2019 年秋防小反芻獸疫病原學和抗體監測分析

周娟 程素平

（1，江蘇省南通市動物疫病預防控制中心 226000；2，江蘇省海安市畜牧獸醫站 226600）

小反芻獸疫又稱“羊瘟”，是由副粘病毒科 （Paramyxoviridac）麻疹病毒屬中的小反芻獸疫病毒引起的羊的高度接觸性動物傳染病，山羊最易感，易感羊群的發病率和死亡率可達100%[1]。該病是OIE 法定報告動物疫病，也是全球計劃根除的動物疫病，我國將其列為一類動物疫病。2012 年國務院辦公廳發布《國家中長期動物疫病防治規劃(2012-2020 年)》，明確將其列入13 種重點防范的外來動物疫病。

2007 年小反芻獸疫首次傳入我國西藏阿里地區，2013 年11 月底小反芻獸疫再次傳入我國，疫情波及多個省份[2]。2015年南通市各市、縣、區由于從外地調運未經嚴格檢疫的活羊而引發疫情，全市畜牧獸醫部門迅速行動，疫情得到有效控制，最大程度降低疫情造成的損失。

南通市是養羊大市，年養殖量約320 萬只。切實做好小反芻獸疫防控工作，事關養羊業持續健康發展。本病主要通過直接接觸傳染，病畜的分泌物和排泄物是傳染源，處于亞臨床型的病羊尤為危險?；疾⊙蛑饕憩F為體溫升高、口炎、肺炎、腹瀉、眼部、鼻腔處有漿液性分泌物等。小反芻獸疫潛伏期為4～5d，最長21d，自然發病僅見于山羊和綿羊，嚴重爆發時死亡率達100%，幼年動物感染后發病率和死亡率都很高。小反芻獸疫屬于外來疫病的一種，隨著南通市畜牧業的快速發展，與外界的物種交流逐漸頻繁，特別是活羊調運頻繁，易發生小反芻獸疫[3]。為進一步做好小反芻獸疫防控工作，貫徹落實《全國小反芻獸疫消滅計劃》 （農醫發〔2015〕 34 號），和《關于印發2019 年南通市動物疫病監測與流行病學調查工作方案的通知》 （通農牧〔2019〕 37 號），科學評估疫情風險與防控效果，更好地保障畜禽養殖業的健康發展，了解南通市7 個縣（市）區羊群的小反芻獸疫免疫抗體水平和流行情況，于2019年10 月底至11 月初采用ELISA 方法和熒光RT-PCR 方法對采集的435 份羊血清和125 份口鼻拭子進行集中監測，為制定小反芻獸疫的防控措施和消滅小反芻獸疫提供科學依據，現將檢測結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 被檢血清樣品

南通市各縣（市）、區動物疫病預防控制中心依據《關于秋防集中監測送樣的通知》 （通疫控〔2019〕 30 號）于11 月11 日前根據各縣（市）、區的送樣任務以隨機的方式采集符合要求的血清樣品共345 份、口鼻拭子樣品125 份送至南通市動物疫病預防控制中心，簡稱被動送樣。

《關于開展全市秋季重大動物疫病防疫工作檢查及飛行監測采樣的通知》 （通疫控〔2019〕 31 號）由南通市級在養殖量較高的6 個縣(市) 區中隨機抽取海安、如皋、如東3 個縣（市）區，于11 月5～8 日由市級動物疫病預防控制中心檢查組采取現場查閱相關資料和采樣相結合的方法進行檢查，每個縣（市）區隨機抽查2 個鄉鎮，每個鄉鎮檢查1 個規模羊場及1個禽場（不與縣級抽查重復），由檢查組人員全程參與采樣并按規定封存保管交檢查組人員當日帶回南通市動物疫病預防控制中心，常規分離血清樣品并編號。3 個縣（市）共采集羊血樣90 份，簡稱飛行采樣。

