Cobas c 501和BNⅡ兩種系統(tǒng)檢測類風(fēng)濕因子的性能分析*

王建偉，謝海花，孫嘉峰

福建省立金山醫(yī)院檢驗科，福建福州 350008

類風(fēng)濕因子(RF)是一種抗人或動物IgG分子Fc片段抗原決定簇的抗體，是以變性IgG為靶抗原的自身抗體。RF是臨床診斷類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)的重要依據(jù)之一[1-4]。RF常見的檢測方法有乳膠凝集法、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA) 法和免疫散射比濁法等，目前臨床上多采用免疫散射比濁法和免疫透射比濁法檢測RF[5]。由于乳膠顆粒增強免疫技術(shù)的靈敏度較高，全自動生化分析儀功能日趨完善，而且免疫透射比濁法應(yīng)用在全自動生化分析儀上的精密度高、檢測速度快、消耗成本低，越來越多的實驗室采用自動生化分析儀檢測RF[6-8]。本研究擬對羅氏全自動生化分析儀Cobas c 501(以下簡稱Cobas c 501)和西門子全自動特定蛋白分析儀BNⅡ(以下簡稱BNⅡ)兩種系統(tǒng)檢測RF的部分性能進行分析，并探討二者檢測結(jié)果之間的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本來源 43份血清標(biāo)本來自2018年6月1日至8月31日本院收治的43例患者。

1.2儀器與試劑 Cobas c 501；BNⅡ。適用于Cobas c 501的試劑：RF檢測試劑盒(批號：2297701)、RF定標(biāo)品(批號：28558201)、RF質(zhì)控品(批號：277021/277022)來自德國羅氏診斷有限公司。適用于BNⅡ的試劑：RF檢測試劑盒(批號：48274)、RF定標(biāo)品(批號：18390B)來自德國西門子醫(yī)學(xué)診斷產(chǎn)品(上海)有限公司；液體免疫學(xué)和蛋白質(zhì)控品(批號：66372/66373)購自美國伯樂生命醫(yī)學(xué)產(chǎn)品(上海)有限公司。

1.3檢測方法 各項操作均嚴(yán)格按照試劑盒說明書進行，相應(yīng)質(zhì)控品、標(biāo)準(zhǔn)品均與標(biāo)本同時檢測，均符合試劑盒質(zhì)控要求。

1.3.1檢測原理 BNⅡ檢測RF：采用免疫散射比濁法進行檢測，當(dāng)包被由人-γ-球蛋白/綿羊抗人-γ-球蛋白組成的免疫復(fù)合物的聚苯乙烯顆粒與含有RF的標(biāo)本混合時，這些顆粒會凝集起來，光線通過懸濁液發(fā)生散射，散射光的強度與標(biāo)本中相關(guān)蛋白水平呈正比，與已知的標(biāo)準(zhǔn)水平對比可得出結(jié)果。Cobas c 501檢測RF：采用免疫散射比濁法進行檢測，結(jié)合有熱滅活I(lǐng)gG的乳膠與標(biāo)本中RF-抗體發(fā)生凝集反應(yīng)形成抗原抗體復(fù)合物。

1.3.2精密度評價 按照美國臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(CLSI)EP15-A2標(biāo)準(zhǔn)：2個水平，5 d試驗，每天一批，每批每個水平重復(fù)檢測3次。

1.3.3正確度評價 根據(jù)《臨床化學(xué)定量檢驗程序性能驗證指南》(CNAS-GL037)，實驗室可采用偏倚評估、回收試驗、與參考方法比對等方式進行正確度的驗證。本研究通過偏倚評估進行正確度的驗證：對2017、2018年中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會臨床檢驗中心和福建省臨床檢驗中心提供的室間質(zhì)評質(zhì)控品20份進行檢測，比較回報靶值和實驗室檢測結(jié)果，計算偏倚及平均偏倚。 偏倚(%)=[檢測值-參照值(靶值)]/參照值(靶值)×100%，平均偏倚(%)=[偏倚(絕對值)/數(shù)據(jù)個數(shù)]×100% 。 如果平均偏倚小于1/2 PT(生物學(xué)變異與分析質(zhì)量要求允許總誤差10%)，說明該檢測系統(tǒng)的正確度在允許的誤差范圍內(nèi)。

