干血片毛細血管電泳技術在新生兒α-地貧篩查中的應用

姚 靖 劉恩賜 李肖妹 張煒羨 黃曉凌

(廣東省陽江市婦幼保健院 陽江 529500)

地中海貧血(以下簡稱地貧)是一種常見的遺傳性溶血性貧血，根據編碼α和β肽鏈的基因缺失或突變情況，可分為α-地貧和β-地貧[1]。我國是α-地貧的高發地區，其中廣東省α-地貧的發病率高居全國第二[2]。因此，早期篩查本地區新生兒α-地貧發病意義重大。對于靜止型的陽性患兒，可建立終身可查的電子健康檔案，進行有效的遺傳咨詢和健康教育，避免其孕育中間型地貧下一代；對輕、中型地貧患兒來說，早期篩查發現并定期進行追蹤和發育評估，可提高兒童智力和生長發育水平，避免重型患兒的出生。近年來，有學者提出可將濾紙干血片全自動毛細管血紅蛋白電泳分析技術應用到新生兒地貧的篩查[3]。本研究通過收集陽江市新生兒濾紙干血片標本，探究濾紙干血片毛細管電泳技術檢測的應用效果，為本地區新生兒α-地貧的預防、臨床診斷、遺傳咨詢提供參考資料。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取2018年1月～2019年12月陽江市婦幼保健院及陽江市各助產機構送檢的新生兒濾紙干血片標本23 769例，其中男12 687例，女11 082例。

1.2 濾紙干血片制備方法

于新生兒出生2～7d后從足跟內或外側采血，滴于專用采血濾紙上，要求血斑直徑>8mm，且從正面滲透至背面，每例采集血斑3個，將血斑濾紙置于通風處自然晾干，再密封于塑料袋，2℃～8℃下保存，5d內以快遞形式送至陽江市新生兒篩查中心檢測。

1.3 檢測方法

鉗取直徑為3.8mm的血斑，置于加有蒸餾水的樣品杯孔中，再放入濕盒于4℃下洗脫2～72h；采用capillarys2 neonat fast全自動干血片毛細管電泳儀及其配套電泳試劑盒(法國Sebia公司)，對樣品進行血紅蛋白電泳檢測，測定正常血紅蛋白和主要變異體的含量。同時，對篩查陽性新生兒及時召回做地貧基因檢測。

1.4 篩查結果判讀及基因診斷[4]

α-地貧篩查陽性判斷標準：Hb Bart's≥0.1%判定為α地中海貧血篩查陽性。采用PCR+倒流雜交法，分析α-地貧篩查陽性新生兒α-地貧基因常見的缺失突變，包括-α3.7、-α4.2、--SEA、 Hb CS、Hb QS和Hb WS。基因診斷標準：缺失或突變1個α基因為靜止型，缺失或突變2個α基因為標準型，缺失或突變3個α基因為中間型，缺失或突變4個α基因為重型。

1.5 統計學分析

2 結果

2.1 α-地貧的篩查結果

23 769例濾紙干血片標本中檢出Hb Bart's陽性2 825例，陽性率為11.89%，共召回1 068例進行PCR地貧基因診斷。

2.2 α-地貧的基因診斷結果

召回初篩陽性1 068例，確診陽性998例，確診符合率為93.45%，具體基因類型分布情況見表1。基因診斷結果顯示，靜止型338例，標準型635例，中間型25例，重型0例，標準型中以基因型--SEA/αα常見。

表1 新生兒α-地貧基因診斷結果

2.3 初篩Hb Bart's含量與臨床表型的關系

不同臨床表型患兒Hb Bart's水平比較，差異具有統計學意義(P<0.05)；其中中間型患兒Hb Bart's水平高于標準型和靜止型(q=69.086、82.829，P<0.001)，且標準型患兒Hb Bart's水平高于靜止型(q=45.759，P<0.001)，見表2。

表2 臨床表型和Hb Bart's水平關系

3 討論

地中海貧血是全世界許多國家都關注的重要遺傳性疾病，由于地中海貧血基因攜帶者婚配可使下一代有1/4的機會患中、重型地中海貧血，故可嚴重影響高發區的人口質量。在我國，該病主要在長江以南大部分省區，特別是廣西、廣東和海南等省區流行。α-地貧嚴重情況下具有較高的致殘、致死性，而攜帶地貧基因的輕型患者，容易在新生兒和兒童時期出現溶血性黃疸、貧血等癥狀，影響兒童生長發育[5]。通過產前篩查技術可以預防重型患兒的出生，因此，早期篩查在地貧的預防及后期診療中有重要臨床意義。

目前，新生兒地中海貧血篩查最為簡便、有效的方法是毛細胞血紅蛋白電泳技術，很多醫院采用臍帶血進行早期篩查，但臍血標本容易混進母體血，可能無法準確反應新生兒的血紅蛋白情況，而且臍血的保存、運送要求較高，無法滿足分散于本市其他助產機構的集中送檢。同時，臍血篩查地貧存在漏篩靜止型α-地貧的可能性[6]。另外成人的產前地貧篩查與地貧基因符合率低[7]，究其原因是HbBart's只特異性地存在于新生兒期，3個月后自然消失，成人地貧篩查未能有效篩查出靜止型α-地貧，靜止型α-地貧基因攜帶者與同型地貧基因攜帶者婚配生育，每次生育有1/4的概率懷上中間型地貧胎兒。近年來，濾紙干血片全自動毛細管血紅蛋白電泳分析技術逐漸應用于新生兒地貧的早期篩查，該技術是利用高電壓，使得新生兒濾紙干血片中的微量血紅蛋白組分分離，從而準確測定各種血紅蛋白組分的含量[8]。與臍帶血比較，濾紙干血片具有更易長期保存，運輸方便，對新生兒創傷小，且可與傳統的新生兒篩查項目同時檢測等特點。

本研究利用毛細管電泳技術檢測23 769例濾紙干血片標本，檢出Hb Bart's陽性2 825例，陽性率為11.89%，高于文獻報道廣東省中山市新生兒α-地貧初篩攜帶率5.31%[9]，考慮差異因素有：(1)不同地區α-地貧攜帶率具有特異性；(2)文獻選用檢測樣本為臍帶血，可能出現假陰性。根據初篩結果，召回1 068例新生兒作進一步基因型檢測，確診陽性998例，確診符合率為93.45%，與文獻報道基本相符[10]。提示干血片毛細血管電泳技術對于新生兒α-地貧篩查具有較高的應用價值，完全可滿足篩查需求[11～13]。另外，分析患兒Hb Bart's水平與臨床表型的關系發現，中間型患兒Hb Bart's水平高于標準型和靜止型，且標準型患兒Hb Bart's水平高于靜止型，進一步說明臨床可根據Hb Bart's水平初步劃分α-地貧患兒臨床表型，對后期基因確診有一定指導意義。

綜上所述，利用干血片毛細血管電泳技術定量分析Hb Bart's水平，對新生兒α-地中海貧血的篩查準確性高，且干血片標本的運輸、保存也更為便捷，對于新生兒疾病篩查的廣泛開展有積極意義。