHRI等[3]發(fā)現(xiàn)約1/4的XFS病人可產(chǎn)生眼內(nèi)壓增高等并發(fā)癥，而其中大概1/3的病人最終可能會發(fā)展成剝脫性綜合征性青光眼(exfoliation glaucoma,XFG)。XFG被認(rèn)為是XFS疾病的重要演進(jìn)過程[3-4]。其臨床特征性主要表現(xiàn)為眼球小梁周圍蓄積了剝脫物質(zhì)、脫落的色素，引起房水流出通道受阻，使眼壓增高和視神經(jīng)受壓，最后導(dǎo)致繼發(fā)性青光眼的發(fā)生，嚴(yán)重者可發(fā)展為失明[4]。XFG與原發(fā)性開角型青光眼相比，具有難以控制的高眼壓、視野迅速進(jìn)行性損害、藥物治療效果差的特點[5]，嚴(yán)重降低了病人的生活質(zhì)量，導(dǎo)致極高的致盲率。

XFG具有復(fù)雜的發(fā)病機(jī)制，容易受到生活環(huán)境等多種因素的影響，有一定的遺傳傾向，并且具有明顯的地域、特定種族的聚集性特征[3]。近年來，關(guān)于XFG的遺傳學(xué)研究進(jìn)展為揭示該疾病的分子機(jī)制奠定了堅實的基礎(chǔ)，關(guān)于類賴氨酰氧化酶1(lysyl oxidase-like 1，LOXL1)多態(tài)性與XFG發(fā)病風(fēng)險的相關(guān)性研究陸續(xù)在北美、亞洲、歐洲等不同地域的人群中均有報道[6]。DE JUAN-MARCOS等[7]報道顯示，LOXL1的T等位基因與XFG的發(fā)生在高加索人種中呈現(xiàn)出負(fù)相關(guān)性，但我國學(xué)者M(jìn)AYINU等[8]認(rèn)為，攜帶等位基因C的人群患XFG風(fēng)險明顯低于攜帶等位基因T的人群。目前尚無研究證實LOXL1基因rs2165241位點多態(tài)性與XFG易感性是否存在相關(guān)性目前，因此本研究旨在通過Meta分析，探討LOXL1基因rs2165241位點是否和XFG的發(fā)病風(fēng)險具有相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 檢索策略 全面檢索Web of science、Embase、PubMed、CNKI、萬方數(shù)據(jù)庫，設(shè)定檢索年限均為建庫至2019年8月，同時對納入文獻(xiàn)的參考資料進(jìn)行檢索，完善相關(guān)的具體信息。對關(guān)于LOXL1基因rs2165241位點與XFG相關(guān)的病例對照研究進(jìn)行系統(tǒng)檢索。文獻(xiàn)的檢索策略采用主題詞加自由詞相結(jié)合，中文檢索詞包括：剝脫綜合征性青光眼、類賴氨酰氧化酶1、多態(tài)性等，英文檢索詞包括： exfoliation glaucoma、lysyl oxidase-like 1、LOXL1、polymorphism等。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) (1)文獻(xiàn)要求：與LOXL1基因rs2165241位點與XFG有關(guān)的病例-對照研究，要求含有具體的基因頻率數(shù)值；(2)研究對象： XFG病人，具有明確的臨床表現(xiàn)和病理組織學(xué)檢測報告；(3)納入研究樣本量>30例。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) (1)非病例對照研究；(2)會議論文、個案、綜述；(3)重復(fù)發(fā)表的文獻(xiàn)；(4)對照組基因分布頻率不符合哈迪-溫伯格平衡遺傳學(xué)定律。

