山楂中酚類成分活性的多樣性及活性測定方法研究進展

路芳，章海風

1. 長春醫學高等專科學校（長春 130031）；2. 揚州大學旅游烹飪學院（揚州 225127）

山楂作為食藥兼用的植物資源，其果實、葉和枝干具有抗氧化、抗腫瘤、抗糖尿病以及內皮細胞保護的功效[1]。山楂果皮和果肉已被驗證含有多種酚類物質，主要為酚酸類、花青苷類、黃酮醇苷類、原花青素類4種化合物[2]。山楂由于栽培地域不同，其所含的化學物質也存在差異[3]，所以篩選適合種植與營養物質豐富山楂品種也是至關重要的。基于此，對山楂中所含有的活性物質的多樣性進行總結，旨在為以后的山楂品種篩選與山楂品質的鑒定提供理論基礎。

1 山楂的藥理作用

山楂（Crataegus）屬在全球有1 000多個物種，分布于亞洲、非洲、美洲、北美洲等。目前我國具有的山楂種類為18個種和6個變種[4]，分布于我國的各個地方，其中以我國的河南省、山西省產量最高。在我國可以作為藥用的山楂只有2種，分別是山楂（Crataegus pinnatifidaBge）和山里紅（Crataegus pinnatifidavar.majorN.E.Br.）[5]。2005年山楂的果實和葉被中國藥典收錄[6]。

山楂在我國的應用廣泛，具有很悠久的應用歷史，在東晉的《肘后備急方》[7]、明代的《本草綱目》[8]等醫學藥方中都具有詳細藥用方法的介紹。從1980年以后，歐洲的一些醫學家開始對山楂中的花與葉的提取物的藥理作用進行研究。山楂在臨床應用上的研究主要是對輕度充血性心力衰竭患者進行輔助性的治療，結果表明山楂對輕度充血患者具有明顯的效果，其效果表現在提高運動的耐受率、降低血壓、調節心率、降低心源性猝死的發生率[9-10]，從而得出結論：山楂的提取物對充血性心衰的作用效果并不低于一些強心性藥物，并且山楂的提取物具有較低的副作用[11]。在我國，山楂葉子作為制作益心酮的主要成分，通過臨床試驗發現，山楂具有防止人體的動脈硬化，調節血糖、血脂、血壓，改善人體的心腦血管系統的功效；同時，山楂黃酮具有抗氧化、抗炎、鎮痛、利尿、護肝的作用[12-20]。除此之外，山楂還具有抗氧化、抗炎、鎮痛等作用。山楂在人體心腦血管疾病方面的主要藥用成分為酚類物質，但是山楂中的酚類物質還受到山楂的種類、山楂不同的部位、不同生長階段等方面的影響[21]。

2 山楂中酚類的種類

在1950年之前，我國對于山楂的研究主要集中于山楂中的維生素、三萜類活性物質的研究。隨著后期的社會發展，我國的醫學家也開始注意山楂對人體的心腦血管系統的作用，并開始對酚類中的有效成分進行分析。從山楂中，可分離出150多的活性物質[22]，其中包括一些有機酸、甾醇類、三萜類、黃酮類，從而表明山楂類植物的花和葉中含有多種酚類物質。

黃酮是山楂中主要的藥用成分之一，黃酮種類豐富多樣，包含黃酮及其苷類、雙氫黃黃酮醇、異黃酮醇類、酮苷類、花色苷類、聚合黃酮類和橙酮類。常見的幾種黃酮類的分子式見圖1。

圖1 山楂內常見的化學物質

在山楂的黃酮研究過程中，研究較多的黃酮包括斛皮素、蘆丁、金絲桃苷、牡荊素、牡荊素-2-O-鼠李糖苷、牡荊-4-O-葡萄糖苷、山奈酚、乙酰牡荊素-4-鼠李糖苷、乙酰基牡荊素、6-O-乙酰基牡荊素、3-O-β-D-吡喃半乳糖、（6-1）-α-L-鼠李糖槲皮素、α-L-鼠李糖槲皮素，3-O-β-D-吡喃葡糖，（6-1）-7-O-α-L-鼠李糖-3-O-β-D-葡糖山萘酚、4-O-鼠李糖蘆丁等[23]。高光躍等[24]比較了山楂葉與果實中的黃酮的量，結果表明山楂葉中所含有的酚類比例遠高于山楂果實中的酚類。

