妊娠SD大鼠血糖指標值的系統評價和單組連續變量Meta分析*

江心泳 葛 莉 賴玉婷 黃萍萍 陳 凡 龐書勤 于紅虹

(福建中醫藥大學護理學院，福州 350122)

隨著我國二胎政策放開，高齡產婦和經產婦人群數量不斷增加，2004—2018年妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus，GDM)的總體患病率高達12.85%，遠超國際水平，并且呈持續增長趨勢[1]。根據鐘婕等[2]報道，GDM不僅可增加早產、巨大兒、胎兒畸形等不良妊娠結局的發生率，而且增加母親和其子代患代謝性疾病的風險。由于開展臨床研究困難性大，因此應用相關實驗動物開展研究尤顯重要。洪雅青等[3]和李鑫等[4]研究發現SD大鼠因其具有孕期適中(21 d)的特點，且支持短期內大量復制GDM模型而被廣泛應用于相關實驗研究。動物血液生化指標是動物實驗重要而敏感的指標，也是藥物安全性評價實驗中必不可少的檢測項目[5]?？崭寡?fasting blood glucose，FBG)和血清空腹胰島素(fasting serum insulin，FINS)是檢測妊娠大鼠罹患GDM的重要指標[6-7]。目前大多數研究判斷患GDM的SD大鼠，FBG為6.7～16.7 mmo/L，差值范圍大且缺乏統一標準。另外，FINS作為協助FBG判斷GDM的指標仍未有明確范圍[7-9]。因此，本研究通過對妊娠SD大鼠血糖FBG和FINS的Meta分析，旨在探討二者的參考值上限，為患GDM 的SD大鼠模型的構建及FBG和FINS指標的標準區間提供參考。

1 材料和方法

1.1 文獻檢索

計算機檢索中國知網、維普、萬方、Web of Science、Cochrane Library、Scopus、PubMed、EMBase和MEDLINE共9個數據庫中與妊娠SD大鼠血糖相關的文獻，檢索時限為2014年1月—2020年12月，采用主題詞和自由詞結合的方式進行檢索，并根據不同數據庫特征進行檢索式調整以確定最終的檢索方式。英文檢索詞包括“Rat*”、“Rattus”、“Rattus norvegicus”、“Rats, Norway”、“Rat*, Laboratory”、“Laboratory Rat*”、“Blood Glucose”、“Diabetes Mellitus”、“Diabetes, Gestational”、“Blood Sugar”、“Sugar, Blood”、“Glucose, Blood”、“Pregnanc*”、“Gestation”及“Gravidit*”；中文檢索詞包括“大鼠”、“血糖”、“糖尿病”、“妊娠期糖尿病”和“妊娠”。

1.2 納入與排除標準

納入標準：研究對象為妊娠 SD大鼠，實驗觀察指標包含妊娠期FBG和FINS。排除標準：會議報告、病例報告、綜述、個案報道和以人為對象的實驗研究、重復發表或結局指標不全、無法獲取全文的文獻及干預中應用改變大鼠生理狀態藥物的文獻。

1.3 文獻篩選與資料提取

由兩名研究者通過閱讀文章題目、摘要及全文，嚴格按照納入與排除標準獨立進行文獻篩選，完成后提取相關資料并交叉核對。如遇分歧，由雙方討論或與第三名研究者討論，形成統一意見。資料提取主要包括第一作者、發表年份、國家、樣本量、入組周齡、體質量、FBG、FINS、禁食時間、血液采集部位和實驗所用血糖儀廠家。

1.4 文獻質量評價

由兩名研究者采用SYRCLE動物實驗偏倚風險評估工具(SYRCLE’s risk of bias tool for animal studies)[10]進行文獻質量評價，如有爭議則與第三名研究者討論，形成統一意見。該工具評價內容包括10個條目、22個亞條目以及隨機序列的生成、基線特征、分配隱藏、動物安置隨機化、盲法(實施偏倚)、隨機性評估結果、盲法(測量偏倚)、結局指標完整性、選擇性報告研究結果和其他偏倚來源。該工具評估結果最終以“是”、“否”和“不確定”表示，其中“是”代表低風險偏倚，“否”代表高風險偏倚，“不確定”代表不確定風險偏倚。

