皂白散治療足癬的實驗研究*

郭蛟，馮捷，謝作哲，解豫苑，趙東科，閆小寧

1.陜西省中醫醫院，陜西西安710003；2.西安交通大學第二附屬醫院，陜西西安710004；3.寶雞市人民醫院，陜西寶雞721001；4.西安市新城區中醫醫院，陜西西安710005；5.楊凌東科麥迪森制藥有限公司，陜西咸陽712100

足癬往往稱之為“腳濕氣”“臭田螺”［1-2］，由于患者平素生活起居不慎，久居濕熱地區、趾縫潮濕、腳汗多而外感濕邪，或脾虛濕蘊下注足部，或因接觸患者的用具沾染蟲毒導致［3-4］。常見腳趾縫浸漬、糜爛、丘疹水皰或干燥、脫屑，瘙癢明顯，臭穢不堪［5-6］。臨床上抗真菌藥物成分比較單一，長期服用損傷肝腎功能等不良反應大［7-8］，且治療后病情容易反復，如若治療不及時甚至繼發丹毒［9］。因此，尋求不良反應小、療效好的治療藥物迫在眉睫。

皂白散由白礬（煅）、皂礬（煅）、皂角、黃精、地骨皮藥物組成［10］，具有清熱燥濕，殺蟲止癢的作用，廣泛用于濕熱蘊結型手足癬的治療［11］。中醫學認為足癬的基本病機為濕熱郁遏肌膚，治療以清熱燥濕止癢為主［12］，但關于皂白散治療足癬的藥理作用及機制尚未完全闡明，為闡明皂白散具有抗炎、毛細血管通透性、抑制真菌、抑制細菌的藥理作用，本文對其主要藥效學進行了研究。

1 材料

1.1 動物SPF級ICR小鼠，體質量（27±3）g，雌雄各半，由陜西省醫學實驗動物中心提供，批號：SCXK-（陜）2018-308，實驗動物通過陜西省中醫院實驗動物倫理委員會審批（批號：SZYY2018006），實驗溫度（22±3）℃，濕度50% ～60%，自由飲水，注意通風換氣，保持空氣清新。

1.2 藥品與試劑皂白散（陜藥控股集團天寧制藥有限責任公司，批號：091207D1）；巴豆油合劑（2%巴豆油，20%無水乙醇、5%蒸餾水、73%乙醚）；l%醋酸（西安交通大學醫學部藥理教研室提供）；伊文思蘭（曉柚生物，批號：X11103）；醋酸氟輕松軟膏（天津太平洋制藥有限公司，批號：2009DD4056）；地塞米松磷酸鈉注射液（天津金耀藥業有限公司，批號：20091011）；莫匹羅星軟膏（中美天津史克制藥有限公司，批號：2009B00825）。

1.3 菌株實驗真菌：青霉菌、黑曲霉、黃曲霉、白色念珠菌、許蘭氏毛癬菌、石膏樣小孢子菌、犁頭菌、放線菌。實驗細菌：乙型鏈球菌、F氏痢疾桿菌、枯草桿菌、大腸桿菌、變形桿菌、布氏桿菌、金黃色葡萄球菌及卡他球菌。以上菌株均由西安交通大學醫學部細菌室提供。

1.4 儀器722型分光光度計（江西貝諾儀器有限公司）；QY-EFYH253-193型無菌濾紙片（上海喬羽生物科技有限公司）；RPY-564型普通瓊脂平板（上海榕柏生物技術有限公司）；R454462型沙保弱氏瓊脂平板（上海舜友生物技術有限公司）；cl-191c型培養箱（上海信裕生物科技有限公司）；KL05A型離心機（湖南凱達科學儀器有限公司）。