在山楂中，研究人員還發現了綠原酸、咖啡酸等酚類化學物質。賈亞楠[25]從山楂中分離出具有芳香性的物質，被稱為紅果酸，該類物質可以被稱為酚類次生代謝產物。Sun等[26]研究表明紅果酸具有抗氧化功能，表明山楂具有作為抗氧化藥物開發的潛力。

3 山楂中各種酚類的檢測方法及質量控制的指標

山楂中酚類物質目前的檢測方法有毛細管電泳法、分光光度法、HPLC法、薄層層析法和LC-Ms法等[27-32]。現在，我國檢測黃酮的方法主要為比色法，其中以酚類蘆丁作為對照物，以亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉作為比色法的顯色劑，該方法在500 nm波長處測定。不同的人采用不同的顯色劑。周元芬等[33]用AlCl3作為顯色劑，測定山楂葉中的黃酮含量，為35%。張文莉等[34]使用蘆丁作為對照，使用硝酸鋁作為顯色劑，得到的黃酮含量為86%。同樣的試驗材料，得到的黃酮總量差異較大。原因在于樣品測定過程中，一些酚類容易吸收光譜，導致黃酮的測定結果受到嚴重的干擾，所以比色法測定黃酮準確度很低。

高效液相色譜（HPLC）法作為最新的檢測黃酮的方法，它具有高準確度、高靈敏度、高精密度的優點，在藥品、化妝品、食品等領域已被廣泛應用。HPLC檢測方法是我開發新產品、產品質量控制以及分析檢測的首選方法。該方法在檢測山楂黃酮中的檢測技術已經成熟，HPLC中的部分操作方法已被國家藥典檢測機構使用采納[35]。原花青素為山楂中的另一種酚類，由于原花青素在山楂中存在多種形式，人們測量難以將其定性。在一些研究中，原花青素成分已從山楂中初步分離得到。Gabriela等[36]使用甲醇作為流動相，測定原青花素類，但是原青花素類酚類并未得到很好分離。之后又有學者使用乙腈和去離子水為流動相，對山楂中的2, 6聚體進行OPC成分檢測，在檢測時需要提前將聚酰胺中的一些物質進行去除，此方法復雜，并且不能對黃酮與原青花素類進行檢測。Gabriela等[36]發明一種新型的測定方法，可以同時測定黃酮與花青素在山楂中的比例，這種方法可以特異性指定花青素的成分，這種方法進行一次樣品分析所需要的時間為4 h。

黃酮與原花青素是山楂最重要的藥用成分，一些歐洲國家將原花青素、黃酮作為山楂藥品質量的檢測指標[37-38]。《中華人民共和國藥典》則以蘆丁、金絲桃苷2種酚類作為質量控制的指標[3]，一些研究山楂的學者曾經也針對使用這兩種酚類作為質控指標提出過自己的見解[39-40]。趙彩云等[41]使用聚酰胺層析法對山楂的混亂品種進行分析，以牡荊素鼠-李糖苷作為山楂品質的代表性組分，山楂中的金絲桃苷所占的比例較低，牡荊素鼠李糖苷與蘆丁含量較高。所以后面一些研究者將前面2種物質作為山楂的質檢指標[41-42]。英錫相[43]比較了不同產地的山楂，結果發現不同產地的牡荊素鼠李糖苷與蘆丁所含的比例具有很大的差異，并提出在臨床應用方面，不能用不同產地的藥物進行混用，以保證臨床上使用的藥物的藥效與安全性。由此可見，我國的山楂質控方面存在一些缺陷，應對不同產地的山楂進行徹底研究，使我國的山楂產品質量指標完善。