1.3 文獻(xiàn)篩選、資料提取和評估 在充分閱讀文獻(xiàn)題目及摘要的基礎(chǔ)上，堅持獨立的原則，2位研究員參照文獻(xiàn)納入與排除標(biāo)準(zhǔn)提取文獻(xiàn)相關(guān)資料，同時對文獻(xiàn)質(zhì)量作出評估。對與本研究制定標(biāo)準(zhǔn)相鍥合的文獻(xiàn)，進(jìn)行詳細(xì)資料的提取，具體包括：第一作者、發(fā)表時間、國家/地區(qū)、種族、樣本量、對照組及病例組的基因型分布數(shù)量等。當(dāng)出現(xiàn)意見分歧時，咨詢臨床經(jīng)驗更豐富的第三人協(xié)商解決。遵循相關(guān)基因報道聲明評價的原則[9]對納入的每個研究進(jìn)行質(zhì)量評估并計算得分。評價具體細(xì)則如下所示：(1)有充分的樣本含量；(2)診斷標(biāo)準(zhǔn)清楚；(3)對照組與并列組具有可比性，且對照組基因分布符合哈迪-溫伯格平衡遺傳學(xué)定律；(4)有良好的匹配分組；(5)有合理的基因檢測方法；(6)有充分的數(shù)據(jù)。以上標(biāo)準(zhǔn)每項1分，滿足1項可得1分，累計積分，總分>3分可視為質(zhì)量好、可靠性高。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 運用軟件Stata 11.0對納入數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，采用比值比(OR值)與95%置信區(qū)間(95%CI)進(jìn)行效應(yīng)量評價LOXL1基因rs2165241位點的多態(tài)性與剝脫綜合征性青光眼易感性的相關(guān)性。所納入研究符合哈迪-溫伯格平衡遺傳學(xué)定律的分別統(tǒng)計在5種基因模型(TT+TC vs.CC;TT vs.TC+CC;TT vs.CC;TC vs.TT;T vs.C)分布下的基因頻率分布，并且對合并的數(shù)據(jù)運用Q檢驗進(jìn)行異質(zhì)性分析，如果P>0.1且I2<50%，Meta分析采用固定效應(yīng)模型進(jìn)行；反之則采用隨機(jī)效應(yīng)模型。最后進(jìn)行發(fā)表偏倚及敏感性分析檢驗。

2 結(jié)果

2.1 文獻(xiàn)檢索流程圖及檢索結(jié)果 設(shè)定檢索詞，通過計算機(jī)初檢到相關(guān)文獻(xiàn)146篇，按照既定標(biāo)準(zhǔn)逐層篩選剔除后，最終納入19篇文獻(xiàn)[7-8,10-26]，均為病例-對照研究。其中關(guān)于高加索人種文獻(xiàn)11篇[7,10-11,14-15,17,20-21,24-26]，亞洲人種文獻(xiàn)8篇[8,12-13,16,18-19,22-23]。這其中病例組人數(shù)2 422例，對照組人數(shù)3 549例。遵循相關(guān)基因報道聲明評價的原則對納入的研究進(jìn)行質(zhì)量評估，納入的每篇文獻(xiàn)質(zhì)量評分均>3分，質(zhì)量高。本研究文獻(xiàn)篩選流程圖見圖1，各個納入研究的基本資料特征及基因頻率分布情況見表1。

表1 各納入文獻(xiàn)的基本資料特征及基因頻率分布情況

2.2 Meta分析結(jié)果

2.2.1 總體人群中LOXL1基因rs2165241位點多態(tài)性與XFG關(guān)系的Meta分析 本研究共納入19篇文獻(xiàn)，在隱性基因模型當(dāng)中，異質(zhì)性檢驗后提示各研究間具有異質(zhì)性(I2=71.8%，P<0.01)，故采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行數(shù)據(jù)合并分析，結(jié)果顯示，對總體人群來說，LOXL1基因rs2165241位點多態(tài)性與XFG易感性的關(guān)聯(lián)具有統(tǒng)計學(xué)意義(TT vs.TC+CC：OR=3.87，95%CI=2.83～5.29,P<0.01)，表明等位基因T與XFG的易感性相關(guān)(見圖2)。各個基因組比較結(jié)果詳見表2。