2 方法

2.1 皂白散對小鼠耳腫脹影響取ICR小鼠40只，雌雄各半，隨機分為4組，即大劑量組（60%皂白散浸液），小劑量組（30%皂白散浸液），對照組（蒸餾水）及陽性對照組（醋酸氟輕松軟膏）。用巴豆油合劑（0.1 mL）涂于每只小鼠右耳兩面致炎后待用，各組小鼠右耳兩面涂藥，左耳作為自身對照，不涂試藥，藥、蒸餾水量均為每只0.1 mL。待藥水干4 h后，將小鼠脫臼處死。剪下左、右兩耳。用9 mm直徑打孔器分別在每耳的同一部位取樣。用左右兩耳片質量作為腫脹度，用扭力天平稱量。

2.2 皂白散對小鼠腹腔毛細血管通透性的影響

取ICR小鼠40只，雌雄各半。隨機分為大劑量組（60%皂白散浸液）、小劑量組（30%皂白散浸液）、對照組（蒸餾水）及陽性對照組（地塞米松磷酸鈉注射液）。于給藥后1 h，每只靜注伊文思蘭生理鹽水。每只腹腔注射1%醋酸0.2 mL。30 min后處死動物。用5 mL生理鹽水洗滌腹腔。收集腹腔洗滌液，加生理鹽水至6 mL，離心后用722型分光光度計，在波長590 nm處比色法測定其中伊文思蘭的光密度。

2.3 皂白散的抗真菌實驗將無菌濾紙片（Ф6 mm）分別浸泡于大劑量組（60%皂白散浸液）、小劑量組（30%皂白散浸液）、對照組（蒸餾水）及陽性對照組（注射用兩性霉素B）中，將待測真菌均勻涂于沙保弱氏平板，以無菌鑷夾取無菌濾紙片粘貼于平板表面，標記，室溫放置20 min，移入28℃培養箱培養48 h，用卡尺測量各樣品及對照的抑菌環直徑，抑菌實驗判斷標準：小于6 mm，不敏感（無抑菌作用）；7～10 mm，低度敏感（輕度抑制）；11～20 mm，中度敏感（中度抑制）；20 mm以上，高度敏感（重度抑制）。

2.4 皂白散的抗細菌實驗將無菌濾紙片（Ф6 mm）分別浸泡于大劑量組（60%皂白散浸液）、小劑量組（30%皂白散浸液）、對照組（蒸餾水）及陽性對照組（莫匹羅星軟膏）中，室溫放置備用，將待測細菌均勻涂于普通瓊脂平板，以無菌鑷夾取無菌濾紙片粘貼于平板表面，標記，室溫放置20 min，移入37℃培養箱培養24 h。用卡尺測量各樣品的抑菌環，抑菌實驗判斷標準：小于6 mm，不敏感（無抑菌作用）；7～10 mm，低度敏感（輕度抑制）；11～20 mm，中度敏感（中度抑制）；20 mm以上，高度敏感（重度抑制）。

2.5 皂白散全身致敏實驗取ICR小鼠20只，體質量（27±3）g，雌雄各半，隔日皮下注射60%皂白散浸液（0.4 mL·kg-1），每日2次，連續14 d。觀察ICR小鼠全身癥狀，包括皮膚潮紅、丘疹、蜷縮、嗆咳、呼吸困難、死亡等。

2.6 皂白散的毒性實驗取ICR小鼠20只，雌雄各半，禁食12 h后，灌胃給予皂白散大劑量組（60%皂白散浸液），每日3次，1日內累加劑量達40.2 g·kg-1，灌胃給藥后，給予固體飼料和水，觀察1周內小鼠死亡數及其中毒現象。

2.7 統計學方法采用SPSS 25軟件進行分析，所有數據均以均數±標準差（±s）表示，兩組計量資料比較用t檢驗，三組及以上計量資料比較用方差分析，以P＜0.05差異具有統計學意義。

3 結果

3.1 皂白散對巴豆油合劑小鼠耳部腫脹反應的影響與對照組比較，大、小劑量皂白散組小鼠的耳部腫脹度明顯降低（P＜0.05），大、小劑量組與陽性對照組無統計學意義（P＞0.05）。提示皂白散具有明確療效。見表1。

