大白菜中氟氯氰菊酯殘留的快速測定及方法評估

譚慧林, 金永生, 余 琪, 牛貴洋, 包東東, 陳海元, 張志東

(1.阿克蘇地區(qū)食品安全檢測中心，新疆阿克蘇 843000；2.阿克蘇地區(qū)檢驗(yàn)檢測中心，新疆阿克蘇 843000；3. 新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院微生物應(yīng)用研究所/新疆特殊環(huán)境微生物實(shí)驗(yàn)室，烏魯木齊 830091)

0 引 言

【研究意義】大白菜為2年生草本，十字花科蕓薹屬常見蔬菜，其常見的蟲害主要有小菜蛾[1]、蚜蟲、白粉虱、菜螟等[2, 3]。氟氯氰菊酯是一類化學(xué)合成類殺蟲劑，具有觸殺、胃殺等作用，特別適用于防治大白菜生產(chǎn)過程中的常見害蟲。氟氯氰菊酯屬于殘效期比較短的農(nóng)藥，但隨著害蟲對該類農(nóng)藥抗藥性日漸增加，導(dǎo)致用藥量不斷增加，其殘留量也隨之變大。對加大氟氯氰菊酯農(nóng)藥殘留篩查，及時(shí)有效進(jìn)行相關(guān)重大食品安全預(yù)警、安全評估有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】目前，國內(nèi)外氟氯氰菊酯農(nóng)藥殘留定量測定方法主要有氣相色法[4-9]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀法[10-15]?？鞕z技術(shù)及相關(guān)試劑盒因其快速、高效、簡便、性價(jià)比高的特點(diǎn)，特別適合食品的快速抽查，但由于相關(guān)產(chǎn)品生產(chǎn)工藝簡單、易仿造等，導(dǎo)致快檢生產(chǎn)廠家較多，產(chǎn)品質(zhì)量良莠不齊[16-19]，在相關(guān)產(chǎn)品使用前有必要進(jìn)行對相關(guān)快檢產(chǎn)品進(jìn)行評估，保證產(chǎn)品的可靠性，確認(rèn)相關(guān)產(chǎn)品在監(jiān)督機(jī)構(gòu)的快檢篩查中的適用應(yīng)性。國家食品藥品監(jiān)督管理總局發(fā)布的《食品快速檢測方法評價(jià)技術(shù)規(guī)范》[20]作為食品快檢的綱領(lǐng)性文件，對食品快速檢測方法的目的、適用范圍、評價(jià)指標(biāo)、評價(jià)方法、評價(jià)步驟、 評價(jià)結(jié)果及報(bào)告出具等列出了指導(dǎo)性要求?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】國內(nèi)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)涉及氟氯氰菊酯農(nóng)藥殘留的檢測主要依照NY/T 761-2008《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定》、GB/T 5009.146-2008《植物性食品中有機(jī)氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥多種殘留量的測定》進(jìn)行檢測，然而，在食用農(nóng)產(chǎn)品安全抽檢工作時(shí)，按照抽檢流程和檢測要求，耗時(shí)較長，當(dāng)氟氯氰菊酯殘留不合格時(shí)，食品安全預(yù)警和產(chǎn)品召回往往效果不理想。研究菊酯快檢試劑盒在大白菜氟氯氰菊酯農(nóng)藥殘留中適用性評價(jià)。【擬解決的關(guān)鍵問題】以NY/T 761-2003《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定》方法作為參比方法，檢測阿克蘇市面大白菜中的氟氯氰菊酯殘留，進(jìn)行快檢菊酯快檢試劑盒的靈敏度、特異性、假陽性率和假陰性率等指標(biāo)的評價(jià)，為大白菜中的氟氯氰菊酯快速篩查工作提供技術(shù)借鑒。

1 材料與方法

1.1 材 料

大白菜分別隨機(jī)購自阿克蘇市主要菜市場及周邊菜店，均為地產(chǎn)大白菜。

氟氯氰菊酯標(biāo)準(zhǔn)品(濃度為100 mg/mL，有效期至202008)，北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司；丙酮(色譜純)、正己烷(色譜純)，均來自sigma公司。

Agilent 7890B氣相色譜儀(配電子捕獲檢測器)，石英毛細(xì)管色譜柱DB-1(30 m×0.32 mm×0.25 μm)，美國安捷倫公司；NNW弗羅里矽柱, 上海納諾微新材料科技有限公司； IKA T18 digital高速勻漿機(jī),IKA MS3 basic渦旋儀, 艾卡(廣州)儀器設(shè)備有限公司；EFAA-DC-24-RT氮吹儀, 上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；菊酯快檢試劑盒，廣東達(dá)元綠洲食品安全科技股份有限公司。