2019 年秋防集中監測共采集29 個羊場血樣435 份、口鼻拭子125 份，詳見表1。

1.1.2 檢測試劑和主要儀器

小反芻獸疫病毒阻斷ELISA 抗體檢測試劑盒 （批號：020171907）和小反芻病毒野毒特異性熒光RT-PCR 檢測試劑盒（批號：040211903）均購自青島立見診斷技術發展中心，酶標儀sunrise、熒光PCR 儀7500、Eppendorf 移液器等其余儀器和耗材為本實驗室自備。

1.2 檢測方法

1.2.1 ELISA 檢測原理及方法

采用小反芻獸疫診斷技術（GB/T 27982-2011）國家標準，利用阻斷ELISA 原理檢測羊血清中小反芻獸疫病毒抗體，本實驗嚴格按照小反芻獸疫抗體檢測試劑盒說明書操作。

1.2.2 ELISA 判定標準

在陽性對照阻斷率（PB）＞60，陰性對照阻斷率（PB）＜40，試驗結果成立的前提下，被檢樣品的阻斷率＞50，判為陽性，被檢樣品的阻斷率≤50，判為陰性。

表1 南通市秋防集中監測羊樣品明細表

1.2.3 RT-PCR 檢測原理及方法

用自動核酸提取儀提取各類樣本中的RNA，每份被檢樣品使用1 個PCR 管，每管中依次加入：熒光RT-PCR 反應液21ml，酶混合液1ml，被檢樣品中提取RNA 溶液3ml。每次檢測設置陽性對照和陰性對照。加樣后，將PCR 管置于熒光PCR儀內進行如下反應：50℃反轉錄15min；95℃，3min；然后進行40 個循環的PCR 擴增，擴增條件為94℃15s，60℃45s，在每個循環的第二步（60℃45s）收集熒光信號，其中報告熒光為FAM。

1.2.4 RT-PCR 判定標準

陽性對照出現特異性擴增曲線且Ct 值＜35，陰性對照無Ct值且無特異性擴增曲線。如果被檢樣品的Ct 值≤35 且有特異性擴增曲線則結果判為野毒株陽性；若Ct 值＞35 則判為野毒株陰性。

2 結果與分析

2.1 病原學檢測結果

2019 年南通市秋季集中監測對采集的4 個場125 份口鼻拭子采用熒光RT-PCR 方法進行小反芻獸疫病毒野毒株病原學檢測，檢測結果全部為陰性，表明南通市沒有小反芻獸疫野毒株感染。

2.2 血清抗體檢測結果

2.2.1 南通市各縣（市）區被動送樣樣品的免疫抗體檢測結果

由表2 可知，2019 年秋季南通市羊小反芻獸疫被動送樣的7 個縣（市）區23 個養殖場（戶）345 份樣品的小反芻獸疫抗體陽性率平均為98.55%、平均阻斷率為89.32%，高于國家規定的70%的標準，表明南通市小反芻獸疫防疫情況較好，免疫效果達到較高水平。

2.2.2 “飛行采樣” 的縣（市）羊小反芻獸疫免疫抗體檢測

由表3 可知，“飛行采樣” 采集3 個縣（市）6 個場90 份樣品羊小反芻獸疫免疫抗體平均陽性率96.67%，平均阻斷率89.29%；僅有1 個場的抗體陽性率為80%，阻斷率為81.09%，其余場的陽性率均為100%。說明飛行采樣的羊場小反芻獸疫免疫效果也較好，均超過國家規定的標準。

2.2.3 南通市各縣（市）區的羊小反芻獸疫免疫抗體秋防集中檢測

由表4 可知，南通市7 個縣（市）區的435 份樣品中有427 份羊小反芻獸疫陽性，陽性率為98.16%，所有縣（市）區的羊小反芻獸疫免疫抗體陽性率均高于95%，且平均阻斷率也達到89.32%，說明南通市的羊小反芻獸疫的免疫水平在動物疫病防控系統的全體同志的共同努力下取得了較好的免疫效果，為重大動物疫病的防控打下堅實的基礎，為逐步消滅羊小反芻獸疫打下堅實的基礎。

