小尾寒羊綿羊痘病例的診斷

白 衡，毛甜甜，方 梅，陳達(dá)年，劉 升，張彥平，賈 寧

(甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，蘭州 730070)

綿羊痘病(sheep pox)是由痘病毒科(Poxviridae)、山羊痘病毒屬(Capripoxvirus)中的綿羊痘病毒(sheep pox virus, SPV)引起羊的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，以皮膚、黏膜和內(nèi)臟形成痘疹為特征[1-2]。本病起源于中亞地區(qū)，后蔓延至世界各地，現(xiàn)已廣泛分布于非洲、亞洲、歐洲、大洋洲等地區(qū)，特別是北非、中東和部分亞洲國(guó)家流行較嚴(yán)重[2-17]。該病在我國(guó)內(nèi)蒙古、青海、新疆、甘肅、貴州等地均有報(bào)道[2,15,18-19]。綿羊痘在自然情況下僅發(fā)生于綿羊，其中，細(xì)毛羊較粗毛羊易感，且病情嚴(yán)重，羔羊(4～8月齡)較成年羊易感，癥狀更嚴(yán)重，病死率也高[2, 5]。本病一年四季皆可發(fā)生，但以春、冬常見(jiàn)[5, 20]。病毒主要通過(guò)呼吸道感染，也可通過(guò)損傷的皮膚或黏膜侵入機(jī)體[5,15]。健康羊可通過(guò)接觸病羊或病羊排出的痂皮感染，甚至可通過(guò)吸血昆蟲(chóng)傳播[15]。SPV在干燥條件下具有很強(qiáng)的抵抗力，能夠在干燥痂皮中存活數(shù)月至數(shù)年，在干燥羊舍內(nèi)可存活6～8月[21]。SPV對(duì)熱、酸、堿等較敏感。近年來(lái)，隨著我國(guó)各地養(yǎng)羊業(yè)的快速發(fā)展，各地綿羊痘的發(fā)病也呈現(xiàn)多發(fā)和流行態(tài)勢(shì)，給養(yǎng)羊業(yè)帶來(lái)了巨大的威脅和嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。

2019年1月，甘肅省景泰縣某羊場(chǎng)(約200只)養(yǎng)殖的30～40只3～6月齡小尾寒羊發(fā)病，病羊體溫升高至41～42 ℃，精神不振，食欲減退，鼻腔流較多黏稠鼻液。隨后，病羊鼻唇、眼部、腹部及四肢內(nèi)側(cè)出現(xiàn)紅斑、丘疹及灰白色結(jié)節(jié)。最初只有個(gè)別羊發(fā)病，但很快蔓延至全群，并導(dǎo)致羔羊大量死亡。根據(jù)臨診檢查疑似綿羊痘。為進(jìn)一步確診此病和深入探討該病的病理變化特點(diǎn)與發(fā)生機(jī)制，本研究對(duì)該羊場(chǎng)病羊進(jìn)行了一系列實(shí)驗(yàn)室診斷和病理學(xué)研究。

1 材料與方法

1.1 病料來(lái)源

6只發(fā)病小尾寒羊(4♀、2♂)來(lái)自甘肅景泰縣某羊場(chǎng)，臨診病理檢查后，頸部局部剪毛，酒精消毒，頸靜脈采血，迅速送實(shí)驗(yàn)室分離血清。隨后，在嚴(yán)格的消毒條件下，對(duì)6例病羊放血處死，無(wú)菌切取皮膚、瘤胃黏膜、肺等組織樣品，無(wú)菌袋保存，于液氮中冷卻后再移至實(shí)驗(yàn)室-70 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩Ｔ诜叛幩啦⊙蚝?0 min內(nèi)，自肺分別切取數(shù)塊組織(1 mm3)， 于2%多聚甲醛-2.5%戊二醛溶液中預(yù)固定，4 ℃冰箱保存。同時(shí)，分別切取心、肝、脾、肺、腎、腸系膜淋巴結(jié)及瘤胃等組織數(shù)塊(1 cm3)，于4%多聚甲醛磷酸緩沖液(0.1 mol·L-1，pH 7.4)固定。