1.5 數據分析方法

1.5.1單組連續變量Meta分析：應用STATA15.0軟件進行Meta分析，收集原始研究數據中已直接報告的SD大鼠FBG和FINS的均值和標準差，以加權均數差(Weighted Mean Difference，WMD)和95%可信區間(Confidence Interval，CI)為合并統計量。通過I2對文獻進行異質性檢驗，當I2<50%且P≥0.1認為不存在異質性，采用固定效應模型；若I2>50% 且P<0.1則采用隨機效應模型進行分析，同時對存在異質性的研究進行亞組分析，尋找可能造成異質性的因素[11]。

2 結果

2.1 文獻檢索結果

初步檢索共獲取文獻2 359篇，剔除重復文獻644篇，通過閱讀文獻標題和摘要，排除1 428篇;通過閱讀全文，排除250篇，最終納入37篇文獻，文獻篩選流程如圖1。

圖1 文獻篩選流程圖

2.2 納入文獻基本特征及質量評價

本研究共納入文獻37篇，包括29篇中文文獻和8篇英文文獻；32篇來自中國，其余5篇來自美國、沙特阿拉伯、坦桑尼亞、馬來西亞和伊朗。文章共包括428只SD大鼠，最大樣本量為20只，最小樣本量為5只。納入的文獻中，8篇檢測了妊娠第0周的FBG；23篇檢測了妊娠第1周的FBG和FINS；22篇檢測了妊娠第2～3周的FBG和FINS。納入研究的基本特征，具體見表1。

表1 納入文獻基本特征

2.3 文獻質量評價

風險評估結果如圖2，納入的37篇研究中，6篇[7,22-23,34-35,49]明確表示采用隨機數字表法進行序列生成，8篇[15-16,20-21,24,27,29,39]未采用隨機方式產生序列；37篇基線特征均衡；兩篇研究[34,49]采用分配隱藏，12篇[14-16,20-21,24,26-27, 32,42,47-48]未實現分配隱藏；6篇[19,26-28,35,42]未提供完整數據，另有張馨文等[7]一篇提供完整數據但未說明失訪理由。納入的所有文獻在動物安置隨機化，盲法(實施/測量偏倚)和隨機性結果評估中均未有明確報告。

圖2 風險評估

2.4 數據分析結果

2.4.1妊娠期間SD大鼠FBG參考值上限

2.4.1.1妊娠第0周FBG參考值上限：共7篇文獻檢測大鼠妊娠第0周的FBG[7,21,27,31,38,40,49]，異質性檢驗結果P=0.000 < 0.1，I2=98.6%，異質性高。

圖3 妊娠第0周尾靜脈取血FBG森林圖

圖4 妊娠第1周尾靜脈取血FBG森林圖

圖5 妊娠第2周尾靜脈取血FBG森林圖

圖6 妊娠第3周尾靜脈取血FBG森林圖

2.4.2妊娠期間SD大鼠FINS參考值上限

圖7 妊娠第1周FINS森林圖

圖8 妊娠第2周FINS森林圖

圖9 妊娠第3周FINS森林圖

3 討論

3.1 FBG對GDM大鼠成模判斷的意義

FBG是判斷妊娠大鼠是否罹患GDM最直觀的動物血液生化學指標，也是臨床上用于檢測GDM的常規指標[6,50]。FBG作為一項容易測量且數值直觀的指標，應用于判定GDM大鼠模型是否成模。例如：蔣靜等[51]、李佳等[52]和稅迎春等[53]研究均采用FBG作為判斷GDM大鼠成模的標準。因此，本研究對FBG進行系統評價和Meta分析以得出其成模標準。

