溴氯海因對羅氏沼蝦幼體的急性毒性研究

彭 菲 徐賓朋 施偉達 徐 洋 陳雪峰

(浙江省淡水水產研究所，浙江 湖州 313001)

隨著羅氏沼蝦養殖規模的不斷擴大，高密度、集約化養殖已十分普遍，全國對苗種的需求量劇增，2019 年全國羅氏沼蝦苗的需求量達到400億尾。近年各地苗種企業育苗的成功率波動巨大，優質的種蝦和育苗技術的優勢逐漸顯現。而在育苗過程中的各個階段，羅氏沼蝦幼體會出現一些病害，影響羅氏沼蝦苗的出成率，從而影響羅氏沼蝦苗對各地養殖戶的供給，進而影響著整個羅氏沼蝦產業的發展。為了減少病害的發生，一般會在育苗過程中選擇一些消毒劑進行使用，以起到預防病害發生的效果。正確、安全地使用消毒劑顯得尤為重要，不僅可以預防病害，提高成活率，同時還可以避免抗生素的濫用情況。本試驗選取新型消毒劑15%溴氯海因顆粒劑，對羅氏沼蝦育種過程中7 天和13 天的幼體進行處理，研究溴氯海因對羅氏沼蝦兩個階段幼體的急性毒性，據此確定其安全濃度，為羅氏沼蝦育苗過程中的疾病防治提供參考數據。

一、材料和方法

1.樣本收集 羅氏沼蝦幼體來自湖州市長興縣和平鎮國家級羅氏沼蝦遺傳育種中心種質庫，分別選取離體7 天和13 天的幼體。試驗用幼體均在正常育苗過程中捕撈。

2.試驗藥品 溴氯海因顆粒劑購于北京榮鼎生物科技有限公司，為純度15%、直徑≤0.05 厘米的小顆粒。

3.試驗條件 試驗在規格為1升的玻璃燒杯中進行，試驗用水為中心育苗過程中配置的人工海水，鹽度為10～12，pH 7.4～7.6。試驗場地為中心育苗車間的育苗池，同步中心育苗車間正常育苗。水溫為28～31℃，每個玻璃燒杯中投放羅氏沼蝦幼體60 尾，并放置1 個充氣頭，試驗前曝氣30分鐘。

4.試驗方法 采用半靜態急性毒性試驗法，試驗前通過預試驗確定用藥濃度范圍。試驗按照等對數間距設置7 個濃度梯度和1 個對照(表1)，同時設3個平行組(對照組為不含藥人工海水)。試驗藥物先配成高濃度母液，再按所需濃度進行潑灑添加，藥液現配現用。用藥后6小時內連續觀察試驗蝦的中毒癥狀和死亡情況，24、48、96 小時記錄試驗幼體死亡數量，及時用吸管吸出死亡個體(以喪失游泳能力，觸碰無反應為準)。試驗期間投喂少量鹵蟲無節幼體，兩個階段羅氏沼蝦幼體同步進行試驗。

表1 試驗用藥濃度 毫克/升

5.半致死濃度和安全濃度 根據24、48 小時不同藥物、不同濃度條件下受試蝦的死亡率數據，采用改進寇氏法計算24、48 小時的半致死濃度(LC50)。安全濃度(SC)根據24 小時和48 小時的半致死濃度求得，SC＝48 小時LC50×0.3/(24 小時LC50/48小時LC50)2。

二、結果

試驗開始30 分鐘內，低濃度試驗組的幼體活動狀態與對照組基本相似，體色正常，有打堆現象。高濃度試驗組的幼體，在加入試驗溶液后即顯得很活躍，上下竄動，打圈；13天的幼體比7天的幼體應激反應更加明顯。隨著時間的推移，幼體中毒程度逐漸加重，相繼出現死亡，死亡率隨著試驗濃度的提高和時間的推移而增加。對照組的幼體與藥物濃度為0.5 毫克/升燒杯內的幼體活動基本相似，1、2毫克/升燒杯內幼體活動狀態相對前兩組稍有減弱。4 毫克/升以上的試驗組幼體基本失去平衡、游動無力，直至死亡。鏡檢幼體可發現身體多處充血、活動能力喪失。同步對比13 天幼體應激反應更加強烈，同期的游泳能力強于7天幼體的試驗組，對藥物抵抗力略高。

13 天幼體死亡數量見圖1，死亡率見表2。用改進寇氏法計算結果為：7天幼體的24小時LC50為2.97～5.52 毫克/升，48 小時 LC50為 2.76～5.31 毫克/升；13 天幼體的 24 小時 LC50為 2.81～5.28 毫克/升，48 小時 LC50為 2.65～5.31 毫克/升。SC 為0.53毫克/升。

圖1 13天幼體死亡數量

表2 兩個階段幼體的死亡率 %

三、討論

溴氯海因是一種新型的消毒劑，溴氯海因可以治療由弧菌、真菌、嗜水氣單胞菌、愛德華氏菌等細菌引起的出血、爛鰓、腐皮、腸炎(李彩莧等，2006)。在實際育苗生產中，溴氯海因常用于預防細菌性疾病。使用后不破壞水色，可維護水體浮游生物優良種群。與常規含氯消毒劑相比，溴氯海因受pH 影響不大，并能夠有效阻止有機物對于鹵素的消耗，同時，溴氯海因能夠降低表面張力破壞有機物保護膜，并促進鹵素與病菌蛋白分子的親和，提高消毒劑的作用效果(龔珞軍等，2007)。

15%溴氯海因對羅氏沼蝦幼體的毒性常用半致死濃度(LC50)來衡量，從試驗結果看，15%溴氯海因對羅氏沼蝦13天的幼體的LC50比7天的高，說明離體時間越短的溞狀幼體對消毒劑的敏感程度越高，同時，對消毒劑的耐受力也是隨著幼體的發育而增加。15%溴氯海因顆粒劑可以作為育苗過程的安全消毒劑來使用，前后兩個階段的安全濃度為0.53 毫克/升。在實際生產中，常用0.03～0.04 毫克/升全池遍灑，遠小于本試驗的安全濃度，但由于溴氯海因對于不同發育階段羅氏沼蝦幼體的敏感度差異，在使用時應根據幼體的發育程度給出相應的給藥方案。

溴氯海因的毒性作用研究主要集中于魚上，包括泥鰍安全濃度為4.006 毫克/升(何國森等，2014)，甌江唇■魚苗安全濃度為0.023 毫克/升(姚子亮等，2008)，麥瑞加拉鯪魚幼魚安全濃度為1.697 毫克/升(王志錚等，2007)，草魚魚苗安全濃度為4.676 毫克/升(溫茹淑等，2006)，鲇魚安全濃度為0.56毫克/升(宋文華等，2003)，從中可以得出，魚對溴氯海因敏感度存在著品種差異，安全濃度高的可以達到4.476 毫克/升，低的至0.023 毫克/升。有關溴氯海因對于蝦的毒性作用研究，僅有尹文林等(2013)在青蝦上開展了代謝動力學研究，本試驗因此填補了溴氯海因對蝦的毒性作用研究的空白，具有實際應用價值。