耿祥飛 王 鵬 劉鵬杰 王樹新
(1. 北京萊艾特科技發展有限公司,北京 100193)(2. 中國科學院微生物研究所,北京 100101)(3. 北京蘭博泰斯生物科技有限公司,北京 100193)(4. 蘇州猴皇動物實驗設備科技有限公司,蘇州 215143)
依據國家標準,SPF級小鼠應飼養于屏障設施中,而且對屏障設施中的溫度、相對濕度、換氣次數、空氣潔凈度、菌落數、壓差、噪音等技術指標及飼養籠具均有要求。目前,常用的小鼠飼養籠具有兩種,即:1 敞開式平板架(以房間為獨立單元);2密閉式籠具(以獨立籠盒為飼養單元)。其中,密閉式籠具有中央排氣通風籠盒系統(Exhaust Ventilation central Cages,簡稱EVC)和獨立通氣籠盒系統(Individual Ventilated Cages,簡稱IVC)等[1]。
EVC主機頂端的風機將籠盒內的廢氣從排氣口經過濾器排出,連接機架排風管道與屏障環境內的中央排氣通風系統進行排風,并將清潔空氣從飼養籠盒的進氣口過濾后送入每個籠盒內。并且,飼養籠盒形成微負壓,相互獨立且無交叉污染,可適用于飼養SPF級實驗動物[2]。IVC由送風機經過初級、高效過濾器向飼養籠盒內送入清潔空氣,再由排風機將籠盒內的空氣排放出去,形成一送一排的空氣流通過程。通過調節送、排風量,可使飼養籠盒內形成微正壓或微負壓。籠盒相互獨立、無交叉污染,適用于飼養SPF級實驗動物[3]。綜上所述,EVC和IVC屬于同一類飼養籠具[4-5],但表現形式存在一定的差異[6]。本文將對EVC和IVC的相關參數進行對比,為飼養實驗動物籠具選擇提供相關的數據支持。
1.1.1實驗動物:SPF級小鼠,購自斯貝福(北京)生物技術有限公司,實驗動物生產許可證號:SCXK(京)2019-0010,溫度20~25 ℃,相對濕度40%~70%,明暗交替12 h/12 h。
1.1.2受試籠具:EVC和IVC購自蘇州猴皇動物實驗設備科技有限公司。
1.1.3測試儀器設備:便攜式氨氣檢測儀(ADKS-1-NH3)購自EDKORS,希瑪照度計(AS803)和希瑪風速風量測試儀(AS8556)購自東莞萬創電子制品有限公司,溫濕度計(TH604F)購自廣東美德時儀器儀表有限公司,噪音測試儀(DSM D2),購自中國德力西控股集團等。
分別比較EVC和IVC以下5方面指標:
(1)飼養空間:如籠架占地面積和空間等;(2)使用操作流程:換籠流程、清洗流程、損壞率、整體消毒清潔流程等;(3)小鼠飼養環境:換氣次數和風速、氨濃度、噪音及籠盒內噪音分貝;(4)斷電或機械故障;(5)報警系統。
EVC和IVC的共同點:獨立通氣系統,具有良好的隔離防護功能,確保籠盒與籠盒、系統與環境之間的有效隔離,避免交叉污染。籠盒都采用PPSU(聚亞苯基砜樹脂)材質,耐高溫高壓。
氨氣檢測結果見圖1所示,其它指標具體檢測結果見表1所列。

圖1 IVC和EVC氨濃度對比

表1 EVC和IVC系統檢測結果
飼養空間: EVC小鼠籠架的占地面積約1 000×1 000(mm),100籠;IVC小鼠籠架采用固定式長方形籠架,一般采用主機1拖N的形式,其中主機尺寸380 × 550(mm),籠架(7籠/層×8層=56籠)尺寸1 400×500(mm),因此,相同空間EVC的飼養量至少是IVC的兩倍,即:飼養相同數量的小鼠,EVC可節省一半以上的空間,并節約建設屏障設施的巨大投資[8]。
