程序性細(xì)胞死亡因子10抑制Ⅰ型干擾素表達(dá)并促進(jìn)FMDV復(fù)制

曾宗波，馬旭升，羅志寬，齊亞銀，鄭海學(xué)*

(1.石河子大學(xué)動物科技學(xué)院，石河子 832000；2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，家畜疫病病原學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，蘭州 730046)

口蹄疫(FMD)是一種急性、烈性、高度接觸性動物傳染病。FMD主要感染豬、牛、羊等偶蹄動物，臨床以發(fā)熱、口唇、蹄部和乳房形成水泡為特征。FMD的病原是口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus, FMDV)。FMDV是單股正鏈RNA病毒，屬于小RNA病毒科(Picornaviridae)，口蹄疫病毒屬(Aphthoviru)的成員。FMDV有7種血清型，分別為O、A、C、SAT1、SAT2、STA3和Asia 1型。FMDV具有高度抗原變異，不同血清型間無抗原交叉保護(hù)現(xiàn)象[1]，同時(shí)FMDV屬于典型的免疫抑制性病毒，感染宿主以后不僅會產(chǎn)生明顯的免疫抑制反應(yīng)，還會降低宿主的免疫力，增加宿主感染其他病原的風(fēng)險(xiǎn)[2]。

天然免疫應(yīng)答反應(yīng)是宿主抵御外來病原的第一道防線。模式識別受體(pattern recognition receptor，PRR)識別病原相關(guān)分子模式(pathogen-associated molecular pattern, PAMP)，進(jìn)而導(dǎo)致Ⅰ型干擾素(type Ⅰ interferons, IFNs)、炎癥因子及其他效應(yīng)因子產(chǎn)生，最終發(fā)揮抵御外來病原的作用[3]。細(xì)胞應(yīng)答RNA病毒感染時(shí)，病毒RNA及病毒復(fù)制產(chǎn)生的雙鏈RNA(double-stranded RNA，dsRNA)被RIG-Ⅰ(retinoic acid-inducible gene Ⅰ)和MDA5(melanoma differentiation-associated gene 5)細(xì)胞質(zhì)RIG-Ⅰ樣模式識別受體(RLRs)識別[4]，并被招募至定位于線粒體外膜的接頭蛋白VISA(有文獻(xiàn)也叫MAVS、IPS-1、Cardif)[5-9]，一方面VISA激活I(lǐng)KKα/IKKβ激酶復(fù)合體，最終釋放NF-κB；另一方面，VISA激活TBK1/Ikk 激酶復(fù)合體，進(jìn)而介導(dǎo)IRF3磷酸化和二聚化，激活的NF-κB和IRF3入核，最終導(dǎo)致Ⅰ型干擾素、炎癥因子產(chǎn)生及下游抗病毒基因表達(dá)[10-12]。

多種宿主蛋白通過不同機(jī)制調(diào)控Ⅰ型干擾素產(chǎn)生在細(xì)胞抗FMDV天然免疫應(yīng)答中發(fā)揮了重要作用。如酯酶D(esterase D，ESD)、膜聯(lián)蛋白A1(annexin A1, ANXA1)等促進(jìn)Ⅰ型干擾素產(chǎn)生，進(jìn)而抑制FMDV復(fù)制[13-14]，DEAD-box RNA解旋酶(DDX56)、多聚胞嘧啶結(jié)合蛋白2(PCBP2)、G3BP1(Ras GTPase-activating protein-SH3 domain-binding protein 1)抑制Ⅰ型 干擾素產(chǎn)生，進(jìn)而促進(jìn)FMDV復(fù)制[15-17]。

