上皮性卵巢癌組織中TGF-β1和MDR1表達與患者臨床病理特征的關系*

喻朝霞，潘陶強，張云榮，黃啟梅，馬俊，盧靜

(安慶市第一人民醫院 病理科，安徽 安慶 246000)

卵巢癌是臨床婦科常見的惡性腫瘤，其中85%～90%為上皮性卵巢癌，死亡率較高，上皮性卵巢癌的形成、轉移、復發是多種環境因素及基因改變的共同結果[1-2]。組織轉化生長因子-β1(tyansfoyming growth β1，TGF-β1)為人體中主要的負性調控因子，可抑制多種細胞的活性、延緩細胞的生長，亦可參與免疫調節、胚胎發育、細胞凋亡等活動，在多種腫瘤的發生、發展中發揮著重要作用[3]；多藥耐藥基因1(multi-drug resistant 1，MDR1)則為耐藥相關基因，可促使腫瘤細胞產生耐藥[4]。本研究通過免疫組化法檢測上皮性卵巢癌患者病理組織中TGF-β1與MDR1蛋白表達，分析上皮性卵巢癌組織中TGF-β1及MDR1蛋白表達與患者臨床病理特征的關系、并進一步探討2種蛋白的相關性，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1一般資料 選取2015年9月—2019年6月行手術治療的140例卵巢上皮石蠟包埋組織，患者年齡18～75歲，平均(46.87±7.43)歲。全部病例均為首次手術治療或追加手術治療，所用組織標本均由病理專家閱片確診，并且臨床資料完整。排除轉移癌患者及術前放、化療患者，排除有其他合并癥的患者。140例患者中，其中56例上皮性卵巢癌患者(包括漿液性腫瘤、黏液性腫瘤與透明細胞瘤)作為上皮性卵巢癌組、50例良性上皮性卵巢腫瘤患者(包括多囊卵巢、黃體囊腫、卵巢纖維上皮瘤與成熟囊性畸胎瘤)作為卵巢良性腫瘤組、34例因良性子宮病變行卵巢切除的患者作為正常卵巢組。所有病例均經手術和病理證實。本研究經醫院醫學倫理委員會審批通過。

1.1.2試劑 鼠抗人TGF-β1、MDR1單克隆抗體及免疫組織化學試劑盒均購自福州邁新生物技術開發有限公司(濃度為1 ∶100)。用已知陽性組織作為陽性對照，用PBS代替一抗作為陰性對照。

1.2 方法

采用免疫組織化學EnVision兩步法檢測卵巢上皮組織TGF-β1與MDR1表達[5]，取石蠟包埋的卵巢上皮組織，切片、脫蠟、水化、高壓抗原修復、封閉，按免疫組化試劑盒進行操作，滴加一抗抗體，稀釋濃度為1 ∶100～1 ∶400，以PBS代替一抗作為陰性對照，滴加生物素標記的二抗，PBS沖洗，DAB染色，于光學顯微鏡下觀察染色結果。染色判斷標準采用半定量計數法，按陽性細胞所占的百分比和著色強度進行結果判定；陽性細胞數所占百分評分，陰性為0分、≤25%為1分、25%～50%為2分、50%～75%為3分、75%～100%為4 分；著色強度評分，無著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；以陽性細胞數百分比與著色強度評分的乘積作為總積分，0～1為陰性，≥2為陽性。

1.3 觀察指標

比較3組被檢卵巢組織標本中TGF-β1與MDR1表達，分析上皮性卵巢癌組織中TGF-β1、MDR1的表達與患者臨床病理特征的關系。采用Speaman相關性分析上皮性卵巢癌組織中TGF-β1與MDR1表達的相關性。

1.4 統計學分析

采用SPSS 21.0統計軟件對數據進行分析。計數資料以率(%)表示，組間比較采用χ2檢驗，相關性分析采用Spearman相關分析，以P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 TGF-β1及MDR1表達

結果顯示，3組卵巢組織中TGF-β1及MDR1陽性表達情況比較，差異有統計學意義(P<0.05)；上皮性卵巢癌組陽性表達率明顯高于卵巢良性腫瘤組及正常卵巢組，差異有統計學意義(P<0.05)；卵巢良性腫瘤組與正常卵巢組比較，TGF-β1及MDR1陽性表達率均升高，MDR1差異有統計學意義(P<0.05)、而TGF-β1差異無統計學意義(P>0.05)。見表1、圖1。

表1 3組被檢卵巢組織中TGF-β1及MDR1表達[n(%)]

圖1 3組卵巢組織中TGF-β1、MDR1陽性表達(EnVision法，×100)