換籠流程:IVC籠盒由底盒、不銹鋼網蓋、籠盒蓋及水瓶組成,籠盒蓋后端設有塑料進、排氣閥門,頂部設有生命窗口,前后設有外撥式搭扣用于固定底盒與盒蓋以及外置式水瓶。換籠流程:取下水瓶→打開籠盒蓋→移開不銹鋼網蓋→抓取小鼠→蓋上不銹鋼網蓋加料→蓋上籠盒蓋→放入水瓶,共7個分解動作。EVC籠盒由底盒、不銹鋼料槽、籠盒蓋及水瓶組成,底盒前后設有進排氣過濾器,籠盒蓋左右兩側設有卡扣用于固定底盒和盒蓋以及內置式水瓶。換籠流程:打開籠盒蓋→抓取小鼠→更換水瓶→加料→蓋上籠盒蓋,共5個分解動作。
清洗:IVC底盒、網蓋及水瓶直接清洗,而籠盒蓋需要拆下生命窗口濾材清洗。EVC籠盒蓋、料槽、水瓶直接清洗,底盒含濾膜也可以獨立整體清洗[4, 9]。
損壞率:EVC籠盒取放時,接觸點為排氣口的過濾器(由不銹鋼和過濾棉組成),結實耐用、不易損壞,周損壞率在6%左右,比IVC低一倍以上。IVC籠盒在取放時,須與籠架上的進、排氣口閥門接觸,但籠盒蓋后端的塑料進、排氣閥門在使用中易損壞,生命窗口濾材耗損相當嚴重(13%/周),更換頻率高。
整體消毒與清潔:EVC籠架由底盤、旋轉轉盤、柱子及頂置主機組成,底盤、頂置主機及柱子表面平整,旋轉轉盤上下間距大及排風口也較大,清洗方便[9-10]。IVC籠架是由架框和若干根送排氣管道焊接而成,與總送、排氣管道匯總連接,結構復雜。尤其是籠架后側,清洗費時費力,擦拭時還容易劃破手套,進、排風口口徑很小,清洗需使用很細的試管刷[9,11]。
空氣潔凈度:EVC和IVC的新風均是采用飼養間新風,潔凈度標準為10 000級。EVC再次過濾空氣的保障是籠盒上的亞高效過濾器,而IVC系統的再次過濾保障是主機內的初高效二級過濾。與EVC比較,IVC系統更加嚴格。針對于屏障設施的管理要求,進入屏障設施的所有人員、物品均需嚴格控制,因此潔凈度問題還受到人員的管理與墊料、飼料、飲水等配套物品的是否滅菌的影響。
換氣次數和風速:換氣次數高,形成更大的氣流(風速),會讓動物迅速失水,并有吹冷風的感覺[12],不利于小鼠健康(國標規定風速小于0.2 m/s[7])。EVC和IVC均可根據籠架上實時飼養籠盒的數量,設定的換氣次數,籠盒內風速控制在國標規定的風速內。
氨濃度:分別進行兩次連續6 d籠盒內氨氣濃度檢測。EVC和IVC分別放置10籠小鼠,每籠5只,且房間檢測面積均為12.75 m2。兩次檢測的前4 d,EVC飼養籠盒內的氨氣濃度都處于較低水平,但在第5天開始出現較高氨氣濃度,接近國標14 mg/m3;IVC在飼養到第三天時,籠盒內能聞到明顯氨氣,說明濃度已經很高,第4天就超過了國標要求的最低標準[13-14]。IVC在換氣次數高的前提下,籠盒內的氨濃度反而比EVC高,說明籠盒內空氣流動不均勻,換氣不完全。因此,與IVC系統比較, EVC系統的房間內氨濃度會更低。
噪音:EVC籠盒內61.5~63.7 db,IVC籠盒51~59 db。噪音主要是屏障系統本身形成,且IVC籠盒內隔音效果比EVC好。
斷電或機械故障:EVC排風口徑較大且中央排風管整體向上,具有煙囪效應。即使在電力故障時,系統在煙囪效應下,仍可繼續工作, 48 h內動物不會窒息死亡[15]。IVC風管口徑較小且結構復雜,一經斷電或機械故障,需要額外備用電源來維持風機正常運行以保證籠盒內正常換氣,否則需要打開籠盒蓋的生命窗口進行換氣。因此,在遇到斷電或機械故障時,EVC換氣更優。
報警系統:EVC和IVC均裝有獨立的報警系統。報警系統主機上都有獨立顯示屏,顯示小鼠籠盒內壓差及溫、濕度,一旦超過設定的標準值,系統就會發出報警信號到管理者手機上[2]。
綜上,根據上述參數比較,可知在屏障設施中,使用EVC系統更加節能、環保且綠色的優化方案。