分析灌洗液不同檢測方法在支氣管結核診斷中的價值

王曉麗 陳治水 周靜霞

(聯勤保障部隊第九八八醫院檢驗科 焦作 454000)

在全球范圍內結核病都屬于普遍存在的問題，結核桿菌侵犯支氣管、氣管及周圍組織則稱之為支氣管結核，如果是單純病癥患者，難以通過CT或胸片診斷出來，所以很多患者無法及時確診和治療[1]。如今纖維支氣管鏡廣泛應用，可以一并進行診斷和治療，肺泡灌洗后對灌洗液進行檢測，能確診是否存在結核桿菌，不過目前有著多種檢測方法，診斷效果也各不相同[2]。

1 資料和方法

1.1 一般資料

本次研究對象是我院2017年11月～2018年11月期間收治的56例肺結核患者(納入觀察組)，同時選取28例非結核性肺部疾病患者(納入對照組)。觀察組中菌陽肺結核、菌陰肺結核患者各28例，均符合中華醫學會的《肺結核診斷和治療指南》，其中男31例，女25例，年齡19～71歲，平均年齡(42.3±7.5)歲；對照組男15例，女13例，年齡20～72歲，平均年齡(42.7±7.4)歲。兩組基線資料經過對比，差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1灌洗液采集

根據患者實際情況選擇適合規格的纖維支氣管鏡，術前禁食6h，術前30min肌肉注射阿托品、霧化吸入2%利多卡因行鼻腔喉頭表面麻醉；術中將纖維支氣管鏡經鼻腔送入聲門后，將2%利多卡因滴入氣管行局部麻醉，過程中要行鼻導管供氧，還要監測血樣飽和度、呼吸、心率等指標；纖維支氣管鏡抵達病變位置后，活檢、刷檢后進行肺泡灌洗，共灌洗3次，之后吸出灌洗液放置于無菌瓶中，采集20mL進行實驗室檢驗。

1.2.2熒光定量PCR檢測法(FQ-PCR)

取1～1.5mL灌洗液進行離心處理，時長5min，速度為12 000r/min，去除上層清液，在沉淀物中加入1mL無菌生理鹽水混勻，再次離心處理5min，速度為12 000r/min，去除上層清液，將50μL DNA提取液放入沉淀物中混勻，放入100℃恒溫環境中10min；之后放在冰箱中冷卻到室溫后，再次離心處理5min，速度12 000r/min，取2μL上層清液置于PCR反應管中，以8 000r/min速度離心處理數秒，再將其放在PCR儀中，進行擴增處理；先在93℃環境下預變性2min，再依次93℃45s、55℃60s，共計10個循環，之后再依次93℃45s、55℃120s，共計30個循環；最后進行熒光檢測，對結果進行解讀。

1.2.3結核抗體檢測法(膠體金法)

將2滴封閉液滴入反應板的反應孔中，等待薄膜吸入；取40μL灌洗液標本，滴入反應孔中，等待薄膜吸入；之后滴入6滴洗活液，等待薄膜吸入；再滴入2滴金標液，等待薄膜吸入。質控點為紅色，反應孔內存在紅色斑點則為陽性。

1.2.4培養檢測法

灌洗液標本行常規處理，再根據《全國結核病菌學檢驗標準化規程》操作，分離培養時應用全自動分枝桿菌培養監測儀。

1.2.5涂片檢測法

以中國防癆協會發布的《結核病診斷細菌學檢驗規程》為操作標準，用萋-尼氏抗酸染色法，結果觀察用油鏡，陽性判斷標準為≥3條抗酸桿菌/300視野。

1.3 觀察指標

對比分析4種檢測的結核桿菌陽性率。

1.4 統計學分析

使用SPSS23.0軟件對研究中所得數據進行記錄和分析，計數資料采用率(%)表示，行χ2檢驗。當組間差異較大時，呈現統計學意義(P<0.05)。

2 結果

菌陽肺結核組檢測陽性率：FQ-PCR法明顯高于結核抗體法、涂片法，差異呈統計學意義(χ2=10.220/31.540，P<0.05)；FQ-PCR法與培養法相同，差異無統計學意義(χ2=0.000，P>0.05)。菌陰肺結核組檢測陽性率：FQ-PCR法明顯高于結核抗體法、涂片法，差異呈統計學意義(χ2=14.292/39.030，P<0.05)；FQ-PCR法略高于培養法，差異無統計學意義(χ2=2.276，P>0.05)。與對照組相比較，菌陽肺結核組和菌陰肺結核除了涂片法，其它方法均明顯更高，組間對比差異呈統計學意義(P<0.05)。4種檢測方法有著不同的敏感性，菌陰肺結核和菌陽肺結核組FQ-PCR法、培養法的陽性率均明顯高于結核抗體法和涂片法，差異存在統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 4種檢測中結核分支桿菌的陽性率[n(%)]

3 討論

結核病一直都是影響人類健康且具有傳染性的疾病，為了控制病情蔓延、提升患者的生存質量，要及早進行診斷和治療[3]。目前該病的診斷方式主要是細菌學檢驗，痰涂片鏡檢是常規方法，具有經濟、無創、簡單等特點，不過會受到多種因素干擾，所以準確性不高，特別是在支氣管結核病的診斷中效果不理想，所以逐漸被灌洗液檢測替代。通過纖維支氣管鏡獲得肺泡灌洗液標本，該標本中細菌濃度高、污染低，從而診斷結果更有保障，但是不同的檢測方法對結核桿菌的檢測結果不同，診斷效果也存在一定差異性。

涂片檢測法屬于經濟、快捷、簡便的方式，不過檢查率僅為30%～40%，也不能區分非結核桿菌和結核桿菌，所以靈敏度、特異性均不高；且檢測液難以控制定量，也就影響了最終診斷結果。如今，分子生物學技術不斷更新，FQ-PCR檢測技術被逐漸應用，它集光譜技術、雜交技術、核酸擴增技術于一身，檢測環境為封閉狀態，可以避免受到外界因素干擾，配合特異性探針隨時檢測，實現自動分析一體化，結核桿菌DNA<10copies也能穩定檢測出。

本次研究中，菌陽肺結核組FQ-PCR法的陽性率為89.29%，明顯高于結核抗體法的50%、涂片法的14.29%，差異呈統計學意義(P<0.05)；菌陰肺結核組的陽性率為82.14%，明顯高于結核抗體法的32.14%，差異呈統計學意義(P<0.05)；對照組與菌陰肺結核組對比，FQ-PCR法陽性率差異顯著，呈現統計學意義(P<0.05)。由此可證實，在支氣管結核診斷中，熒光定量PCR檢測法有著較高的診斷準確率，而且檢測速度快，如果為了進一步提升診斷效果可以與其它檢測方法聯合使用。