1.2 方 法

1.2.1 樣品預(yù)處理

取大白菜樣品2 kg，切取可食部分，用干凈紗布輕輕擦去表面泥土及附作物，采用對角分割法，取對角部分，將其勻漿均勻，制成待測樣，放入容器中，備用。

1.2.2 氣相色譜

按照行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 761-2008《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的測定》所要求方法，采用氣相色譜測定氟氯氰菊酯。

工作條件：載氣氮?dú)饬髁?.00 mL/min，尾吹氣流量 30.0 mL/min；初始柱溫70℃，保持1.0 min，隨后以20℃/min升至270℃，保持15 min；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測器溫度300℃；進(jìn)樣方式：分流進(jìn)樣，進(jìn)樣量：1 μL。

1.2.3 快檢

按照試劑盒說明書要求進(jìn)行操作，取預(yù)處理樣品5 g，加入10 mL提取液，上下翻轉(zhuǎn)50次，過層析柱，棄去提取液，用1 mL洗脫液洗層析柱，收集洗脫液，加顯色液A、顯色液B，上下翻轉(zhuǎn)10次，反應(yīng)1 min，觀察顏色變化。

1.3 數(shù)據(jù)處理

根據(jù)《食品快速檢測方法評價(jià)技術(shù)規(guī)范》[20]要求評價(jià)試劑盒的顯著性差異、靈敏度、特異性、假陰性率、假陽性率、相對準(zhǔn)確度，其結(jié)果計(jì)算，使用Mcirosoft Excel 2010，性能指標(biāo)計(jì)算方法。表1

表1 快速檢測方法性能指標(biāo)計(jì)算Table 1 The calculation of properties indexes of the rapid detection method

2 結(jié)果與分析

2.1 市面大白菜氟氯氰菊酯殘留

研究表明，采用快檢方法檢測隨機(jī)購自阿克蘇主要菜市場及周邊菜店中的大白菜，未檢出氟氯氰菊酯殘留。表2

按照行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)方法NY/T 761-2003《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定》進(jìn)行大白菜樣品中氟氯氰菊酯殘留檢驗(yàn)。此次隨機(jī)購自阿克蘇市主要菜市場及周邊菜店中的大白菜也未檢出氟氯氰菊酯殘留。表3

表2 快檢方法檢測大白菜中氟氯氰菊酯Table 2 Results of cynuthrin in Chinese cabbage by the rapid detection method

表3 行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)方法檢測大白菜中氟氯氰菊酯Table 3 Results of cynuthrin in Chinese cabbage by the standard method

2.2 氟氯氰菊酯加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)

將實(shí)驗(yàn)樣品加標(biāo)不同濃度的氟氯氰菊酯，按照NY/T 761-2003《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定》檢測樣品中氟氯氰菊酯濃度，計(jì)算氟氯氰菊酯的加標(biāo)回收率。研究表明，在試驗(yàn)中，大白菜樣品中加標(biāo)的回收率在80%～102%，尤其當(dāng)加標(biāo)濃度高于0.1 mg/kg，其回收率均高于90%以上，符合檢測分析要求。表4

表4 不同氟氯氰菊酯加標(biāo)水平的回收率Table 4 Average recovery in different spiked levels for cynuthrin by the standard method

2.3 快檢試劑盒檢驗(yàn)氟氯氰菊酯的評估

將實(shí)驗(yàn)樣品加標(biāo)不同濃度的氟氯氰菊酯，并利用快檢試劑盒進(jìn)行樣品檢測，重復(fù)3次，試驗(yàn)結(jié)果與快檢實(shí)驗(yàn)比色卡進(jìn)行濃度判斷。分析試劑盒在不同濃度氟氯氰菊酯時(shí)靈敏性和準(zhǔn)確性。表4，表5，圖1

加標(biāo)樣品按照菊酯處理，添加顯色劑測定時(shí)，當(dāng)氟氯氰菊酯濃度為0.4 mg/kg時(shí)開始顯色，加標(biāo)濃度與菊酯快檢試劑盒檢驗(yàn)結(jié)果。 表6

表5 不同氟氯氰菊酯添加標(biāo)水平的快檢結(jié)果Table 5 Test results in different spiked levels for cynuthrin by the rapid detection method

