冷誘導RNA結合蛋白與冠心病病人冠狀動脈狹窄程度的相關性

潘穎，戴力

作者單位：靈寶市第一人民醫院心內科，河南 三門峽472500

冠狀動脈粥樣硬化性心臟病，即冠心病，是最常見的心臟疾病，其發病率穩步上升，是現代社會導致死亡的主要原因。冠狀動脈（冠脈）造影是診斷冠心病的金標準，但是由于存在創傷較大、并發癥較多、射線防護困難、費用高昂等缺陷，仍需要一些更簡單有效的生物標志物來預測。冷誘導RNA結 合 蛋 白（cold-inducible RNA-binding protein，CIRP）是一種保守的RNA 結合蛋白，參與多種mRNA 的轉錄后調控，可在低溫、低氧、化學物質等應激環境中誘導表達。近年研究發現，CIRP 可促進炎性因子的釋放，在腹主動脈瘤、結腸炎等疾病中發揮重要的病理作用。CIRP 的促炎效應可能也參與冠心病的發生發展，與冠脈狹窄程度有關，但是國內外尚無報道。因此，本研究旨在探討血清中CIRP 水平與冠心病病人冠狀動脈狹窄程度的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018 年3月至2019 年12 月靈寶市第一人民醫院冠脈造影確診為冠心病196 例。參照文獻報道，根據Gensini評分分為3組，即輕度組（＜18分）、中度組（18 ～41分）、重度組（≥41分），分別為52、41、103 例。排除標準：（1）心臟瓣膜病、心肌病、肺源性心臟病等其他心臟疾病；（2）既往行經皮冠狀動脈介入治療術或冠狀動脈旁路移植術；（3）妊娠或哺乳期婦女；（4）嚴重的肝腎功能障礙；（5）合并動脈瘤、甲狀腺或腎上腺功能異常、血液系統疾病、急慢性感染、免疫系統疾病、腫瘤等疾病。所有病人或其近親屬已簽署知情同意書。本研究符合《世界醫學協會赫爾辛基宣言》相關要求。

1.2 方法

1.2.1 基線臨床資料的收集 所有病人均于入院后收集各項臨床資料，包括年齡、性別、體質量、身高、心率、收縮壓、舒張壓、高血壓與糖尿病病史等。次日清晨采集空腹靜脈血，由檢驗科采用全自動生化分析儀測定各項生化指標，包括總膽固醇（total cholesterol，TC）、三酰甘油（triglyceride，TG）、低密度脂蛋白膽固醇（low-density lipoprotein-cholesterol，LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（high-density lipoprotein-cholesterol，HDL-C）、載脂蛋白A、載脂蛋白B、超敏C 反應蛋白（high-sensitivity C-reaction protein，hs-CRP）、空腹血糖、血肌酐、血尿素氮。采用超聲心動圖測定左心室舒張末期內徑（left ventricular end-diastolic dimension，LVEDd）、左心室射血分數（left ventricular ejection fraction，LVEF）。

1.2.2 血清中CIRP 水平與炎性因子含量的測定 采集3 mL空腹靜脈血，3 000 r/min離心20 min，分離血清。采用酶聯免疫吸附試驗測定血清中CIRP 水平、白細胞介素-1β（Interleukin-1β，IL-1β）、白細胞介素-6（Interleukin-6，IL-6）、腫瘤壞死因子-α（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）含量。試劑盒由江蘇晶美生物科技有限公司提供。

1.2.3 冠脈造影與Gensini 評分 經橈動脈或股動脈途徑行冠脈造影，由2 名專業醫師對冠脈病變情況進行評估。采用Gensini 評分標準定量評價冠脈狹窄程度，各冠脈分支Gensini評分=單支冠脈狹窄程度積分×該支冠脈系數，最后總的冠脈Gensini評分為各分支評分之和。冠脈狹窄程度積分：狹窄程度≤25%記為1 分，26%～50%記為2 分，51%～75%記為4 分，76%～90%記為8 分，91%～99%記為16 分，100%記為32 分。冠脈系數：左主干為5；左前降支近段為2.5，中段為1.5，遠段為1；第一對角支為1，第二對角支為0.5；左回旋支近段為2.5，中段和遠段均為1；鈍緣支為1；右冠脈近、中、遠段和后降支均為1。

1.3 統計學方法

采用SPSS 19.0 軟件進行統計學處理。定性資料采用病人例數進行表示，χ檢驗比較組間差異。定量資料均符合正態分布，采用x ± s表示，單因素方差分析比較多組間差異，組內兩兩比較采用LSD-t 檢驗。采用Pearson 法分析CIRP 水平與各炎性因子含量的相關性。采用有序多分類logistic回歸模型分析冠脈狹窄程度的獨立危險因素。采用ROC 工作曲線分析CIRP 水平對重度冠脈狹窄的診斷價值。當P ＜0.05時認為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 3

組病人基線臨床資料的比較 3 組病人TC、TG、LDL-C、HDL-C、hs-CRP、LVEDd、LVEF 比較，差異有統計學意義（P ＜0.05），其余指標比較均差異無統計學意義（P ＞0.05）。見表1。

2.2 血清中CIRP及炎性因子含量的檢測

與輕度組和中度組相比較，重度組血清中CIRP、IL-1β、IL-6、TNF-α 含量升高，差異有統計學意義（P ＜0.05）。見表2。

2.3 CIRP水平與各炎性因子含量的相關性

相關分析結果顯示，CIRP 水平與IL-1β（r = 0.785，P ＜0.001）、IL-6（r=0.736，P ＜0.001）、TNF-α（r=0.739，P ＜0.001）含量呈正相關，均差異有統計學意義。見圖1。