程序性細(xì)胞死亡因子10(programmed cell death factor 10, PDCD10)于1999年在去除了粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子而被誘導(dǎo)凋亡的人髓系細(xì)胞系TF-1中克隆得到[18]。PDCD10是一個(gè)非常古老的基因，進(jìn)化過程中高度保守，在人的心、脾、淋巴結(jié)、結(jié)腸等組織細(xì)胞中廣泛表達(dá)[19]。早期的研究證實(shí)PDCD10與細(xì)胞調(diào)亡和血管生成密切相關(guān)，并作為一個(gè)接頭蛋白在生物體內(nèi)發(fā)揮重要作用[20]，且能與眾多的信號蛋白相互作用并形成交互網(wǎng)絡(luò)，調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡、增殖、極化、遷移和細(xì)胞骨架重塑等[21-25]。因此，PDCD10的異常表達(dá)可能會造成一個(gè)或多個(gè)信號通路中斷或紊亂，打破機(jī)體細(xì)胞增殖與凋亡之間的平衡，但目前未見PDCD10參與調(diào)控Ⅰ型干擾素產(chǎn)生及病毒感染之間關(guān)系的報(bào)道。本研究擬探究PDCD10能否通過干預(yù)Ⅰ型干擾素表達(dá)進(jìn)而影響FMDV復(fù)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細(xì)胞和病毒 HEK-293T細(xì)胞、PK-15細(xì)胞、仙臺病毒(SeV)、FMDV/O/Mya98/2010毒株均由本實(shí)驗(yàn)室保存。

1.1.2 質(zhì)粒 構(gòu)建豬源pCAGGs-PDCD10重組質(zhì)粒，pCAGGs空載體、TK質(zhì)粒、IFN-β報(bào)告基因質(zhì)粒、NF-κB報(bào)告基因質(zhì)粒、pRK-RIG-I、pRK-MDA5、pRK-VISA、pRK-TBK1、pRK-IRF3等重組質(zhì)粒均由本實(shí)驗(yàn)室保存。

1.1.3 主要試劑 DMEM 高糖培養(yǎng)基、MEM 培養(yǎng)基、opti-MEM 培養(yǎng)基、1%青霉素和鏈霉素溶液、0.25%胰酶溶液均購于GIBICO公司、胎牛血清(Biological Indu)；限制性核酸內(nèi)切酶SmaⅠ和ClaⅠ；總RNA提取試劑盒和質(zhì)粒大提試劑盒均購自O(shè)mega公司；反轉(zhuǎn)錄酶 M-MLV、RNA 酶抑制劑(RRI)、Oligo(dT)引物、隨機(jī)引物、脫氧核糖核苷三磷酸(dNTPs)、大腸桿菌 Trans5α感受態(tài)、TBgreen、ExTaqⅡ、蛋白Marker均購于TaKaRa公司；雙熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒購于 Promega 公司；鼠抗myc單抗、鼠抗β-actin單抗均購自Sigma公司；HRP 標(biāo)記山羊抗鼠IgG 二抗和HRP標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗均購自中杉金橋公司；LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染試劑購于 Invitrogen 公司。

1.2 pCAGGs-PDCD10重組質(zhì)粒構(gòu)建

參照豬源PDCD10基因序列(NCBI登錄號：XM_013982176.2)，利用Primer Premier5設(shè)計(jì)擴(kuò)增引物，分別引入酶切位點(diǎn)SmaⅠ和ClaⅠ。上游引物：5′-ATGAGGATGACAATGGAAGA-3′，下游引物：5′-TCAGGCCACAGTTTTGAAG-3′。提取PK-15細(xì)胞總RNA，反轉(zhuǎn)錄成cDNA，以此為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，將擴(kuò)增產(chǎn)物克隆于pCAGGs載體上，雙酶切鑒定并測序。

1.3 雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)檢測

將HEK-293T細(xì)胞接種于48孔板中，待細(xì)胞長至80%～90% 時(shí)，按照 LipofectamineTM2000說明書進(jìn)行轉(zhuǎn)染，每組試驗(yàn)設(shè)置3個(gè)重復(fù)，每孔轉(zhuǎn)染螢火蟲熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒4 ng、海腎熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒20 ng和相應(yīng)的空載體或pCAGGs-PDCD10不同劑量質(zhì)粒(50、100、200 ng)24 h后，SeV感染細(xì)胞，12 h后雙熒光素酶報(bào)告基因試劑盒檢測。