通過使用菊酯速測盒測定大白菜中的氟氯氰菊酯，根據(jù)《食品快速檢測方法評價(jià)技術(shù)規(guī)范》對此試劑盒進(jìn)行評估，并對其檢測結(jié)果與行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)方法統(tǒng)計(jì)進(jìn)行分析，研究表明，此快檢試劑盒的靈敏度為75%，特異性為100%、假陰性率25%，假陽性率為0，顯著性差異為58.01，相對準(zhǔn)確度77.78%。表6

表6 菊酯快檢試劑盒測定氟氯氰菊酯的評估分析Table 6 Estimation and analysis of rapid detection method for cynuthrin determination

3 討 論

試劑盒可以較快的完成大白菜中氟氯氰菊酯的現(xiàn)場檢查。根據(jù)《食品快速檢測方法評價(jià)技術(shù)規(guī)范》要求，快速檢測方法應(yīng)與方法中規(guī)定的參比方法進(jìn)行一致性比較。與參比方法一致性分析統(tǒng)計(jì)，以卡方表示。當(dāng)顯著性差異>3.84表示參比方法與快檢方法的陽性確認(rèn)比率在95%的置信區(qū)間內(nèi)有顯著性差異。試劑盒根據(jù)《食品快速檢測方法評價(jià)技術(shù)規(guī)范》附表計(jì)算此試劑盒的顯著性差異為58.01，表示2種方法的陽性確認(rèn)比率在95%的置信區(qū)間內(nèi)有顯著性差異，相對準(zhǔn)確度即菊酯快檢方法與參比方法的一致性分析和濃度檢測趨勢情況綜合評價(jià)77.78%。

目前，對于快檢試劑盒評估過中濃度的水平設(shè)置沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。研究發(fā)現(xiàn)濃度水平的不同設(shè)定，評價(jià)結(jié)果也存在差異。謝俊平等[21]測得菊酯的陽性符合率為 85.7%，陰性符合率為 97.8%，張威等[22]評價(jià)嘔吐毒素試劑盒4個(gè)水平4種試劑盒，假陽性率都在33%～38%，而賈麗華等[23]設(shè)置3個(gè)水平評估17個(gè)嘔吐毒素試劑盒，試劑盒的假陽性率基本為0，所以不同的檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)設(shè)置的濃度水平不一樣。

所用菊酯快檢試劑盒為半定量試劑盒，在配備顯色卡的同時(shí)，可配有專用儀器。由于專用儀器較為昂貴，在實(shí)際操作中僅用顯色卡進(jìn)行了判讀。在此次所用菊酯快檢試劑盒測定氟氯氰菊酯時(shí)，氟氯氰菊酯最低顯色濃度為0.2 mg/kg，而在實(shí)際檢測中氟氯氰菊酯濃度為0.4 mg/kg樣品方顯色，一方面可能肉眼判斷存在判讀不準(zhǔn)確，部分試劑盒說明書和實(shí)際測定存在出入。在使用通過評估分析，該試劑盒可用于測定氟氯氰菊酯限度大于0.4 mg/kg的蔬菜，如大白菜、韭菜、結(jié)球甘藍(lán)等蔬菜，而不適合花椰菜、番茄等蔬菜，具體適用性可參考國標(biāo)GB 2763-2019《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量》。表7

表7 國家標(biāo)準(zhǔn)中不同蔬菜中氟氯氰菊酯最大殘留限量Table 7 Maximum residue limits for cynuthrin of vegetables in the national standards

4 結(jié) 論

根據(jù)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 761-2003《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定》規(guī)定，采用氣相色譜儀法對隨機(jī)購自阿克蘇市主要菜市場及周邊菜店地產(chǎn)大白菜中均未檢出氟氯氰菊酯。

通過樣品加標(biāo)，以行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)為參比方法，對此次試驗(yàn)所用菊酯快檢試劑盒進(jìn)行了評估，發(fā)現(xiàn)該快檢試劑盒的最低檢出限為0.4 mg/kg，靈敏度75%、假陽性率0，假陰性率25%，特異性100%，顯著性差異58.01,2種方法的陽性確認(rèn)比率在95%的置信區(qū)間內(nèi)有顯著性差異，此菊酯快檢試劑盒與參比方法的一致性分析和濃度檢測趨勢情況為77.78%。

大白菜中最大殘留限量為0.5 mg/kg，試劑盒滿足大白菜中氟氯氰菊酯的殘留限量要求，作為大白菜中氟氯氰菊酯殘留的快速篩查，也可以作為韭菜、結(jié)球甘藍(lán)等蔬菜，操作簡單，快速。