表2 冠心病196例血清中CIRP及炎性因子含量比較/（ng/L，x ± s）

2.4 冠脈狹窄程度的獨立危險因素

將CIRP 及2.1 中差異有統計學意義的因素納入多因素logistic回歸 分析，結 果 顯 示CIRP（OR = 1.242，95%CI：1.134～1.361，P ＜ 0.001）、hs-CRP（OR = 1.774，95%CI：1.372～2.293，P ＜0.001）是冠脈狹窄程度的獨立危險因素，HDL-C（OR = 0.012，95%CI：0.000～0.493，P=0.020）是保護性因素，均差異有統計學意義。見表3。

表1 冠心病196例基線臨床資料的比較

圖1 冷誘導RNA結合蛋白（CIRP）水平與各炎性因子含量的相關性

表3 有序多分類logistic回歸模型分析冠脈狹窄程度的獨立危險因素

2.5 CIRP水平對重度冠脈狹窄的診斷價值

采用ROC工作曲線評價CIRP水平對重度冠脈狹窄（Gensini 評分≥41 分）的診斷效能，結果顯示ROC 曲線下面積為0.972（95%CI：0.954～0.991，P ＜0.001），以血清CIRP水平＞110.70 ng/L作為截斷值時，對重度冠脈狹窄的診斷敏感度為0.854，特異度為0.968。見圖2。

圖2 ROC工作曲線分析冷誘導RNA結合蛋白（CIRP）水平對重度冠脈狹窄的診斷價值

3 討論

CIRP 最初是在篩查紫外線誘導轉錄因子的過程中發現，后來被認為是哺乳動物中的第一個冷休克蛋白，屬于富含甘氨酸蛋白家族，氨基末端含有一個RNA 識別與結合域，羧基末端含有一個富含甘氨酸與精氨酸結構域。隨后的研究表明，CIRP在包括心臟在內的不同組織中表達，而且可在各種細胞

應激中響應，如低溫、缺氧，紫外線照射、氧化、高滲、熱休克、內質網應激等。在應激條件下，CIRP的表達水平和定位發生改變，可從細胞核向細胞質轉移，在各種應激中發揮保護作用。除了緩解應激壓力，CIRP還參與細胞增殖、組織發育、晝夜節律調節以及腫瘤的形成和發展。此外，CIRP還可以釋放到細胞外基質與血液循環系統，作為一種損傷相關分子模式誘導促炎因子表達，參與急慢性炎癥疾病的病理過程。

考慮到CIRP 在細胞過程和疾病狀態中的多重作用，我們推測CIRP 可能參與冠心病的發生發展。因此，本研究對CIRP在冠心病病人中的水平進行檢測，發現隨著冠脈狹窄程度的加重，血清CIRP 水平也明顯升高。通過多因素logistic 回歸分析，進一步確定CIRP是冠脈狹窄程度的獨立危險因素。此外，hs-CRP 也作為危險性因素被篩選出來，HDL-C 則是保護性因素，與其他文獻報道相一致。但是，LDL-C 納入模型后卻無顯著性差異，有研究報道LDL-C、HDL-C 在納入logistic 回歸模型后均無顯著性差異，本研究認為該結果的不一致可能與納入因素的不同有關。此外，LDL-C/HDL-C 可能較兩單獨指標更具有穩定性，其應用價值仍有待探討。ROC 工作曲線結果顯示，CIRP 具有較好的診斷效能，以血清CIRP 水平＞110.70 ng/L 作為截斷值時，對重度冠脈狹窄的診斷敏感度和特異度分別為0.854、0.968，為未來的臨床應用提供了具體的參考數值。

冠心病是由基因、環境等多種因素共同引起的復雜異質性疾病，其發病機制尚未明確，與炎癥、動脈粥樣硬化斑塊中新血管形成、血小板活化等多種病理過程有關。近年來，冠心病被認為是一種慢性炎癥性疾病，炎癥細胞可被募集至受損的血管系統，分泌炎癥介質，促進斑塊形成，導致心肌細胞缺血缺氧，甚至壞死。本研究結果顯示，重度組病人血清中IL-1β、IL-6、TNF-α 含量顯著高于輕度組和中度組，證實了炎癥反應在冠脈狹窄程度中的病理作用。CIRP在炎癥反應中發揮重要的調節作用，如Qiang 等采用CIRP 重組蛋白刺激巨噬細胞，可促進TNF-α 和高遷移率族蛋白1 大量釋放，并在體內注射時引起炎癥反應，導致嚴重的組織損傷；Zhou 等發現CIRP 在敗血癥病人的外周血含量明顯升高，可作為預后預測的獨立危險因素；Sakurai等發現CIRP通過調節TNF-α和IL-23的產生來促進腸道炎癥和結直腸腫瘤的發展。本文對CIRP 水平與各炎性因子含量進行Pearson相關分析，結果顯示CIRP水平與IL-1β、IL-6、TNF-α含量均呈正相關，表明CIRP 可能通過炎癥反應促進冠脈狹窄。上述結果提示，CIRP可能是炎性因子表達上調的重要上游分子，其作用機制可能與細胞表明Toll 樣受體4結合，激活下游NF-κB信號通路有關。

本研究的不足與展望：（1）本研究屬于單中心臨床研究，未來若能實施多中心研究，將為本文結論提供更多的證據支持；（2）未對CIRP 在冠脈狹窄中的作用機制進行深入探討，下一步需要在體外細胞模型與體內動物模型中，通過RNA 干擾或敲基因等方法探討CIRP 的上下游調控機制，為CIRP 的應用提供堅實的理論依據；（3）CIRP 對冠心病病人遠期預后的影響仍有待研究。

綜上所述，血清中CIRP水平與炎性因子含量呈正相關，與冠狀動脈狹窄程度密切相關，有較好的預測與診斷價值。