4 山楂中原青花素成分的研究

目前，對于山楂的研究，研究人員已分離出30種原花青素類成分，山楂的不同部位所含的原青花素種類相同，但是所含的原青花素的比例和含量存在明顯的差異[44-45]。山楂主要存在的原花青素為二聚體和三聚體，其中二聚體主要包括有B2和B5兩種，而三聚體主要包括C1[46-47]。目前研究過原花青素的種類主要有云南山楂、山楂、伏山楂，這三種山楂中的原花青素種類十分相似，但是它們每一種的原花青素所占的比例又存在較大的差異。在國外，歐洲山楂也進行過詳細的原花青素成分測定，其中包含9種原花青素成分，原花青素B4也只有在這種山楂中報道過[48]。

除了上述的原花青素成分，有報道稱我國的山楂中也含有PC類的多酚。但由于相關文獻極少，而且PC類多酚也極其難以分離，所以是否存在這類PC類多酚，需要進行進一步的研究[47]。

研究表明，山楂在一年的生長過程中，其多酚含量最多的是每年的6月份或者是每年的8-9月份。所有人工種植的山楂中所檢測到的多酚均高于野生山楂所產生的多酚，具體見圖2。

圖2 不同時期山楂葉片多酚含量變化

5 山楂中的黃酮成分的研究

山楂中的黃酮研究始于歐洲，最為常見的是采用高效液相色譜（HPLC）法對山楂進行測定，研究發現一般的山楂中含有的黃酮主要以碳苷黃酮的形式存在，在山楂中牡荊素衍生物類含量最為豐富，然后是含有氧苷黃酮的斛皮素衍生物。在西方國家，山楂的產量較低，所以并沒有人對不同季節采收山楂對山楂中黃酮產量影響進行研究。我國開始有大批山楂研究人員開始對不同的季節采收的山楂進行黃酮測定，不同的研究者得出的山楂采集最佳時間并不相同[49-50]。

不同的研究者分析山楂最佳采集時間，但是他們結果中的采集最佳時間并不相同，其中大部分的研究者建議在每年的在8-10月采集山楂，在山楂果實成熟之后采集山楂[51-52]，也有研究者提出4-5月份采集，此時為黃酮含量最高的采集最佳時間[53-54]，除此之外也有報道稱6-8月份為最好的采集時間[55-56]。根據試驗表明，采集不同種類山楂，采集最高黃酮的最佳時間不同，栽培山楂當地管理部門應當負責幫忙協助當地的栽培者，測量出當地的山楂的最佳采集的時間。

不同品種的山楂黃酮含量也存在差異，通過研究大金星、大紅、敞口、大旺和野生山楂5種山楂在不同的月份黃酮含量的變化，由圖3可知，人工種植的山楂黃銅含量高于野生山楂黃銅的含量，每年的8月份是該地采集山楂的最佳時期。

圖3 不同時期山楂中黃酮的含量變化

6 展望

山楂的應用在我國已有很久的應用歷史，隨著生活水平的提高，人們開始注意一些藥食同源的食品，山楂已被我國藥典機構列入藥食同源的植物，除了具有特有的口感之外，其還具有降低血糖、抗氧化和防衰老的作用。在抗氧化、抗糖尿病方面，山楂具有藥用價值開發的潛力，除了上述黃酮類具有調節人體的心腦血管系統疾病的明顯作用，近年來又發現山楂中含有紅果酸（Eucomic），一些外國學者發現紅果酸可以增強細胞色素C的氧化作用，并在一定程度上具有延緩人體衰老的作用[26]，可作為未來的天然抗氧化藥物開發。

7 結語

山楂作為食品常出現在人們的面前，被大家熟悉與認知，在食用口感方面也得到廣大消費者的認可。但是如何高效地利用山楂中的有效化合物還有待研究。山楂采集的最佳時間為每年的8-9月份，因為此時是山楂中酚類及多種活性物質含量最高的時期。隨著社會的發展，人們對食藥同源的物質更加青睞，為山楂的發展帶來前所未有的機遇，特別是未來山楂在藥品方面的開發。