1.2 主要試劑

羊痘間接 ELISA 抗體檢測(cè)試劑盒(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所)；DNA 分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、PCR試劑盒、上、下游引物(RPO30F1： 5′-GCCTCGAGATGGATGATGAT-3′，RPO30F2: 5′-GCGGATCCACTTTTTTCTACAGCTCT-3′)、DNA 提取試劑盒及凝膠回收試劑盒均為天根生化科技(北京)有限公司產(chǎn)品；Macchiavello法染色試劑盒(包涵體染色試劑盒)(長(zhǎng)沙，達(dá)爾鋒生物科技有限公司)。DMEM高糖培養(yǎng)基、胎牛血清為Hyclone公司的產(chǎn)品。其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.3 羊痘間接 ELISA 抗體檢測(cè)

取已包被的ELISA板，加入待測(cè)血清與對(duì)照血清，共設(shè)立8孔，2孔待測(cè)血清用血清樣品稀釋液1∶100 稀釋，2孔標(biāo)準(zhǔn)陰性血清，2孔標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清，每孔直接加入100 μL；2孔空白對(duì)照，每孔加100 μL樣品稀釋液。置于37 ℃溫箱內(nèi)孵育1 h。然后，取出酶標(biāo)板甩干，用洗滌液(1×PBST)洗滌3次， 甩干。用血清稀釋液將兔抗羊-HRP 結(jié)合物按1∶300稀釋，每孔加入100 μL；置于37 ℃溫箱內(nèi)孵育1 h。取出酶標(biāo)板甩干，再用洗滌液(1×PBST)洗滌3次，甩干。每孔加入底物(TMB)溶液100 μL，置37 ℃避光處?kù)o置反應(yīng)10 min后，每個(gè)孔加入50 μL終止液。在450 nm波長(zhǎng)處，測(cè)定酶標(biāo)板各孔的光吸收值。試劑盒檢測(cè)判斷標(biāo)準(zhǔn)：OD450 nm≥0.25，抗體為陽(yáng)性；OD450 nm≤0.2，抗體為陰性；當(dāng)檢測(cè)值0.25>OD450 nm>0.20，判定陽(yáng)性可疑，則重復(fù)檢測(cè)1次，若 OD450 nm≥0.23，判定為陽(yáng)性，OD450 nm<0.23則判為陰性。

1.4 PCR 檢測(cè)

1.4.1 樣品處理 在生物安全環(huán)境下，將采集的動(dòng)物病料(皮膚、胃黏膜及肺痘疹結(jié)節(jié))從-70 ℃的冰箱取出，用緩沖液清洗干凈，置乳缽中，剪碎，添加滅菌石英砂研磨，加入 0.01 mol·L-1滅菌PBS(pH為7.6～7.8)制成1∶5懸液，置4 ℃冰箱浸毒過(guò)夜；然后，-20 ℃凍融2次，8 000 r·min-1離心5 min， 吸取上清液提取總DNA。

1.4.2 樣品DNA提取與檢測(cè) 按試劑盒說(shuō)明書要求從痘疹樣病灶組織提取樣品DNA，以此為模板，建立50 μL擴(kuò)增體系(擴(kuò)增預(yù)混液25 μL，RPO30F1上游引物1 μL，RPO30F2下游引物1 μL， DNA模板5 μL，水18 μL)，擴(kuò)增目的片段。反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃ 50 s，57 ℃ 50 s，72 ℃ 50 s，共35個(gè)循環(huán)；72 ℃延伸8 min。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1.0%瓊脂糖凝膠電泳10～20 min，紫外燈下觀察電泳條帶判定結(jié)果(綿羊痘病毒完整ORF 585 bp， 山羊痘病毒為606 bp。如擴(kuò)增到585 bp條帶，說(shuō)明是綿羊痘病毒)。

1.5 病理組織學(xué)觀察

6只病羊組織病料固定后，常規(guī)石蠟包埋切片，制備3～4 μm連續(xù)切片。分別采用HE染色、高碘酸-Schiff氏(PAS)染色、Masson三色染色、甲基綠派洛寧(Methyl green-Pyronin，MGP)染色；同時(shí)，采用Macchiavello法染色試劑盒，按試劑盒說(shuō)明書要求進(jìn)行包涵體染色。采用OLYMPUS BX-UCB/ BX61圖像分析系統(tǒng)觀察、拍照。