1.3.4相關(guān)性評價 對本院檢驗科免疫室2018年6月1日至8月31日收到的43份檢測RF的標(biāo)本同時采用Cobas c 501和BNⅡ進行檢測，將結(jié)果進行相關(guān)性分析。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS20.0統(tǒng)計軟件及Excel2019統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計分析。檢測結(jié)果小于檢測下限的結(jié)果歸化為1。

2 結(jié) 果

2.1精密度驗證 采用Cobas c 501檢測RF，其批內(nèi)精密度(低、高水平)均<1/4TEa，批間精密度(低、高水平)均<1/3TEa，見表1。采用BNⅡ檢測RF，其批內(nèi)精密度(低、高水平)均<1/4TEa，批間精密度(低、高水平)均<1/3TEa。見表2。

表1 Cobas c 501精密度驗證結(jié)果

表2 BNⅡ精密度驗證結(jié)果

2.2正確度驗證 采用Cobas c 501檢測RF的正確度驗證結(jié)果，平均偏倚為3.67%，小于1/2 PT，該檢測系統(tǒng)的正確度在允許的誤差范圍內(nèi)。采用BNⅡ檢測RF的正確度驗證結(jié)果，平均偏倚為4.46%，小于1/2 PT，該檢測系統(tǒng)的正確度在允許的誤差范圍內(nèi)。

2.3兩種方法檢測結(jié)果的相關(guān)性分析 以采用Cobas c 501檢測的結(jié)果為X軸，以采用BNⅡ檢測的結(jié)果為Y軸，分析結(jié)果顯示二者具有良好的相關(guān)性(Y=1.057 9X+0.526,R2=0.990 6)，見圖1。

圖1 兩種檢測系統(tǒng)檢測結(jié)果相關(guān)性分析

3 討 論

RF無明顯的種屬特異性，是由感染因子刺激機體產(chǎn)生的一種自身抗體，以變性IgG為抗原。RF主要存在于RA及某些風(fēng)濕免疫性疾病患者的血清和關(guān)節(jié)液中，RF有IgG、IgM、IgA、IgD和IgE等5種抗原[9-12]。當(dāng)前臨床檢驗技術(shù)不斷發(fā)展，RF的檢測出現(xiàn)了許多新的方法，其中全自動生化分析儀檢測越來越受到臨床實驗室的青睞。全自動生化分析儀功能日趨完善，而且具有自動化程度高、檢測速度快、消耗成本低等特點。

本研究嚴(yán)格按照CLSI文件中的要求對兩臺儀器的精密度、正確度進行驗證。結(jié)果顯示兩臺儀器的低、高水平批內(nèi)精密度均<1/4TEa(實驗室允許不精密度為6.25%)，批間精密度均<1/3TEa(實驗室允許不精密度為8.33%)。正確度驗證結(jié)果顯示，采用Cobas c 501和BNⅡ兩種系統(tǒng)的平均偏倚分別為3.67%、4.46%，正確度均較高。同時，本研究對相同標(biāo)本同時在兩種系統(tǒng)上的檢測結(jié)果進行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示兩種檢測系統(tǒng)相關(guān)性良好。實際工作中發(fā)現(xiàn)，BNⅡ配套RF試劑開瓶后穩(wěn)定時間較短，當(dāng)天開瓶試劑未使用完，待后面檢測時，對檢測結(jié)果影響較大，易出現(xiàn)室內(nèi)質(zhì)控失控現(xiàn)象。

綜上所述，Cobas c 501和BNⅡ均適用于臨床進行RF的檢測，然而BNⅡ試劑開瓶后穩(wěn)定性時間較短，更適用于標(biāo)本量較大的實驗室；Cobas c 501上機穩(wěn)定時間較長，適用于標(biāo)本量較少的實驗室。