復方金梔制劑對脂多糖致熱雞解熱作用

李璐璐，姜 蘇，范子洋，趙紅瓊，郝智慧,3

(1. 新疆農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學學院，烏魯木齊 830052； 2. 青島農(nóng)業(yè)大學化學與藥學院，山東青島 266109；3. 中國農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院，北京 100193)

0 引 言

【研究意義】近年來，家禽呼吸道病成為臨床普遍、多發(fā)的疾病，發(fā)病時伴有發(fā)熱、粘性鼻液、咳嗽、噴嚏、呼吸困難等癥狀[1]，因而有必要研究具有解熱效果的藥物。【前人研究進展】在對癥治療解熱方面，目前臨床主要使用化學藥物吡唑酮類(氨基比林、安乃近、保泰松)、苯胺類(撲熱息痛)、糖皮質(zhì)激素類藥(氫化可的松、地塞米松)等[2]，但化學藥物的大量使用，可能造成致病微生物耐藥性的增加以及藥物在禽肉或蛋中殘留，給動物性食品安全帶來風險[3-5]。【本研究切入點】中藥制劑具有成本低、藥物殘留危害小的優(yōu)點。【擬解決的關(guān)鍵問題】以青蒿、金銀花和梔子組方制備復方金梔制劑，并評判其對脂多糖致熱雞只模型的解熱作用，為將該復方制劑用于臨床禽類發(fā)熱疾病的防治提供藥效學參考。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 動 物

21日齡健康海蘭褐殼蛋雞，雄性，100只，體重為(138.8 ± 1.4)g，購于青島市奧特種雞場。

1.1.2 藥物及配制

復方金梔制劑(Compound Jinzhi preparation，CJZ)為實驗室自制，藥材為青蒿、梔子、金銀花，按照48∶29∶23重量比，制得原生藥2.6 g/mL溶液；阿司匹林片(Aspirin tablets，ASP；北流獸藥廠，生產(chǎn)批號：20180109)壓碎成粉末備用；魚金注射液(Yujin injection，YJ；原生藥6 g/mL；重慶康仕達生物制藥有限公司，生產(chǎn)批號：20180411-2)；脂多糖(Lipopolysaccharides，LPS；索萊寶生物科技有限公司，生產(chǎn)批號：723O031)粉末用無菌0.9% NaCl配制為10 μg/mL溶液備用。

1.2 方 法

1.2.1 雞只體溫

雞只在試驗前進行適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，飼喂不含藥物的雛雞飼料，每日飼喂2次(08:00 ～09:00和17:00～18:00)，全天自由飲水。在此期間監(jiān)測雞只直腸溫度2次，觀察試驗飼養(yǎng)環(huán)境下1 d中雞只體溫變化。每次測溫前將獸用玻璃體溫計探頭涂抹凡士林，插入雞只肛門，保持3 min后記錄體溫數(shù)值。后續(xù)試驗采用同樣方法監(jiān)測雞只體溫。

1.2.2 LPS誘導雞只發(fā)熱模型

試驗采用腹腔注射(intraperitoneal injection，i.p.)LPS方法誘導雞只發(fā)熱模型[6]。試驗分為2組：發(fā)熱模型組(i.p. LPS 8 μg/100g體重相當于0.8 mL/100g體重)和空白對照組(i.p. 0.9% NaCl 0.8 mL/100g體重)，每組20只雞。分別在(注射LPS前)0 h、(注射LPS后)1、2、3、4、5、6、7和8 h監(jiān)測各雞只直腸溫度。

1.2.3 CJZ解熱效果

試驗分為5組：空白對照組(未發(fā)熱、未給解熱藥)、發(fā)熱模型組(發(fā)熱、未給解熱藥)、金梔組、阿司匹林組(解熱化學藥物陽性對照)和魚金組(解熱中藥制劑陽性對照)，每組20只雞。CJZ給藥劑量根據(jù)雞只與人藥熱毒寧注射液(同CJZ具有相似組方)劑量(870 mg/kg體重)[7]等效轉(zhuǎn)換獲得 260 mg/100g體重相當于0.1 mL/100g體重[8]，采用腹部肌肉注射(intramuscular injection，i.m.)的方法。ASP給藥劑量依據(jù)來源于藥品說明書，采用口服(peros，p.o.)粉末的方法。YJ給藥劑量根據(jù)說明書，120 mg/100g體重，即0.02 mL/100g體重。分別在-2 h(注射LPS前)、-1 h(注射LPS后1 h)、0 h(給予解熱藥前)和給予解熱藥后1、2、3、4 、5和6 h監(jiān)測各雞體溫。表1

表1 雞只解熱試驗分組Table 1 Antipyretic test group of chickens

1.3 數(shù)據(jù)處理

雞只體溫數(shù)據(jù)用平均值±標準誤(Mean ± SEM)，用SPSS 17.0軟件進行雙因素(處理×時間)方差分析，P< 0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 雞只早晚體溫的變化