1.6 透射電鏡觀察

電鏡材料預(yù)固定結(jié)束后，采用1 mL·L-1鋨酸后固定，丙酮乙醇梯度脫水，Epon812包埋，LKB8800型超薄切片機(jī)切片，醋酸鈾、硝酸鉛雙層染色，日本JEM-100CX透射電子顯微鏡觀察、拍照。

1.7 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié) 果

2.1 羊痘間接 ELISA 抗體檢測(cè)

根據(jù)測(cè)定結(jié)果顯示，1號(hào)病羊血清樣初次測(cè)定OD450 nm為 0.25>OD450 nm=0.246 8>0.20，判定陽(yáng)性可疑，重復(fù)測(cè)定1次，OD450 nm=0.263 2>0.23，因此，判定為陽(yáng)性；2號(hào)血清樣初次測(cè)定 OD450 nm=0.341 1>0.25，因此，判定為陽(yáng)性；3號(hào)血清樣初次測(cè)定OD450 nm為 0.25>OD450 nm=0.238 0>0.20判定陽(yáng)性可疑，重復(fù)測(cè)定1次，OD450 nm=0.238 4>0.23，因此，也為陽(yáng)性；4號(hào)血清樣初次測(cè)定OD450為 0.25>OD450 nm=0.242 3>0.20，判定陽(yáng)性可疑，重復(fù)測(cè)定為OD450 nm=0.248 0>0.23，判定為陽(yáng)性；5號(hào)血清初次檢測(cè)OD450 nm=0.315 7>0.25，判定為陽(yáng)性；6號(hào)血清樣初次測(cè)定 OD450 nm=0.446 6>0.25，判定為陽(yáng)性。所以，6例病羊均初步確診為羊痘。

2.2 PCR檢測(cè)

2份皮膚痘疹樣品PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，檢測(cè)樣品均擴(kuò)增出585 bp左右的片段，與預(yù)期的基因片段長(zhǎng)度相符(圖1)，測(cè)序結(jié)果經(jīng)過(guò)NCBI blast比對(duì)為SPV，說(shuō)明該檢測(cè)樣品中有SPV核酸存在，結(jié)合羊痘間接 ELISA 抗體檢測(cè)結(jié)果，證明本次小尾寒羊疫病為綿羊痘。

M. DNA相對(duì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；1、2. 病料；3. 陰性對(duì)照M. DNA marker；1, 2. Sample；3. Negative control圖1 PCR擴(kuò)增Fig.1 PCR amplification

2.3 臨診與剖檢病理變化

6只發(fā)病小尾寒羊?yàn)?月齡左右羔羊。病羊精神沉郁、體溫升高(41～42 ℃)。在局部皮膚，尤其無(wú)毛或少毛處，如眼周圍、鼻、唇、乳腺、四肢內(nèi)側(cè)、尾、會(huì)陰等處，可見(jiàn)充血、紅斑及數(shù)量不等的圓形痘疹。嚴(yán)重時(shí)，尾內(nèi)側(cè)痘疹局部感染化膿或潰瘍(圖2A)。部分病羊舌及口腔黏膜有壞死及痘疹，鼻腔常有多量黏稠、灰白色分泌物，鼻腔和氣管黏膜也可見(jiàn)壞死與痘疹。6只病羊瘤胃等前胃黏膜常有大小不等痘疹與壞死病灶(圖2B)，黏膜不同程度充血、水腫，表面有多量黏稠分泌物；皺胃呈急性卡他性胃炎。

A. 病羊尾內(nèi)側(cè)痘疹及潰瘍；B. 病羊瘤胃黏膜面有大量痘疹與壞死病灶；C. 肺膈葉呈滲出-增生性結(jié)節(jié)的痘疹(↑)；D. 肺膈葉呈增生-壞死性結(jié)節(jié)的痘疹(↑)；E. 肝表面灰白色結(jié)節(jié)狀痘疹(↑)；F. 脾表面大量結(jié)節(jié)狀痘疹(↑)A. Pox lesions and ulcers on the tail root; B. A large number of pox lesions and necrosis lesions on the rumen mucosa; C. Exudation-proliferation nodules in the lung diaphragm (↑); D. Necrosis-proliferation nodules in the lung diaphragm (↑); E. Pox lesions on the liver surface (↑); F. Nodular pox lesions on the spleen surface (↑)圖2 病羊臨診及剖檢病理變化Fig.2 The clinical pathological changes of sick sheep

