超高效液相色譜三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定食品湯汁中的毒品

王 華，羅達(dá)龍，覃 藍(lán)

(梧州市食品藥品檢驗(yàn)所，廣西梧州 543002)

苯丙胺（AMP）、甲基苯丙胺（MA）、3,4-亞甲基二氧基甲基苯丙胺（MDMA）、3,4-亞甲二氧基-N-乙基-苯丙胺（MDEA）和3,4-亞甲基二氧基苯丙胺（MDA）為具有苯丙胺結(jié)構(gòu)的物質(zhì)，該類化學(xué)組分具有中樞興奮的作用，服用后會(huì)產(chǎn)生致幻、精神依賴性、食欲不振和擬交感能效應(yīng)等藥理與毒理學(xué)特征。在我國(guó)，該類物質(zhì)是受管制的精神活性物質(zhì)，故濫用潛力較大[1]。氟胺酮（2F-DCK）為氯胺酮苯環(huán)上的氯元素被氟元素所取代，在我國(guó)氟胺酮不屬于管制類藥物，在公安偵辦的涉毒案中也屢屢查獲該物質(zhì)[2-4]。王世玉等[5]于1987年報(bào)道了氟胺酮的合成方法，并證明了化合物氟胺酮具有與氯胺酮類似的麻醉作用。氟胺酮能被歸為麻醉活性物質(zhì)的一種，也存在被濫用的潛力。

為保障人們舌尖上的安全，有必要建立一種操作簡(jiǎn)單、定性/定量準(zhǔn)確、測(cè)試靈敏度高的檢測(cè)方法。對(duì)于上述物質(zhì)目前可用的方法有快檢法、高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）和動(dòng)態(tài)液相微萃取（Gas Chromatography/Mass Spectrometry in the Selected Ion Monitoring Mode，GC/MS-SIM)等方法。由于火鍋湯中存在的基質(zhì)種類較多，如凈化不完全會(huì)使雜質(zhì)帶入系統(tǒng)，產(chǎn)生基質(zhì)干擾，影響試驗(yàn)回收率，甚至?xí)饳z驗(yàn)結(jié)論判斷錯(cuò)誤和儀器耗損嚴(yán)重。

本研究將乙腈作為提取溶液，使用Captiva EMRLipid固相萃取柱進(jìn)行凈化，并結(jié)合UPLC-MS/MS、ACE C18-苯基色譜柱，通過(guò)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（Multiple Reaction Monitoring，MRM）對(duì)火鍋湯汁中的AMP、MA、MDMA、MDEA、MDA和2F-DCK進(jìn)行檢測(cè)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

安捷倫超高效液相色譜儀1290-三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀6470（美國(guó)安捷倫公司），超純水器（賽多利斯Arium Comfort Ⅱ）；超聲儀；高速冷凍離心機(jī)；Captiva EMR-Lipid固相萃取柱（1 mL，40 mg，安捷倫科技有限公司）。

乙腈（質(zhì)譜級(jí)，歐姆尼公司）；檢驗(yàn)用水為經(jīng)賽多利斯Arium Comfort Ⅱ純水機(jī)制備的去離子水；苯丙胺類混合標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自于安捷倫科技有限公司，質(zhì)量濃度100 μg/mL；氟胺酮標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量濃度100 μg/mL，購(gòu)買于阿爾塔公司。

1.2 色譜條件

分析用色譜柱：ACE C18-苯基柱（2.1 mm×100 mm，2 μm）；流動(dòng)相：0.2%甲酸-15 mmol/L乙酸銨（A）-乙腈（B）；流速：0.35 mL/min；進(jìn)樣體積：2 μL；柱溫箱溫度：35 ；液相色譜流動(dòng)相洗脫程序：0～ 1.50 min，10% ～ 20% B；1.50～ 3.50 min，20%～35% B；3.51～4.50 min，95% B，后運(yùn)行時(shí)間：1.00 min。

1.3 質(zhì)譜條件

ESI離子源正模式采集，干燥氣體溫度與干燥氣體流量：150 ，12 L/min；鞘氣加熱溫度與鞘氣流量：350 ，12 L/min；噴霧器壓力：25 Psi；毛細(xì)傳輸管電壓：3 500 V；化合物離子對(duì)、碰撞能量AMP：136→ 119（5 V）91（17 V）；MA：150→ 91（17 V）119（5 V）；MDMA：194→ 163（9 V）105（25 V）；MDEA：208→105（25 V）163（9 V）；MDA：180→163（5 V） 135（18 V）；2F-DCK：222→163（20 V） 109（40 V）。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

精密吸取苯丙胺類標(biāo)準(zhǔn)品和氟胺酮標(biāo)準(zhǔn)品各1 mL，置于10 mL經(jīng)標(biāo)定合格的容量瓶中，用乙腈溶劑稀釋標(biāo)品溶液至刻度，得到濃度為10 μg/mL的對(duì)照品保存液。用乙腈將對(duì)照品保存液進(jìn)行梯度稀釋，得到濃度分別為S1：0.02 ng/mL、S2：0.1 ng/mL、S3：0.2 ng/mL、S4：1.0 ng/mL和 S5：2.0 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.5 供試樣品的制備

取火鍋湯樣品，在9 000 r/min，4 條件下離心4 min，吸取離心后的上層清湯液體5.00 mL至25.00 mL容量瓶，用乙腈溶劑定容至刻度，搖勻。取稀釋液約3 mL，在15 000 r/min，4 條件下離心3 min。吸取經(jīng)離心后的上清液1 mL過(guò)EMR凈化柱，收集后用有機(jī)濾膜過(guò)濾，上機(jī)測(cè)定。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性關(guān)系考察