3.2 FBG和FINS結果影響因素

研究發現，不同采血部位的FBG檢測結果存在明顯差異。本研究納入的37篇文獻中，有17篇采取尾靜脈取血的方式檢測FBG，而其余部位較少。張秀青[54]發現，靜脈采血結果較末梢采血穩定。同時，尾靜脈取血操作簡單，對實驗動物造成的損傷極小，可多次重復測量大鼠模型FBG值。因此，SD大鼠尾靜脈采血用于檢測FBG，可作為判定GDM大鼠的成模標準。大鼠體質量也會影響FBG，而且大部分研究僅對入組時的大鼠體質量進行了描述，缺乏對妊娠期間體質量數據。程臻等[55]研究顯示，超重及肥胖與血糖指標的結果密切相關。Thamban等[56]的研究結果顯示，GDM發生的危險性會隨著妊娠前的BMI的升高而增大。此外，肥胖可導致炎性細胞因子增多，促炎性和抗炎性細胞因子表達失衡，從而導致IR或GDM[57]。禁食時間的長短也可影響FBG和FINS結果。王超群等[49]和湯琦等[58]研究表明，實驗動物禁食時間過長會影響正常的糖代謝，引起低血糖反應。因此，在今后研究中應完善妊娠期間體質量的描述，明確大鼠在妊娠前未出現體質量過高的情況，同時明確禁食時間和采血部位以穩定FBG檢測結果。

3.3 GDM SD大鼠的FBG成模標準的確立

湯夢雨等[37]、蔣靜等[51]及祁秀茹等[59]研究判斷SD大鼠患GDM時FBG為6.7～16.7 mmol/L，差值范圍大且缺乏統一標準。因此，本研究通過對納入文章中的數據Meta分析，得出妊娠期間4個階段的FBG成模標準。同時，因不同采血部位的檢測結果存在明顯差異，故本研究FBG成模標準主要為尾靜脈取血，不明確采血部位的結果予以排除，FBG結果分別為第0周5.51 mmol/L，第1周6.92 mmol/L，第2周6.64 mmol/L以及第3周7.04 mmol/L。同時，根據系統評價結果顯示，GDM大鼠的成模判斷時間多在妊娠第1周時進行[14-15]。因此，本研究選取妊娠第1周異質性低的結果數據合并，GDM的SD大鼠模型的成模標準為FBG>6.92 mmol/L，即妊娠SD大鼠FBG檢測結果>6.92 mmol/L即可判斷為出現GDM。

3.4 不足之處

本研究對符合納入標準的37個動物實驗依據進行質量評價，發現存在4方面不足，如下：①在隨機序列的產生中，21.6%的研究，隨機分配方法出現高風險及62.2%的研究未對隨機分配方法進行描述；②對動物研究方法的介紹中，32.4%的研究在分配隱藏的描述中顯示了高風險，62.2%研究分配隱藏方法不確定，僅5.4%的研究介紹了分配隱藏方法；③所有研究均未報道動物安置隨機化、盲法以及隨機性結果評估；④18.9%的研究未對失訪動物是否會對結局造成偏倚進行評估。以上不足會對本研究結果帶來偏倚風險。

綜上所述，本研究共納入428只妊娠SD大鼠。首次進行妊娠SD大鼠FBG系統評價和Meta分析，初步確認SD大鼠在妊娠第0～3周的FBG和FINS參考值上限。FBG，第0周：5.51 mmol/L；第1周：6.92 mmol/L；第2周：6.64 mmol/L；第3周：7.04 mmol/L。FINS，第0周：無統計數據；第1周：15.66 mIU/L；第2周：15.98 mIU/L；第3周：15.63 mIU/L。以上FBG和FINS參考值上限的確定可能為今后SD大鼠相關實驗提供指標參考，減少不同實驗中因參考值標準不同而帶來的實驗誤差。