6只病羊程度不等肺腫大，氣管與支氣管有大量灰白色黏稠分泌物，肺葉(尤其膈葉)表面與切面有明顯呈散在或灶狀分布的痘疹病灶，包括滲出-增生性結(jié)節(jié)和增生-壞死性結(jié)節(jié)。滲出-增生性結(jié)節(jié)為肺痘疹的初期表現(xiàn)，呈米粒大、暗紅色、微突出于肺表面、質(zhì)地較硬實(shí)(圖2C)；增生-壞死性結(jié)節(jié)，呈大小不等灰白色或灰紅色圓形或不正圓形病灶，與周圍肺組織界限明顯，微突出于肺表面，質(zhì)地堅(jiān)實(shí)，切面干燥(圖2D)。同時(shí)，病羊肺尖葉、心葉常見(jiàn)較大范圍灰紅色肺炎實(shí)變區(qū)。肝、脾、腎輕度腫大，也常散在數(shù)量不等圓形、灰白色結(jié)節(jié)狀痘疹病灶(圖2E、F)。病羊心呈現(xiàn)程度不等擴(kuò)張、心肌纖維變性和壞死。

2.4 病理組織學(xué)變化

6只病羊眼觀皮膚、口腔黏膜及胃黏膜等的痘疹病灶，在病理組織學(xué)上表現(xiàn)為局部黏膜上皮細(xì)胞和皮膚表皮細(xì)胞大量增生，且發(fā)生程度不等水泡變性和氣球樣變(圖3A)，使局部顯著增厚，位于皮膚的痘疹常伴發(fā)角化不全或角化過(guò)度。變性黏膜上皮和表皮細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)有時(shí)可見(jiàn)大小不一的嗜酸性包涵體。黏膜固有層和皮膚真皮層充血、水腫、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，血管周圍和膠原纖維束間有大量綿羊痘細(xì)胞浸潤(rùn)，綿羊痘細(xì)胞呈星形、梭形和不規(guī)則圓形，細(xì)胞體積較大，細(xì)胞核呈卵圓形或不規(guī)則形，染色體常邊集，其細(xì)胞質(zhì)內(nèi)常有一個(gè)或幾個(gè)嗜酸性或嗜酸性顆粒狀包涵體(圖3B)。時(shí)間較長(zhǎng)時(shí)，痘疹局部黏膜固有層和皮膚真皮層發(fā)生大范圍凝固性壞死。

6只病羊肺呈現(xiàn)痘疹和肺炎病變。肺痘疹也表現(xiàn)為兩類痘疹結(jié)節(jié)變化：滲出-增生性結(jié)節(jié)和增生-壞死性結(jié)節(jié)。滲出-增生性結(jié)節(jié)，局部肺泡隔高度充血，有大量嗜中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡腔充滿漿液、脫落的上皮和炎性細(xì)胞，肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞增生(圖3C)。局部細(xì)支氣管黏膜上皮細(xì)胞增生，增生的上皮細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)嗜酸性包涵體，管腔中也有大量漿液、脫落的上皮細(xì)胞和炎性細(xì)胞(圖3D)。血管周圍和細(xì)支氣管周圍有多少不等綿羊痘細(xì)胞，綿羊痘細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)也常有嗜酸性包涵體(圖3D)。增生-壞死性結(jié)節(jié)，病變中央?yún)^(qū)肺組織壞死，壞死區(qū)周圍肺組織呈現(xiàn)與滲出-增生性結(jié)節(jié)基本類似病變，但無(wú)明顯肺泡腔內(nèi)漿液滲出。除痘疹病變外，見(jiàn)繼發(fā)感染病變，呈程度不等的化膿性肺炎和大葉性肺炎病變。