1.4 總RNA提取及實(shí)時(shí)熒光定量PCR

細(xì)胞總RNA提取按照Omega試劑盒說明書進(jìn)行。本研究設(shè)置空載體組，空載體SeV感染組，pCAGGs-PDCD10重組質(zhì)粒組，pCAGGs-PDCD10重組質(zhì)粒SeV感染組。將細(xì)胞接種于60 mm培養(yǎng)皿中，待細(xì)胞長至80%～90%，按照LipofectamineTM2000說明書轉(zhuǎn)染相應(yīng)的質(zhì)粒18 h后，SeV刺激，收集樣品，提取細(xì)胞總RNA，試驗(yàn)操作過程確保無RNase，RNA提取完成后反轉(zhuǎn)錄成cDNA，進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR試驗(yàn)。反應(yīng)體系：10 μL TB Green，上、下游引物各0.8 μL，0.4 μL ROXII，7.0 μL DEPC 水，1 μL cDNA。反應(yīng)程序：95 ℃ 2 min，95 ℃ 5 s，60 ℃ 34 s，40個(gè)循環(huán)。定量引物詳見表1，引物序列由上海生工公司合成。

表1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR所用引物

1.5 Western blot

將HEK-293T細(xì)胞接種于60 mm 培養(yǎng)皿中，待細(xì)胞長到80%～90% 時(shí)，根據(jù)試驗(yàn)要求按照LipofectamineTM2000說明書瞬時(shí)轉(zhuǎn)染pCAGGs-PDCD10重組質(zhì)粒以及pCAGGs空載體質(zhì)粒，收集細(xì)胞，處理樣品，100 ℃變性10 min。蛋白上樣跑SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)，將蛋白轉(zhuǎn)印至PVDF膜上，5% 脫脂奶粉室溫封閉2 h，4 ℃過夜孵育一抗，TBST 洗膜5次，每次 5 min，室溫孵育二抗1 h，TBST 洗膜5次，每次5 min，加入ECL發(fā)光液顯色曝光。

1.6 數(shù)據(jù)分析

用 2-△△Ct分析方法計(jì)算不同試驗(yàn)的數(shù)值，計(jì)算后的數(shù)據(jù)用 GraphPad Prism 5進(jìn)行分析，運(yùn)用單因素方差分析法，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 pCAGGs-PDCD10重組質(zhì)粒酶切鑒定及表達(dá)驗(yàn)證

為判斷pCAGGs-PDCD10重組質(zhì)粒是否構(gòu)建正確，SmaⅠ和ClaⅠ雙酶切后，瓊脂凝膠電泳檢測，結(jié)果如圖1a所示，在639 bp見PDCD10條帶，在5 000 bp 見空載體條帶。經(jīng)測序后確定該重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。將成功構(gòu)建的 pCAGGs-PDCD10重組質(zhì)粒和空載體分別轉(zhuǎn)染HEK-293T細(xì)胞24 h后，處理樣品并進(jìn)行Western blot試驗(yàn)，結(jié)果如圖1b所示，表明PDCD10重組質(zhì)粒在HEK-293T細(xì)胞中表達(dá)。

a.重組質(zhì)粒酶切鑒定(M.DL5000 DNA相對分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；1.PDCD10基因擴(kuò)增產(chǎn)物；2.pCAGGs-PDCD10重組質(zhì)粒ClaⅠ和 SmaⅠ雙酶切產(chǎn)物)；b.PDCD10-Myc在HEK-293T細(xì)胞中表達(dá)

2.2 過表達(dá)PDCD10促進(jìn)FMDV復(fù)制

為確定PDCD10對FMDV復(fù)制的影響，在PK-15 細(xì)胞中，本研究設(shè)置試驗(yàn)組和對照組，分別轉(zhuǎn)染PDCD10重組質(zhì)粒和空載體18 h后，感染FMDV，設(shè)置不同時(shí)間點(diǎn)，收集細(xì)胞提取RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA，進(jìn)行qPCR試驗(yàn)和Western blot試驗(yàn)，在mRNA水平和蛋白水平分別驗(yàn)證PDCD10對FMDV復(fù)制的影響，結(jié)果如圖2所示，表明在mRNA水平和蛋白水平，PDCD10均顯著促進(jìn)FMDV復(fù)制。

a.qPCR檢測過表達(dá)PDCD10不同時(shí)間點(diǎn)FMDV的復(fù)制，****.P<0.000 1; b.Western blot檢測過表達(dá)PDCD10不同時(shí)間點(diǎn)FMDV的復(fù)制。EV.空載體(下圖同)

