如何防止柞蠶蛹蟲草培育過程中的感染

李元洪 朱榮才 崔自學

蛹蟲草又名北冬蟲夏草，俗稱北蟲草、蟲草花，隸屬子囊菌亞門（Ascomycotina）麥角菌目（Clavicipitales）麥角菌科（Cordycepps）蟲草屬（Cordyceps）真菌，是蟲草屬的模式種。蛹蟲草和我們常說的冬蟲夏草十分相似，藥理作用也基本相同，并且在某些功能成分含量上達到甚至超過天然冬蟲夏草。研究發現，蛹蟲草富含蟲草素、蟲草酸、蟲草多糖等生物活性物質，具有抗菌、抗腫瘤、抗輻射及調節免疫功能等重要作用。我國已知的100多種蟲草，由于寄主不同，又有不同的物名，以冬蟲夏草和蛹蟲草在中藥領域最為著名。冬蟲夏草目前還不能完全人工栽培。《全國中草藥匯編》記載：“北蟲草（蛹蟲草）的子實體及蟲體也可作為冬蟲夏草入藥?！庇捎谝吧Y源有限，遠遠不能滿足市場的需求，故催生出了蟲草人工栽培技術的高科技研發。目前，科研人員利用從野生蛹蟲草分離的菌種，栽植在活體的蠶蛹體內，模擬野生蛹蟲草的生態環境，已成功大規模培育出柞蠶蛹蟲草和桑蠶蛹蟲草。但在近年各地大規模生產過程中，往往由于不同環節的蠶蛹被雜菌感染問題，導致大批生產全軍覆沒，損失慘重，這也是許多想從事蛹蟲草栽培的人望而生畏的原因，從某種層面來說，也是阻礙蛹蟲草行業發展的原因之一。筆者通過走訪調查，結合多年生產經驗，總結出以下幾點要求，以期對從事蛹蟲草生產的人員有所幫助。

一、對菌種的要求

（一）菌種純凈無雜菌、無污染

用于接種蠶蛹的菌種一般都是用蛹蟲草母種接種在培養基中，進一步培養而制成的液體菌種。第一，所用的母種必須是純凈的母種，這就需要從正規有資質的科研單位購買母種。如果對所用母種有懷疑，可以挑取一點母種菌絲，在顯微鏡下觀察，看有無雜菌，也可以先用少量蠶蛹試驗，即先少制一點培養液接種蠶蛹觀察。通過事先少量接種一點蠶蛹，3～5 d后觀察所接種的蠶蛹，如果母種純凈無污染，所接蠶蛹體內就會大量繁殖菌絲而使蠶體僵硬。如果所用母種有污染，3～5 d后蛹體就會因被雜菌感染而腐敗。第二，所制培養基必須嚴格滅菌。滅菌時間也要根據所用器皿和所裝培養基的多少而定。盛裝培養基的器皿大，裝的培養基的量也較大，滅菌時間就要適度延長，確保滅菌徹底。第三，一定要在無菌室的超凈工作臺內嚴格按照無菌操作接入母種，確保接入菌種后菌液無污染。第四，接入母種后，在培養的過程中要細心觀察，看培養基中是否有雜菌在繁殖。如果經過合適的溫濕度培養，培養基沒有變化，沒有菌絲生成，或者有不同顏色的菌物形成，此培養液一定要淘汰。此時也可通過上述方法檢驗所制菌液是否被雜菌感染，即挑少量菌液在顯微鏡下觀察，看是否有雜菌或者先用少量蠶蛹試驗。

（二）菌種新鮮有活力

由于蛹蟲草菌種的特異性，非常容易變異和難以保存，在保存不當或保存時間過長時，菌種往往失去活力，致使接種后不能感染蠶蛹，從而使蠶蛹被其他雜菌感染成為敗血蛹。

（三）接種室和接種工具要嚴格消毒

在蛹蟲草批量生產過程中，基本不可能在超凈工作臺內進行，故接種環境非常重要。如果環境內有雜菌，接種所用的菌種、蠶蛹表面和接種工具易被污染，蠶蛹接種后就容易被感染。因此，接種環境必須是能夠密閉且易于消毒的場所。這樣在接種前先用液體消毒液進行消毒，還要用熏蒸劑進行空氣消毒或用紫外燈照射，保證整個接種場所沒有雜菌。工作人員進入工作室時必須換上消過毒的工作服，接種人員戴無菌手套或用酒精擦洗手。培育柞蠶蛹蟲草一般是用柞蠶蛹的活體，把菌液直接接入活的蛹體內，因此所用的接種工具必須是無菌的，這樣才能保證不通過接種工具把雜菌帶入蠶蛹體內。