A. 瘤胃黏膜局部上皮細(xì)胞大量增生、水泡變性，固有層散在數(shù)量不等的綿羊痘細(xì)胞(↑)，100×；B. 瘤胃黏膜局部固有層散在數(shù)量不等的綿羊痘細(xì)胞(↑)，400×；C. 肺滲出-增生性結(jié)節(jié)局部，肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞大量增生，肺泡腔充滿漿液、脫落的上皮和炎性細(xì)胞，肺泡隔散在多量巨噬細(xì)胞， 400×；D. 滲出-增生性結(jié)節(jié)局部，細(xì)支氣管黏膜上皮增生，上皮細(xì)胞胞質(zhì)有嗜酸性包涵體，細(xì)支氣管周圍有大量綿羊痘細(xì)胞，羊痘細(xì)胞胞質(zhì)有嗜酸性包涵體(↑)，400×A. The epithelial cells of the rumen mucosa proliferation and vacuolar degeneration, lamina propria scattered varying amounts of sheep pox cells (↑), 100×; B. Varying number of sheep pox cells (↑) scattered in the lamina propria of the rumen mucosa, 400×; C. Exudation-proliferation nodules, alveolar type Ⅱ epithelial cells proliferate massively, the alveolar cavities are full of serous fluid, exfoliated epithelial cells and inflammatory cells, a large number of macrophages in alveolar septum, 400×; D. Exudation-proliferation nodules, bronchiolar epithelial proliferation, eosinophilic inclusions in the epithelial cells, a large number of sheep pox cells around the bronchiole, and the eosinophilic inclusions (↑) in the cytoplasm of sheep pox cells, 400×圖3 病羊病理組織學(xué)變化(HE)Fig.3 The histopathologic changes of sick sheep (HE)

6只病羊肝、脾、腎呈程度不等的充血、變性病變。痘疹病灶病理組織學(xué)觀察主要表現(xiàn)為組織細(xì)胞變性、壞死。同時(shí)，局部有大量單核巨噬細(xì)胞增生和綿羊痘細(xì)胞聚集，其細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)也常有嗜酸性包涵體。病羊心充血、出血，呈程度不等變質(zhì)性心肌炎。病羊全身淋巴結(jié)呈程度不等急性漿液性淋巴結(jié)炎或出血性淋巴結(jié)炎。

2.5 超微結(jié)構(gòu)變化

2只病羊肺超微結(jié)構(gòu)觀察顯示，病變局部肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞增生，上皮細(xì)胞核濃縮、染色質(zhì)聚集，線粒體程度不等腫脹、嵴斷裂、空泡化，細(xì)胞內(nèi)常見(jiàn)大小不等、形態(tài)不一、界限明顯的胞質(zhì)內(nèi)包涵體，包涵體周圍有明顯膜包裹(圖4)。

A. 肺泡隔增生的Ⅱ型上皮細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)多個(gè)界限明顯的胞質(zhì)包涵體(↑)，15 000×；B. 肺泡上皮細(xì)胞內(nèi)，線粒體腫脹、嵴斷裂、空泡化， 8 000×A. Alveolar type Ⅱ epithelial cells proliferation, inclusions in the cytoplasm(↑), 15 000×；B. Mitochondrial swelling, fractured cristae and cavitation, 8 000×圖4 肺超微結(jié)構(gòu)變化Fig.4 The ultrastructural changes of lung

3 討 論

本研究對(duì)樣品血清和病料分別進(jìn)行間接 ELISA 抗體檢測(cè)和PCR檢測(cè)。羊痘間接 ELISA 抗體檢測(cè)顯示，6只病羊樣品均為陽(yáng)性，表明6只病羊均被羊痘病毒感染，血清存在羊痘病毒抗體；進(jìn)一步對(duì)病羊組織樣品提取病毒基因組DNA進(jìn)行PCR檢測(cè)，均擴(kuò)增出585 bp左右的目的基因片段，與預(yù)期的片段相符，與對(duì)照比較證明被檢樣品中有綿羊痘病毒(SPV)存在。結(jié)合ELISA和PCR檢測(cè)結(jié)果，證明本次甘肅省景泰縣羊場(chǎng)小尾寒羊疫情是由SPV引起的綿羊痘。