表2 各個基因組比較結(jié)果

2.2.2 LOXL1基因rs2165241位點多態(tài)性在不同人群中XFG發(fā)病關(guān)系 此19項研究分成2個亞組(亞洲人群和高加索人群)分別進(jìn)行分析，并進(jìn)行異質(zhì)性檢測。隱性基因模型的結(jié)果顯示，涉及亞洲人群的8項研究中各項研究間存在異質(zhì)性(I2=69.2%，P<0.01)，故采用隨機(jī)效應(yīng)模型，分析結(jié)果為，亞洲人群的LOXL1基因rs2165241位點多態(tài)性與XFG發(fā)病風(fēng)險之間無統(tǒng)計學(xué)關(guān)聯(lián)性(TT vs.TC+CC：OR=1.74，95%CI=0.58～5.17,P>0.05)；對高加索人群來說，11項研究異質(zhì)性檢驗后顯示，各項研究結(jié)果間存在統(tǒng)計學(xué)異質(zhì)性(I2=75.2%，P<0.01)，故采用隨機(jī)效應(yīng)模型分析，結(jié)果為高加索人群的LOXL1基因rs2165241位點多態(tài)性會導(dǎo)致XFG易感性(TT vs.TC+CC：OR=4.25,95%CI=3.07～5.88,P<0.01)增加。

2.3 發(fā)表偏倚及敏感性分析 本研究運用Stata11.0軟件相關(guān)的Egger′s檢驗及Begg′s檢驗進(jìn)行本項研究的發(fā)表偏倚分析，結(jié)果提示未見明顯發(fā)表偏倚，Begg′s檢驗見圖3，Egger′s檢驗t=-1.82,P>0.05。對所納入的每篇文獻(xiàn)逐一刪除后進(jìn)行敏感性分析，結(jié)果見圖4，每篇文獻(xiàn)剔除后，對總結(jié)果及亞組分析結(jié)果影響變動不大，說明納入的研究不存在明顯的異質(zhì)性。

3 討論

LOXL1屬于賴氨酸氧化酶家族，它的基因分布于人染色體15q22、15q24.q25上[26]。LOXL1基因可編碼一種銅依賴的氨基氧化酶，其功能可以通過賴氨酸的氧化脫酰氨作用催化結(jié)締組織中的膠原蛋白纖維和彈性蛋白纖維，它能推動膠原纖維和彈性纖維的繼續(xù)發(fā)育，還在保持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)上起著至關(guān)重要的作用，并參與彈性纖維的形成、維持及重塑的全過程[27-29]。XFG病人的眼內(nèi)部組織里，大部分的LOXL1酶和白色細(xì)屑性絮狀剝脫性物質(zhì)呈現(xiàn)一個結(jié)合狀態(tài)，并沉積于眼部組織，導(dǎo)致眼壓增高，并且LOXL1的表達(dá)蛋白是XFG剝脫性絮狀物的標(biāo)志性物質(zhì)和主要成分，包括眼內(nèi)、眼外[30]。亦有學(xué)者等[31]研究發(fā)現(xiàn)，LOXL1基因相關(guān)的表達(dá)缺失或功能減退是影響XFG的一個重要遺傳機(jī)制，如果LOXL1基因產(chǎn)生變化，將導(dǎo)致LOXL1蛋白表達(dá)量的相關(guān)變異，可能會誘發(fā)XFG病人眼內(nèi)組織沉積大量的異常纖維，這可能是剝脫性物質(zhì)最初的來源[32]。但LEE等[33]在新加坡的研究并未發(fā)現(xiàn)rs2165241這一SNP位點與XFG發(fā)病風(fēng)險相關(guān)。同時，TANG等[34]的研究表明rs2165241位點位于LOXL1的編碼區(qū)域，并非在啟動子區(qū)域，其等位基因頻率、基因型、基因單倍體型和復(fù)合基因型在不同人群差異較大，且在XFG病人中的分布也有所不同。唐聰?shù)萚35]做了該基因與XFG易感性的Meta分析，但納入的文獻(xiàn)較為陳舊，且納入文獻(xiàn)中有2篇[36-37]研究的是開角型青光眼，這些文獻(xiàn)在進(jìn)行Meta分析時應(yīng)該剔除。為了獲取更加可靠的循證醫(yī)學(xué)證據(jù)，本研究采用Meta分析的方法對現(xiàn)有的研究進(jìn)行了綜合分析。