取本文“1.4”節(jié)中配制的S1～S5，按“1.2～1.3”條件，上儀器進(jìn)行測(cè)定，通過(guò)儀器采集軟件采集各物質(zhì)的峰面積。以配制的標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度（x，ng/mL）為橫坐標(biāo)，采集所得的峰面積（y）為縱坐標(biāo)，使用儀器自帶工作站進(jìn)行線性回歸，各物質(zhì)線性回歸方程如下。AMP：y=34 524.298 821x-755.830 859，r=0.999 2；MA：y=53 280.726 060x-986.025 191，r=0.999 6；MDMA：y=55 132.373 168x-1 236.319 062，r=0.999 7；MDEA：y=34 724.761 291x-761.259 699，r=0.999 2；MDA：y=22 939.079 908x-538.973 499，r=0.999 2；2F-DCK：y=4 1025.108 859x-765.748 774，r=0.999 6,各物質(zhì)在線性濃度范圍0.02～2.00 ng/mL時(shí)，物質(zhì)線性的相關(guān)系數(shù)均不小于0.995 0。

2.2 回收率試驗(yàn)

將標(biāo)準(zhǔn)溶液加入至空白火鍋湯樣品中，采用本文“1.5”節(jié)方法進(jìn)行處理，測(cè)定AMP、MA、MDMA、MDEA、MDA和2F-DCK 6個(gè)物質(zhì)的回收率，6個(gè)物質(zhì)在0.1～5.0 ng/mL的加標(biāo)水平下，樣品的回收率為83.2%～94.0%，RSD為3.1%～4.6%，見(jiàn)表1。

表1 基質(zhì)加標(biāo)回收率結(jié)果（n=3）

2.3 定量限與檢出限試驗(yàn)

取本文“1.4”節(jié)下的標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行級(jí)別稀釋，按“1.2色譜條件、1.3質(zhì)譜條件”進(jìn)樣測(cè)定。當(dāng)工作站計(jì)算被測(cè)定物質(zhì)的信噪比不小于10∶1時(shí)，即為定量限；當(dāng)工作站計(jì)算被測(cè)定物質(zhì)的信噪比不小于3∶1時(shí)，即得出檢出限。由表2可知，6個(gè)物質(zhì)的定量限均為0.1 ng/mL，檢出限均為0.03 ng/mL。

表2 定量限與檢出限試驗(yàn)結(jié)果

2.4 儀器精密度試驗(yàn)

取本文“1.4”節(jié)下的標(biāo)準(zhǔn)溶液S3，按“1.2～1.3”條件連續(xù)進(jìn)樣檢測(cè)6次，各物質(zhì)峰面積的RSD見(jiàn)表3。AMP：RSD=1.5%；MA：RSD=1.6%；MDMA：RSD=1.4%；MDEA：RSD=1.1%；MDA：RSD=1.6%；2F-DCK：RSD=1.6%，表明儀器精密度良好。

表3 精密度試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.5 色譜柱與流動(dòng)相的考察

方法考察中選擇水與乙腈體系、0.2%甲酸水溶劑與乙腈混合體系、0.2%甲酸-15 mmol/L乙酸銨與乙腈溶劑混合體系等組成進(jìn)行流動(dòng)相適用性考察，分別在C18色譜柱與C18-苯基柱進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在0.2%甲酸-15 mmol/L乙酸銨-乙腈作為流動(dòng)相時(shí)，能有效促進(jìn)6個(gè)化合物的電離，6個(gè)化合物的峰面積達(dá)到最大，且得到更優(yōu)的靈敏度。而在C18-苯基柱上測(cè)定6個(gè)化合物得到的色譜峰峰形優(yōu)于C18色譜柱。因此，選擇0.2%甲酸-15 mmol/L乙酸銨-乙腈作為本次試驗(yàn)的流動(dòng)相，選用C18-苯基柱作為本試驗(yàn)的色譜柱。6個(gè)化合物的色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 化合物色譜圖

2.6 樣品測(cè)定

購(gòu)買市售的火鍋湯汁共15份按“1.2～1.5”條件進(jìn)行前處理并測(cè)定，結(jié)果15份樣品中均未檢出AMP、MA、MDMA、MDEA、MDA 和 2F-DCK 6種物質(zhì)。

3 結(jié)論

本研究建立了運(yùn)用Captiva EMR-Lipid固相萃取柱對(duì)火鍋湯中的基質(zhì)進(jìn)行凈化前處理，通過(guò)使用液質(zhì)聯(lián)用儀的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式，結(jié)合C18-苯基色譜柱對(duì)苯丙胺、甲基苯丙胺、3,4-亞甲基二氧基甲基苯丙胺和3,4-亞甲二氧基-N-乙基-苯丙胺、3,4-亞甲基二氧基苯丙胺和氟胺酮進(jìn)行定性定量檢測(cè)。從被測(cè)樣品的前處理到檢驗(yàn)完成整個(gè)試驗(yàn)耗時(shí)約30 min。本方法具有操作簡(jiǎn)單、快速、定性與定量準(zhǔn)確及靈敏度高等特點(diǎn)，能用于日常檢驗(yàn)。本方法使用的固相萃取柱具有高選擇性，能有效去除樣品基質(zhì)中的脂質(zhì)，所含技術(shù)為體積排阻和疏水性相互作用的原理對(duì)脂質(zhì)進(jìn)行凈化。脂質(zhì)的去除能減少對(duì)質(zhì)譜電噴霧離子化的影響，使待測(cè)組分在分析過(guò)程中不受干擾，以進(jìn)一步提高檢測(cè)方法的穩(wěn)定性與數(shù)據(jù)的可靠性，減少了儀器的維護(hù)成本。