表1 皂白散對巴豆油合劑小鼠耳部腫脹反應的影響（±s）

表1 皂白散對巴豆油合劑小鼠耳部腫脹反應的影響（±s）

注：與對照組比較，*P＜0.05

腫脹度對照組組別n 左耳質量（m／mg） 右耳質量（m／mg）10 17.83±2.32 26.25±2.56 8.04±4.60陽性對照組10 16.36±2.33 28.27±0.90 2.09±2.02小劑量皂白散組 10 15.75±1.62 20.25±2.86 4.50±3.00*大劑量皂白散組 10 14.40±3.62 18.70±1.83 3.50±2.12*

3.2 皂白散對小鼠腹腔毛細血管通透性的影響

與對照組比較，大、小劑量皂白散均能顯著降低1%醋酸對小鼠腹腔毛細血管的通透性（P＜0.05）。見表2。

表2 皂白散對小鼠腹腔毛細血管通透性的影響（±s）

表2 皂白散對小鼠腹腔毛細血管通透性的影響（±s）

注：與對照組比較，*P＜0.05

通透性對照組組別n 10 0.472±0.133陽性對照組10 0.390±0.114小劑量皂白散組10 0.279±0.149*大劑量皂白散組10 0.255±0.221*

3.3 皂白散對常見真菌的抑菌環直徑大小的影響

與對照組比較，大、小劑量皂白散對青霉菌、黑曲霉、黃曲霉具有輕度抑制作用，對白色念珠菌、許蘭氏毛癬菌、石膏樣小孢子菌、犁頭菌、放線菌有中度抑制作用；小劑量組對白色念珠菌有輕度抑制作用，對放線菌有中度抑制作用。見表3。

表3 皂白散對常見真菌的抑菌環直徑大小（±s，mm）

表3 皂白散對常見真菌的抑菌環直徑大?。ā纒，mm）

注：與對照組比較，*P＜0.05

組別青霉菌黑曲霉黃曲霉白色念珠菌許蘭氏毛癬菌 石膏樣小孢子菌犁頭菌放線菌對照組0.0±0.1 0.0±0.0 0.0±0.1 0.0±0.4 0.0±0.2 0.0±0.2 0.0±0.3 0.0±0.1陽性對照組15.0±1.4 17.0±1.4 15.0±12.0 23.0±1.6 15.0±1.4 13.0±1.2 20.0±1.3 23.0±15.0小劑量皂白散組0.0±0.3*0.0±0.1*0.0±0.2*6.0±1.1*0.0±0.3*0.0±0.0*0.0±0.0*12.0±1.5*大劑量皂白散組8.0±1.3*7.0±1.6*7.0±1.5*10.0±1.2*10.0±1.3*10.0±1.4*10.0±1.2*15.0±1.3*

3.4 皂白散對常見細菌的抑菌環直徑大小的影響

與對照組比較，大劑量皂白散對乙型鏈球菌、F氏痢疾桿菌、枯草桿菌、大腸桿菌、變形桿菌、布氏桿菌、金黃色葡萄球菌及卡他球菌均有中度抑制作用；小劑量對乙型鏈球菌、F氏痢疾桿菌、變形桿菌和布氏桿菌有中度抑制作用，但對枯草桿菌、卡他球菌無抑制作用。見表4。

表4 皂白散對常見細菌的抑菌環直徑大?。ā纒，mm）

表4 皂白散對常見細菌的抑菌環直徑大?。ā纒，mm）

注：與對照組比較，*P＜0.05

氏痢疾桿菌枯草桿菌大腸桿菌變形桿菌 金黃色葡萄球菌 卡他球菌布氏桿菌對照組1.0±0.8 0.0±0.0 1.0±0.3 1.0±0.4 0.0±0.2 0.0±組別乙型鏈球菌 F 0.7 0.0±0.5 0.0±0.6陽性對照組15.0±1.8 17.0±17.0 20.0±1.6 16.0±1.5 13.0±1.4 13.0±1.4 14.0±1.5 13.6±1.4小劑量皂白散組 10.0±1.2 10.0±1.0 0.0±0.1 8.0±1.1 12.3±1.1*8.0±1.3 0.0±0.2 12.5±0.8*大劑量皂白散組 12.0±1.4* 13.0±1.6* 12.0±1.3* 15.0±1.4* 14.0±1.2* 12.0±1.6* 13.0±1.5* 12.0±1.4*