本研究系統(tǒng)評價了LOXL1基因rs2165241位點多態(tài)性與XFG易感性的相關(guān)病例對照研究。本研究共納入了19篇文獻(xiàn)，包括了XFG組的2 422例和對照組的3 549例，進(jìn)行Meta分析時利用了顯性基因模型，結(jié)果提示總體人群的LOXL1基因rs2165241位點多態(tài)性與XFG易感性有關(guān)聯(lián)，具有統(tǒng)計學(xué)意義，說明了總體人群中，攜帶T等位基因的人群可能會增加患有XFG的風(fēng)險，這與先前的部分研究結(jié)果一致。本研究結(jié)果存在一定異質(zhì)性，但顯示為中低度異質(zhì)性，有可能與研究地域分布不均或是因為XFG疾病的納入標(biāo)準(zhǔn)不同而產(chǎn)生的差異。考慮到種族及對照組的來源不同會對研究結(jié)果有所影響，故本研究將總體人群按照人種不同進(jìn)行亞組分析，發(fā)現(xiàn)對于亞洲人群而言，LOXL1基因rs2165241位點多態(tài)性與XFG發(fā)病風(fēng)險無統(tǒng)計學(xué)關(guān)聯(lián)；而高加索人群中的LOXL1基因rs2165241位點多態(tài)性會增加XFG的有關(guān)易感性，我們可以推測，在高加索人群中，LOXL1基因rs2165241位點的突變可能與啟動子功能等位基因有著緊密的關(guān)聯(lián),rs2165241位于LOXL1基因的編碼區(qū)內(nèi)，并未在啟動子區(qū)域，因而，該位點的多態(tài)性從理論上講是不影響該基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)水平的，但本研究結(jié)果提示高加索人群中有更高XFG易感性的人群攜帶了T等位基因，其原因可能是在高加索人群中，rs2165241位點雖然不影響其蛋白的表達(dá)量，但是可能與其表達(dá)的蛋白產(chǎn)物的性質(zhì)有關(guān)，攜帶T等位基因編碼的LOXL1蛋白與C等位基因編碼的蛋白在其一級結(jié)構(gòu)及空間結(jié)構(gòu)上可能存在著較大不同，最終導(dǎo)致該蛋白的生物活性發(fā)生變化，導(dǎo)致攜帶不同等位基因型的高加索人群患XFG的發(fā)病率不盡相同。當(dāng)然，這一具體發(fā)病機(jī)制有待進(jìn)一步的深入研究。但在亞洲人群中，LOXL1基因rs2165241位點多態(tài)性卻與XFG發(fā)病無關(guān)，其原因可能是：(1)LOXL1基因rs2165241位點有關(guān)的等位基因和基因型分布是存在差異的，特別是在不同人群中，亞洲人群中TT基因型的基因頻率就要相對偏低；(2)不同的人群具有不同的連鎖不平衡模式；(3)XFG可能與年齡、種族、生活環(huán)境、吸煙情況等其他因素相關(guān)。

本次研究具有一定局限性。首先，Meta分析納入的研究間有一定異質(zhì)性，這可能與納入的各個研究的具體臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)、基因測序方法不盡相同有關(guān)，故此希望有持續(xù)地大樣本的LOXL1基因與XFG發(fā)病關(guān)系的相關(guān)研究；其次，本次研究檢索文獻(xiàn)限定語種為中英文，且納入的人群僅限于高加索人群和亞洲人群，可能會導(dǎo)致結(jié)論有所偏差；再次，由于缺乏部分原始數(shù)據(jù)，尚不能對吸氧、性別、年齡、具體生活方式等具有交互作用的因素進(jìn)行更深入地研究，本結(jié)論有待其他證實。

綜上所述，LOXL1基因rs2165241位點多態(tài)性與XFG發(fā)病風(fēng)險相關(guān)，特別是在高加索人群中。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的研究進(jìn)展，需要進(jìn)一步探討基因-基因和基因-環(huán)境之間的相互作用來考證LOXL1基因多態(tài)性對XFG的發(fā)病風(fēng)險及影響，因此有必要繼續(xù)進(jìn)行多區(qū)域的大樣本量研究，且涉及到非洲或拉美人種的病例對照研究，以求為XFG的基礎(chǔ)研究和臨床治療提供更有力的依據(jù)。