3 討論

（1）南通市2019 年秋防集中監測羊小反芻獸疫的免疫抗體陽性率超過了國家規定的70%的標準，且小反芻獸疫的病原學檢測也均為陰性，表明南通市羊群免疫抗體水平較高且養殖環境也是清凈的。小反芻獸疫是我國中長期動物疫病防治規劃（2012～2020 年）優先防治和重點防范的動物疫病之一，南通市的各縣（市）區政府通過購買服務，防疫員包村包戶，每年進行二次重大動物疫病普免、夏季集中補免和消毒滅源三大行動，同時監督規模羊場按本場疫苗免疫程序進行免疫并逐步完善綜合防控措施，使小反芻獸疫得到一定程度的控制，因此，近年來未曾見疫病發生。

表2 南通市各縣（市）區被動送樣樣品的免疫抗體檢測結果

表3 “飛行采樣” 的縣（市）羊小反芻獸疫免疫抗體檢測結果

表4 南通市各縣（市）區小反芻獸疫免疫抗體檢測結果匯總

（2）目前，小反芻獸疫尚無有效的治療措施，實行小反芻獸疫強制免疫是最有效的防治措施，小反芻獸疫疫苗對溫度非常敏感，運輸過程中應采用全程冷鏈運輸的方式。抗體檢測和病原學監測是評估小反芻獸疫疫苗的免疫效果，科學制定免疫程序的重要手段，本次檢測的小反芻獸疫病毒阻斷ELISA 抗體檢測試劑盒和小反芻病毒野毒特異性熒光RT-PCR 檢測試劑盒均購自青島立見，檢測結果表明，南通市2019 年所有縣（市）區的羊小反芻獸疫免疫抗體陽性率達98.16%，且平均阻斷率也達到89.32%，“飛行采樣” 采集3 個縣（市）6 個場90 份樣品羊小反芻獸疫免疫抗體平均陽性率96.67%，平均阻斷率89.29%；病原學檢測結果也均為陰性。南通市重大動物疫病的防疫工作是在監管員的監督下，防疫員領取政府統一招標采購的疫苗（全程冷鏈運輸），規模羊場由自場防疫員進行防疫，散養戶由防疫員上門進行防疫并詳細記錄免疫時間、疫苗批號、生產廠家等信息，各縣（市）區重大動物疫病指揮部定期或不定期進行檢查，南通市一年兩次進行“飛行采樣” 檢查，經過近幾年的經驗總結，全市防疫密度和防疫質量有了大幅提高，也多次得到省表揚。此次檢測結果也表明，南通市小反芻獸疫免疫效果較好，病原學檢測結果均為陰性，說明近期內發生小反芻獸疫的風險較低。

（3）獸醫工作者和養羊場（戶）應注意以下幾個方面的工作：一是加強羊只的引種檢疫和流通環節監管，加強小反芻獸疫防控技術的宣傳指導，提高基層獸醫工作者和養殖戶的防控意識，最終實現小反芻獸疫的消滅計劃；二是加強飼養管理和羊場環境控制，保證動物營養均衡；三是選擇合適、質量過關的疫苗與藥物，制訂合理的免疫和用藥方案，充分發揮疫苗及藥物的作用，做好新老疫病的控制和預防工作；四是實行嚴格的生物安全措施；五是羊場特別是規?；驁鲆龊靡卟〉亩ㄆ谠\斷與監測，有針對性采取防控措施。

（4）病原學和抗體集中檢測對羊小反芻獸疫的免疫效果評價及免疫程序的制定有重要指導意義，對調整優化免疫程序、保證疫苗免疫效果至關重要。此次檢測結果表明，南通市轄區羊場免疫抗體陽性率均較高，良好的防疫質量在重大動物疫病防控中有不可替代的作用。南通市每年組織2 次集中監測和“飛行采樣” 檢查，既是對縣（市）區進行考核，也對規模羊場和散養戶的防疫有促進作用，及時掌握小反芻獸疫群體免疫力，對小反芻獸疫的預防、控制、凈化和消滅具有積極的推動作用，對養殖場戶宣傳生物安全的重要性，督促養殖戶加強飼養管理，搞好綜合防控工作，提高羊群的抵抗力，保障養羊業的健康發展。