3.5 皂白散全身致敏實驗結果致敏作用連續觀察隔日皮下注射大劑量皂白散藥液，未發現小鼠皮膚潮紅、丘疹、蜷縮、嗆咳、呼吸困難等癥狀，亦未見小鼠死亡現象，說明皂白散無明顯全身致敏作用。

3.6 皂白散毒性實驗結果1周內20只小鼠均無死亡，毛發、活動、體態及飲食、糞便等未見明顯異常，證明皂白散口服時的LD50＞40.2 g·kg-1，屬比較安全的藥物。

4 討論

足癬在中醫經典《外科正宗》記載：“臭田螺，乃足陽明胃，經濕火攻注而成。此患者多生足趾腳丫，隨之白斑作爛，先癢后痛，破流臭水，形似螺靨［13］”。皂白散由白礬（煅）、皂礬（煅）、皂角、黃精、地骨皮藥物組成。其中白礬煅后為枯礬，具有解毒殺蟲、燥濕止癢作用為君藥［14］，《本草綱目》云：“礬石之用有四……酸苦涌泄……酸澀而收……收而燥濕……解毒也”；皂礬為硫酸鹽類礦物水綠礬的礦石，具有解毒燥濕，殺蟲補血的功效，煅后增強了燥濕止癢的功效［15-16］。皂角祛風殺蟲、散結消腫［17-18］，《本草綱目》云：“治民癘疥癬……殺蟲……涂之則散腫消毒，搜風治瘡。”此二藥為臣藥；地骨皮清熱養陰［19］，有輔佐前3味藥物過燥之弊，因而為佐藥；近期研究地骨皮有抑菌抗炎的作用［20］，黃精具有健脾養陰之功效，歸脾經［21］，一方面制約白礬（煅）、皂礬（煅）、皂角燥性，另一方面起到引經報使之目的為使藥。全方共奏清熱燥濕，殺蟲止癢之功用而達到了治療腳濕氣之目的［22］。結果表明大、小劑量皂白散組與對照組比較，有明顯差異，皂白散對巴豆油合劑小鼠耳部腫脹反應，側面表明皂白散有抗炎的作用；且大、小劑量皂白散均能顯著降低l%醋酸對小鼠腹腔毛細血管的通透性，進一步說明皂白散具有止癢的作用。西醫認為足癬多由毛癬菌屬、小孢子菌屬、表皮癬菌屬感染引起［23-24］，居淺部真菌病的首位［25］。本研究表明大劑量皂白散組對許蘭氏毛癬菌、石膏樣小孢子菌、犁頭菌、放線菌、白色念珠菌有中度抑制作用；小劑量組對白色念珠菌有輕度抑制作用，對放線菌有中度抑制作用；而不同類型的足癬患者皮膚屏障容易被真菌破壞［26］，易使皮膚菌群失調，局部炎癥進一步加重，患者自身的瘙癢、疼痛癥狀更加明顯；皂白散大劑量對乙型鏈球菌、F氏痢疾桿菌、枯草桿菌、大腸桿菌、變形桿菌、布氏桿菌、金黃色葡萄球菌及卡他球菌均有中度抑制作用，表明皂白散有抑制真菌、抑制細菌的作用。

中藥治療足癬主要有中藥熏洗、中藥涂敷法、浸泡法等［27］，有醋制劑、水制劑、氣霧劑、膏劑等制劑［28］，皂白散屬于水制劑浸泡法。實驗表明，皂白散具有抗炎、降低毛細血管通透性、抑制真菌、抑制細菌的作用，無明顯全身致敏性，比較安全，且具有組方簡單、工藝簡便、安全有效、成本低廉等優點，值得在臨床推廣應用。