二、培育柞蠶蛹蟲草對柞蠶蛹的要求

（一）選蠶蛹

培育柞蠶蛹蟲草首先選用健康無病的蠶蛹，一個不健康或帶病的蠶蛹體內有無數的細菌或病毒。蛹蟲草接種是一個連續接種的過程，因此，如果接種工具一旦接觸一個帶病的蠶蛹，在連續接種過程中可能會污染無數個健康的蠶蛹。為避免出現此類問題，削繭時和削繭后要嚴格認真挑選，做到絕不用一個帶病蠶蛹，這樣可以避免在接種時把不健康蠶蛹體內的雜菌帶入其他健康蠶蛹體內而造成蠶蛹感染。

（二）蛹體消毒

所用的活體蠶蛹也要嚴格消毒。柞蠶繭在存儲過程中，會有一部分蠶蛹因各種原因死去。這部分死去的蛹體會污染很多蠶繭，導致從蠶繭剝出的鮮活蠶蛹，蛹體表面也會有各種雜菌污染。因此，蠶蛹在接入菌液之前一定要對蛹體表面徹底消毒。原則上所用的消毒藥品是對人體無害和易于揮發的藥物，如75%的酒精等。

（三）在接種過程中盡量減少蛹體創傷

從削繭到接種，都有可能對蛹體造成創傷，這也是造成蛹后期感染的主要因素之一。在這一系列操作過程中，動作不能簡單粗暴，要輕拿輕放，不使蛹體因人為因素受到創傷。受傷的蠶蛹即使不接種菌種，也會變成敗血蛹，因此在接種前的各個環節都要及時剔除創傷蛹。接種時所使用的工具要盡量精細，動作要輕、準、穩，盡可能減小蛹體創傷，以便接種后的蠶蛹傷口快速愈合，減少雜菌感染的機會。

（四）接種后嚴格控制培養室的溫濕度

培養室要求在使用前3～5 d進行嚴格洗刷消毒，確保干凈衛生無污染源，以免造成對蛹體的再次污染和感染。接種后的蠶蛹要放在消毒后的培養室保護，培養室的溫濕度要嚴格控制在合理范圍內。溫度過高或過低都會增加蠶蛹感染的概率。溫度過高不利于蟲草菌的生長，還會加快雜菌繁殖速度。溫度過低，會影響蟲草菌的生長，也會增加蠶蛹感染雜菌的機會。蛹蟲草菌喜中低溫度環境。接種后的蠶蛹在菌絲培養階段即培養前期，溫度最好控制在18～19 ℃，這樣既可抑制雜菌繁殖生長，也有利于蛹蟲草菌絲的快速生長。待蛹蟲草菌絲長滿蛹體，蛹體硬化后將培養室溫度調整到20～22 ℃繼續培養。發菌培養階段相對濕度可控制在60%左右，可降低雜菌感染機會。

三、討論

用柞蠶蛹培育蛹蟲草是一個系統工程，過程是用活體蠶蛹直接接入蛹蟲草菌種，工序多，每個環節都是基礎，每個環節都是整個過程中的關鍵鏈接，都必須嚴格執行技術操作規程。每個環節都要嚴格要求，做到環環相扣，每個環節都不出漏洞，做到接種時沒有雜菌進入蛹體，接種后也沒有雜菌通過傷口進入蛹體，加上合理的溫濕度保護，才能保證菌絲在蛹體快速生長，從而保證蛹蟲草培育的高產穩產。

〔資助項目：現代農業產業技術體系建設專項（No.CARS-18）〕