有研究表明[22-40]，皮膚以及呼吸道和消化道黏膜的病理?yè)p傷是綿羊痘重要的病變，本研究也同樣觀察到上述部位的痘疹、壞死、潰瘍等病變。但除上述部位病變外，研究發(fā)現(xiàn)，小尾寒羊發(fā)生綿羊痘時(shí)，實(shí)質(zhì)器官肺、肝、脾、腎等痘疹病變表現(xiàn)更加突出。本研究中6只病羊肺、肝、脾、腎均出現(xiàn)明顯的痘疹病變。病理剖檢觀察，肺痘疹病變主要出現(xiàn)在肺膈葉，呈散在或灶狀分布，包括2種形式的痘疹，滲出-增生性結(jié)節(jié)和增生-壞死性結(jié)節(jié)。前者，呈米粒大、暗紅色、微突出于肺表面；后者呈大小不等圓形或不正圓形病灶，灰白色或灰紅色，質(zhì)地堅(jiān)實(shí)的結(jié)節(jié)狀病灶。肝、脾、腎等的痘疹病灶呈散在的大小不等的灰白色結(jié)節(jié)狀病灶。病理組織學(xué)觀察，肺2種痘疹病變的差異是滲出-增生性結(jié)節(jié)局部有明顯多量的急性炎性滲出物，如漿液等；而增生-壞死性結(jié)節(jié)局部則組織呈廣泛凝固性壞死，無(wú)明顯炎性滲出物，但兩者共同的變化是病變局部出現(xiàn)大量綿羊痘細(xì)胞聚集，甚至在病灶局部血管周圍、細(xì)支氣管周圍密集。而綿羊痘細(xì)胞胞質(zhì)有明顯的嗜酸性包涵體。肝、脾、腎等的痘疹病灶則表現(xiàn)增生-壞死性結(jié)節(jié)，同樣局部出現(xiàn)大量綿羊痘細(xì)胞。因此，這種具有胞質(zhì)包涵體的特殊形態(tài)的綿羊痘細(xì)胞在痘疹病變局部的大量出現(xiàn)是組織病理診斷的重要依據(jù)。

綿羊痘細(xì)胞也被稱為“cellulus claveleulus”，最初由Borrel[41]于1903年發(fā)現(xiàn)，認(rèn)為它們可能是巨噬細(xì)胞；1959年,Plowright等[42]描述綿羊痘細(xì)胞為真皮中的大細(xì)胞，擁有空泡化細(xì)胞核，偶有細(xì)胞質(zhì)包涵體[32]，并認(rèn)為綿羊痘細(xì)胞是纖維細(xì)胞，或是未分化的血管周細(xì)胞。Al-Attar等[34]認(rèn)為綿羊痘細(xì)胞類似于單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞或成纖維細(xì)胞。本研究認(rèn)為，綿羊痘細(xì)胞是SPV病毒感染單核-巨噬細(xì)胞進(jìn)一步變化形成的特有形態(tài)。SPV在復(fù)制過(guò)程中引起病羊機(jī)體全身性的單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)活化，單核-巨噬細(xì)胞進(jìn)行非特異性細(xì)胞免疫和輔助激活特異性免疫系統(tǒng)，而綿羊痘細(xì)胞胞質(zhì)中嗜酸性包涵體也是SPV大量復(fù)制的證據(jù)。由于綿羊痘病毒是以細(xì)胞質(zhì)為DNA復(fù)制起點(diǎn)的病毒，因此，其包涵體的形成則應(yīng)該位于細(xì)胞質(zhì)中。本研究從組織病理到超微病理都均有發(fā)現(xiàn)，綿羊痘細(xì)胞內(nèi)的包涵體也都位于細(xì)胞質(zhì)中。目前，關(guān)于細(xì)胞內(nèi)的包涵體，有學(xué)者認(rèn)為是病毒成分的蓄積；也有學(xué)者認(rèn)為是病毒粒子合成裝配的場(chǎng)所或發(fā)育部位。SPV的遺傳物質(zhì)DNA是在細(xì)胞質(zhì)中復(fù)制，因此，在SPV感染中細(xì)胞中，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)包涵體應(yīng)為病毒合成裝配的場(chǎng)所或發(fā)育部位。至于綿羊痘細(xì)胞的產(chǎn)生、分化、增殖等機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。

4 結(jié) 論

結(jié)合ELISA和PCR檢測(cè)結(jié)果，證明本次甘肅省景泰縣羊場(chǎng)小尾寒羊疫情是由SPV引起的綿羊痘。除局部皮膚病變外，消化道黏膜和肺等實(shí)質(zhì)器官的痘疹病變是小尾寒羊綿羊痘具有代表性的病理變化，尤其痘疹病灶中大量綿羊痘細(xì)胞的出現(xiàn)具有重要證病性。