研究表明，雞只在08:00～09:00和17:00～18:00體溫差異不顯著性(P>0.05)，平均為(40.72±0.04)℃。圖1

2.2 LPS誘導雞只發(fā)熱模型建立的判定

研究表明，在注射LPS前(0 h)和1 h后2組雞只體溫無差異(P>0.05)；在注射LPS 2 h后發(fā)熱模型組雞只體溫極顯著高于空白對照組(P<0.01)，且持續(xù)到注射后7 h；在注射后8 h，2組雞只體溫差異不顯著(P>0.05)。圖2

2.3 CJZ的解熱效果

研究表明，在給藥前-2 h和-1 h 5組雞只體溫無差異(P>0.05)；在0 h(給予解熱藥之前)，空白對照組體溫顯著低于其它4組(P<0.05)；在給藥后1 h，金梔組體溫顯著低于發(fā)熱模型組(P<0.05)，但同阿司匹林組和魚金組比較差異不顯著(P>0.05)；在給藥后2～5 h，金梔組體溫同發(fā)熱模型組比較差異不顯著(P>0.05)；在給藥后6 h，金梔組體溫顯著高于其他4組(P<0.05)。無論是不同給藥處理組之間、不同時間，還是不同給藥處理與時間交互對雞只體溫影響均極顯著(P<0.01)。表2，表3

表2 不同藥物處理下LPS致熱模型雞體溫變化Table 2 Effect of different drug treatments on body temperature in LPS-induced pyretic model chickens

表3 不同給藥處理×時間對雞體溫影響的雙因素方差Table 3 Two-way analysis of variance on the effect of different drug treatments × time on the mean body temperature in chickens

3 討 論

雞只出現(xiàn)呼吸道感染時，臨床上會出現(xiàn)發(fā)熱、流鼻涕、咳嗽、呼吸困難等炎癥癥狀[1]。LPS是革蘭氏陰性細菌細胞外壁的主要成分，由脂質(zhì)A、核心多糖(非特異性多糖)和O-抗原(特異性多糖)3部分構(gòu)成[9]。LPS是動物炎性發(fā)熱模型常用的致熱源，其致熱物質(zhì)基礎(chǔ)為其脂質(zhì)A成分。脂質(zhì)A可同宿主體內(nèi)的LPS結(jié)合蛋白結(jié)合并介導其與細胞膜受體CD14和TLR4的結(jié)合而引起大量內(nèi)源性炎癥介質(zhì)釋放，作用于下丘腦體溫調(diào)節(jié)中樞，引起機體發(fā)熱[10-14]。試驗監(jiān)測到健康雞只早晚體溫無顯著差異，在試驗雞只飼養(yǎng)條件下，雞只早晚體溫較穩(wěn)定。發(fā)熱模型組雞只i.p. LPS后2 h體溫升高，并持續(xù)6 h，部分雞只還出現(xiàn)啄羽、精神萎靡等癥狀，甚至伴有腹瀉，與雞臨床感染性炎癥所致的發(fā)熱相似，提示成功建立了雞只發(fā)熱模型，也為后續(xù)解熱藥給藥時間點選為LPS給藥后2 h提供了試驗數(shù)據(jù)支持。王開富等[15]給家兔耳緣靜脈注射LPS后1 h即出現(xiàn)體溫升高，同試驗比較體溫提前1 h升高，這可能是給藥途徑不同或動物敏感性不同造成的。

在試驗條件下，CJZ給藥后1 h發(fā)熱雞只體溫下降，但是在給藥后2 h雞只體溫又開始升高，而相對來說陽性對照藥物ASP和YJ解熱作用持續(xù)較長，提示CJZ對LPS致熱雞只具有一定解熱作用，但持續(xù)時間較短。CJZ主要是由青蒿、金銀花和梔子組方。該組方依據(jù)來源于人用國家二類藥熱毒寧注射液，組方中青蒿性苦辛、味寒，辛以解表、寒以清熱，因而具有清透虛熱，涼血除蒸的功效；金銀花性甘、寒味，清熱解毒，可助青蒿疏散風熱功效；梔子性苦、味寒，具有瀉火除煩，清熱利濕，可助金銀花解毒的功效[7,16]。

CJZ為純中藥制劑，有望用于禽類炎癥致熱相關(guān)癥狀的緩解，減少禽類臨床化學藥物的使用，降低肉蛋食品安全風險。鑒于試驗中CJZ解熱時間持續(xù)較短，有必要進一步研究其最適劑型、給藥途徑，甚至優(yōu)化組方。

4 結(jié) 論

雞只i.p. LPS 8 μg/100g體重能夠建立雞只發(fā)熱模型，CJZ對LPS致熱雞只具有明顯的解熱作用，但持續(xù)時間較短。