2.3 沉默PDCD10抑制FMDV復(fù)制

為進(jìn)一步確定PDCD10對FMDV復(fù)制的影響。本研究設(shè)計(jì)了3條靶向PDCD10的siRNA，將3條siRNA分別轉(zhuǎn)染PK-15細(xì)胞，終濃度為100 nmol·L-1，24 h后qPCR檢測，沉默效率如圖3a所示，表明3條siRNA均能顯著降低PDCD10基因轉(zhuǎn)錄。進(jìn)而選擇沉默效果最好的第3號siRNA進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)，其序列：5′-CAUGUAUCCUGUGUUUAAUTT-3′，將該siRNA轉(zhuǎn)染PK-15細(xì)胞18 h 后，感染FMDV(MOI=1)，再經(jīng)過12 h qPCR檢測FMDV的復(fù)制，結(jié)果如圖3 b所示，表明沉默PDCD10能顯著降低FMDV的復(fù)制。

a.PK-15中PDCD10沉默效率鑒定；b.qPCR檢測沉默PDCD10后對PK-15中FMDV復(fù)制的影響；*.0.01

2.4 PDCD10促進(jìn)FMDV復(fù)制與Ⅰ-IFN相關(guān)

由RLRs介導(dǎo)的Ⅰ型干擾素產(chǎn)生對機(jī)體抵御病毒入侵具有十分重要的作用，為探究PDCD10促進(jìn)FMDV復(fù)制與Ⅰ型干擾素之間的相關(guān)性。首先，用IFN-β刺激PK-15細(xì)胞，4 h后感染FMDV(MOI=1)，12 h后qPCR檢測FMDV的復(fù)制，結(jié)果如圖4a所示，與對照相比，IFN-β能顯著抑制FMDV的復(fù)制。其次，過表達(dá)PDCD10后感染SeV(MOI=1)12 h,收集上清液，并將上清液加到PK-15細(xì)胞中，4 h后感染FMDV(MOI=1)，再經(jīng)過12 h qPCR檢測FMDV的復(fù)制，結(jié)果如圖4 b所示，與空載體組相比，過表達(dá)PDCD10的上清液能顯著促進(jìn)FMDV的復(fù)制。

a.用IFN-β處理或不處理PK-15細(xì)胞，qPCR檢測FMDV的復(fù)制情況；b.過表達(dá)PDCD10并感染SeV，取上清處理PK-15細(xì)胞，qPCR檢測FMDV的復(fù)制情況；*.0.01

2.5 PDCD10抑制IFN-β啟動子和NF-κB激活

為進(jìn)一步探究PDCD10如何影響FMDV的復(fù)制。本文探究了PDCD10是否影響病毒感染誘導(dǎo)的IFN-β啟動子激活，分別將pCAGGS-PDCD10重組質(zhì)粒、報(bào)告基因質(zhì)粒和內(nèi)參質(zhì)粒以及空載體轉(zhuǎn)染HEK-293T細(xì)胞18 h 后，感染SeV(MOI=1)，再經(jīng)過12 h 處理樣品，利用雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)檢測，結(jié)果如圖5所示，表明PDCD10可顯著抑制SeV誘導(dǎo)的IFN-β啟動子和NF-κB的激活，且呈劑量依賴性。

圖5 PDCD10抑制SeV誘導(dǎo)的IFN-β和NF-κB激活

接著，為確定PDCD10抑制Ⅰ型干擾素產(chǎn)生的分子水平，本研究設(shè)置試驗(yàn)組和對照組，分別瞬時(shí)轉(zhuǎn)染PDCD10質(zhì)粒、報(bào)告基因質(zhì)粒、內(nèi)參質(zhì)粒和Ⅰ型干擾素通路分子質(zhì)粒，雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)檢測，結(jié)果如圖6所示，表明PDCD10分別抑制RIG-I、IRF3、IRF7誘導(dǎo)的IFN-β啟動子激活，但是PDCD10不能抑制VISA、MITA、TBK1誘導(dǎo)的IFN-β啟動子激活。

a～f.將Ⅰ型干擾素通路分子質(zhì)粒分別與報(bào)告基因質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞18 h 后，雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)檢測IFN-β的激活情況；*.0.01