2.2 上皮性卵巢癌組織中TGF-β1、MDR1的表達與患者臨床病理特征的關系

結果顯示，上皮性卵巢癌患者病理分級為Ⅲ/Ⅳ級的TGF-β1、MDR1陽性表達率均高于Ⅰ/Ⅱ級，有淋巴結轉移患者的TGF-β1、MDR1陽性表達率高于無淋巴結轉移患者，差異有統計學意義(P<0.05)；而TGF-β1、MDR1陽性表達率與患者年齡、組織類型無明顯關系(P>0.05)。見表2。

表2 上皮性卵巢癌組織中TGF-β1及MDR1表達與患者臨床病理特征的關系[n(%)]

2.3 上皮性卵巢癌組織TGF-β1與MDR1表達的相關性

Spearman相關分析結果顯示，上皮性卵巢癌組織TGF-β1與MDR1表達呈正相關(r=0.608，P<0.001)。見表3。

表3 上皮性卵巢癌組織TGF-β1與MDR1表達的相關性[n(%)]

3 討論

卵巢癌因缺乏早期癥狀，臨床上尚無有效的早期診斷方法，臨床上約70%的患者確診時已為晚期，5年生存率僅為20%～30%；上皮性卵巢癌是卵巢癌的常見類型，其形成、轉移、復發是多種環境因素及基因改變的共同結果[1-2]，積極探索上皮性卵巢癌發生發展、侵襲、轉移及耐藥成為目前的研究熱點[6-8]。

TGF-β1是TGF-β細胞因子超家族的成員，可通過刺激上皮性卵巢癌組織新生血管形成，促進腫瘤細胞的增殖、生長；協助癌細胞遷移，有利于癌細胞浸潤；抑制免疫，使上皮性卵巢癌細胞逃避免疫攻擊；上調細胞外基質降解蛋白表達，促進細胞外間質成分聚集，促進癌細胞轉移，從而在上皮性卵巢癌的發生發展、轉移和復發過程中發揮至關重要的作用[9-11]。文獻報道，TGF-β1蛋白在宮頸癌組織中表達增高，對促使宮頸癌細胞發生腫瘤逃逸、促進宮頸癌的形成發揮重要作用，可作為判斷患者預后的指標[12]。閆真等[13]研究發現，上皮性卵巢癌組織中TGF-β1表達升高，從而參與了上皮性卵巢癌的發生發展、侵襲及轉移。本研究結果顯示，上皮性卵巢癌TGF-β1表達與患者病理分級、淋巴結轉移顯著相關，分析其原因可能為TGF-β1可促進上皮性卵巢癌細胞自身的生長、浸潤和轉移，從而加速上皮性卵巢癌的惡化，并引發淋巴結轉移。

MDR1是第1個確定的多藥耐藥相關基因，編碼了相對分子量為170 000的P-gp，P-gp是一種能量依賴性膜轉運蛋白質，位于細胞漿膜，其可將細胞內的一些化療藥物泵出細胞外，從而使患者出現耐藥，促進腫瘤發展[14-16]。研究顯示，MDR1基因表達水平與多發性骨髓瘤疾病程度具有明顯的正相關性，可能作為多發性骨髓瘤的臨床評估預測指標[17]。也有研究發現，MDR1基因與上皮性卵巢癌患者鉑類化療臨床預后密切相關，提示MDR1基因高表達可使患者更易出現耐藥，最終導致預后不佳[18]。本研究結果顯示，上皮性卵巢癌組TGF-β1、MDR1的陽性表達率顯著高于卵巢良性腫瘤組和正常卵巢組，提示TGF-β1與MDR1高表達參與了上皮性卵巢癌的發生及由良性向惡性發展的過程。吳夢等[18]研究發現，卵巢癌組織中TGF-β1的表達與臨床分期呈現正相關性，且TGF-β1與MDR1的表達呈正相關。本研究結果顯示，上皮性卵巢癌MDR1表達與患者病理分級、淋巴結轉移顯著相關，與患者年齡、組織類型無明顯相關。分析其原因可能為當上皮性卵巢癌組織MDR1呈現高表達時，易使患者產生耐藥，最終加速上皮性卵巢癌的進展，促進惡化。經Spearman相關分析，上皮性卵巢癌患者病理組織TGF-β1與MDR1表達呈正相關，表明TGF-β1、MDR1與卵巢癌的疾病進展相關，且TGF-β1與MDR1在腫瘤的發生、發展中具有相互協同作用[19-20]。

綜上所述，上皮性卵巢癌組織中TGF-β1、MDR1呈高表達，TGF-β1、MDR1陽性表達情況與病理分級、淋巴結轉移情況顯著相關，且TGF-β1與MDR1表達呈正相關，監測上皮性卵巢癌患者TGF-β1與MDR1表達情況，對于評估上皮性卵巢癌轉移、惡性程度以及耐藥上具有重要的臨床意義。