2.6 PDCD10負(fù)調(diào)控RLRs通路分子的表達(dá)

為研究PDCD10對Ⅰ型干擾素信號通路分子轉(zhuǎn)錄水平的影響，本研究設(shè)置試驗(yàn)組和對照組，分別將pCAGGS-PDCD10重組質(zhì)粒和空載體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HEK-293T細(xì)胞18 h 后，感染SeV(MOI=1)，再經(jīng)過12 h 收集樣品，提取細(xì)胞總RNA，反轉(zhuǎn)錄成cDNA，進(jìn)行實(shí)時(shí)實(shí)熒光定量PCR試驗(yàn)，結(jié)果如圖7所示，表明感染SeV后，試驗(yàn)組的RIG-Ⅰ、MDA5、VISA、TBK1的轉(zhuǎn)錄顯著低于相應(yīng)的對照組，但對IRF3和STING的轉(zhuǎn)錄沒有影響。

a～f.HEK-293T細(xì)胞中過表達(dá)PDCD10，感染或不感染SeV 18 h 后，qPCR分別檢測通路分子基因的表達(dá)；*.0.01

2.7 PDCD10負(fù)調(diào)控Ⅰ型干擾素下游ISGs的轉(zhuǎn)錄

為探究PDCD10對Ⅰ型干擾素下游ISGs轉(zhuǎn)錄水平的影響。本研究設(shè)置試驗(yàn)組和對照組，在HEK-293T細(xì)胞中分別轉(zhuǎn)染pCAGGS-PDCD10重組質(zhì)粒和空載體18 h 后，感染SeV(MOI=1)，再經(jīng)過24 h，收集樣品，提取細(xì)胞總RNA，反轉(zhuǎn)錄成cDNA，進(jìn)行qPCR試驗(yàn)，結(jié)果如圖8所示，表明感染SeV后，試驗(yàn)組的ISG20、ISG54、ISG56、CXCL10、RANTES的轉(zhuǎn)錄顯著低于相應(yīng)的對照組。

a～f.HEK-293T細(xì)胞中過表達(dá)PDCD10，感染或不感染SeV 18 h 后，qPCR分別檢測Ⅰ-IFN下游ISGs的表達(dá)；*.0.01

3 討 論

天然免疫是宿主抗病毒應(yīng)答的第一道防線，一旦RNA病毒感染，模式識別受體RLRs識別病毒核酸，并與線粒體上的VISA結(jié)合，活化后的VISA招募TBK1與IKK激酶復(fù)合物，使得IRF3發(fā)生磷酸化并形成二聚體并入核，最終導(dǎo)致Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生。Ⅰ型干擾素介導(dǎo)的干擾素刺激基因表達(dá)對宿主細(xì)胞清除外來病毒感染中具有十分重要的作用。適時(shí)、適量的Ⅰ型干擾素產(chǎn)生能有效抑制病毒復(fù)制，并誘導(dǎo)適應(yīng)性免疫應(yīng)答，最終免疫系統(tǒng)清除病毒[3],相反，Ⅰ型干擾素產(chǎn)生過量，會誘發(fā)自身免疫性疾病，甚至導(dǎo)致機(jī)體死亡[26]。由于不受控制的先天免疫反應(yīng)對宿主是有害的，甚至是致命的，因此，宿主蛋白對于Ⅰ型干擾素信號通路的精準(zhǔn)調(diào)控對于維持宿主的免疫平衡至關(guān)重要。近年來，研究證實(shí)許多正負(fù)調(diào)節(jié)因子通過不同的機(jī)制在多個(gè)水平上控制著先天性免疫信號通路。如當(dāng)病毒感染后，研究表明，HAUS-augmin樣復(fù)合物亞基8(HAUS8)通過靶向VISA復(fù)合物增強(qiáng)RLR-VISA依賴的抗病毒信號通路[27]。E3連接酶RIPLET結(jié)合多聚化的RIG-Ⅰ正調(diào)控RIG-Ⅰ，使得RIG-Ⅰ形成穩(wěn)定的四聚體，最終與VISA結(jié)合[28]。相對于宿主蛋白正調(diào)控，當(dāng)RNA病毒感染宿主細(xì)胞后，RIG-Ⅰ在第8個(gè)絲氨酸位點(diǎn)會發(fā)生磷酸化，但該位點(diǎn)的磷酸化可阻斷E3泛素連接酶TRIM25對RIG-Ⅰ的泛素化修飾，從而負(fù)調(diào)控Ⅰ型干擾素產(chǎn)生[29]；磷酸酶PPM1B可以催化TBK1去除其172位絲氨酸的磷酸化修飾，負(fù)調(diào)控TBK1激活，從而抑制Ⅰ型干擾素產(chǎn)生[30]；此外，E3泛素連接酶RNF5可以催化VISA或MITA發(fā)生K48連接的多聚泛素化修飾并通過蛋白酶體途徑被降解，從而負(fù)調(diào)控Ⅰ型干擾素產(chǎn)生[31-32]；AIP4能夠催化VISA發(fā)生泛素化修飾進(jìn)而被降解，負(fù)調(diào)控Ⅰ型干擾素產(chǎn)生[33]；ISG56是一種干擾素誘導(dǎo)蛋白，病毒刺激細(xì)胞以后，會產(chǎn)生大量的ISG56，但I(xiàn)SG56會破壞VISA與MITA復(fù)合物的組裝，從而負(fù)調(diào)控IRF3的激活[34]。本研究發(fā)現(xiàn)宿主蛋白PDCD10能夠顯著抑制由SeV誘導(dǎo)的IFN-β和NF-κB的激活且呈劑量依賴性，并且在mRNA水平顯著抑制Ⅰ型干擾素信號通路關(guān)鍵分子RIG-Ⅰ、MDA5、VISA和TBK1轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致Ⅰ型干擾素產(chǎn)生水平降低。同時(shí)對下游ISGs的研究發(fā)現(xiàn)，PDCD10顯著抑制ISG20、ISG54、ISG56、CXCL10、RANTES等抗病毒基因轉(zhuǎn)錄，抗病毒基因由Ⅰ型干擾素調(diào)控表達(dá)，進(jìn)一步說明PDCD10對Ⅰ型干擾素表達(dá)起負(fù)調(diào)控作用。雙熒光素酶報(bào)告基因試驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)PDCD10能夠抑制RIG-Ⅰ介導(dǎo)的干擾素的活化，但對其下游VISA介導(dǎo)的干擾素的活化沒有影響，這間接說明PDCD10影響VISA上游的信號分子，如RIG-Ⅰ。同時(shí)PDCD10對于IRF3以及IRF7誘導(dǎo)的干擾素的表達(dá)也具有抑制作用，這說明在IRF3或IRF7分子水平，PDCD10也具有抑制功能。結(jié)合上述結(jié)果，PDCD10可能不僅僅定位于RLRs通路中的一個(gè)分子。目前，研究證實(shí)，PDCD10在不同種屬間保守，在不同臟器中均有表達(dá)。同時(shí)，當(dāng)病毒或細(xì)菌感染后，檢測發(fā)現(xiàn)不同組織中PDCD10均有上調(diào),高致病性H5N1禽流感病毒感染雞胚成纖維細(xì)胞發(fā)現(xiàn)免疫相關(guān)基因PDCD10表達(dá)上調(diào)[35]。但PDCD10抑制Ⅰ型干擾素產(chǎn)生是首次被報(bào)道，PDCD10抑制Ⅰ型干擾素的具體分子機(jī)制仍有待進(jìn)一步研究。

研究報(bào)道顯示，Ⅰ型干擾素能夠抑制FMDV的復(fù)制。本研究發(fā)現(xiàn)PDCD10能夠促進(jìn)FMDV復(fù)制，推測這與干擾素的合成具有相關(guān)性。因此通過與對照組相比，IFN-β刺激后的細(xì)胞能夠顯著抑制FMDV的復(fù)制，這與之前的研究相符[36]。同時(shí)，為了證實(shí)PDCD10介導(dǎo)Ⅰ型干擾素的降低，促進(jìn)FMDV復(fù)制。本研究利用過表達(dá)PDCD10后，SeV刺激的細(xì)胞上清處理PK-15細(xì)胞，感染FDMV，結(jié)果顯示FMDV復(fù)制增加。這進(jìn)一步說明PDCD10能夠通過抑制Ⅰ型干擾素產(chǎn)生，進(jìn)而促進(jìn)FMDV復(fù)制。因此，本文為認(rèn)識宿主蛋白正向調(diào)控FMDV復(fù)制提供了新視角，但是其具體機(jī)制仍有待下一步研究。

4 結(jié) 論

宿主蛋白PDCD10負(fù)調(diào)控Ⅰ型干擾素產(chǎn)生，而促進(jìn)FMDV復(fù)制，本研究為進(jìn)一步探究PDCD10調(diào)控宿主抗病毒天然免疫的機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。