外周血SFRP1、SAA檢測在早期糖尿病腎病診斷中的價(jià)值

何 霽，孫 娜，袁 寧，白亞君，黃秋鵬

南充市中心醫(yī)院內(nèi)分泌科，四川南充 637000

糖尿病腎病(DN)是糖尿病最為嚴(yán)重的并發(fā)癥之一，該病本身屬于微血管病變，隨著病情不斷地發(fā)展，該病最終將發(fā)展為終末期腎病，預(yù)后極差。DN的發(fā)生及發(fā)展過程緩慢，早期不易被確診，待患者出現(xiàn)持續(xù)性蛋白尿等典型癥狀時(shí)，該病已發(fā)展至晚期，病情常常難以逆轉(zhuǎn)。早期及時(shí)診斷DN并采取針對性治療，對于改善患者預(yù)后有重要意義[1]。目前，DN的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，但有研究表明，其與遺傳、糖脂代謝紊亂、氧化應(yīng)激、炎癥介質(zhì)等多種因素有關(guān)。有多種血清標(biāo)志物已經(jīng)被用于DN的診斷，其中分泌型卷曲相關(guān)蛋白(SFRP)是一類能直接結(jié)合Wnt的拮抗物，多種癌癥患者外周血中SFRP1水平異常。有研究證實(shí)，SFRP1參與了腎纖維化進(jìn)程，推測該物質(zhì)在DN發(fā)病及病情發(fā)展中起作用[2]。淀粉樣蛋白-A(SAA)在多種慢性炎性疾病中扮演重要角色，是一種與血漿高密度脂蛋白相結(jié)合的急性時(shí)相蛋白，SAA在癌細(xì)胞侵襲或轉(zhuǎn)移過程中起重要作用。由于DN發(fā)展與機(jī)體炎性反應(yīng)相關(guān)，推測SAA可能參與DN病情發(fā)展[3]。為研究DN患者SFRP1與SAA水平，并分析兩種物質(zhì)在DN早期診斷中的應(yīng)用價(jià)值，本課題組開展了以下研究。

1 資料與方法

1.1一般資料 將本院2016年1月至2018年6月收治的144例2型糖尿病(T2DM)患者納入研究；另外，將同期50例健康體檢者納入研究作為對照組。納入的研究的T2DM患者均符合WHO糖尿病的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]：空腹血糖(FBG)≥7.0 mmol/L或口服葡萄糖耐受試驗(yàn)(OGTT)2 h血糖≥11.1 mmol/L或隨機(jī)血糖≥11.1 mol/L；對照組為體檢合格的健康人群。排除合并急慢性感染者、惡性腫瘤者、心功能不全者、合并其他內(nèi)分泌疾病者。根據(jù)T2DM患者的尿清蛋白排泄率(UAER)，將其分為單純T2DM組(尿蛋白正常，UAER<22 μg/min，57例)、DN1組(微量尿蛋白，UAER:22～220 μg/min，53例)、DN2組(臨床蛋白尿，UAER>220 μg/min，34例)。

1.2方法 (1)收集被研究者的臨床資料，包括性別、年齡、糖尿病病程、體質(zhì)量指數(shù)(BMI)。(2)臨床生化指標(biāo)的檢測：禁食10 h后，采集被研究者空腹靜脈血5 mL，檢測FBG、空腹胰島素(FINS)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)水平。(3)胰島素抵抗評價(jià)采用穩(wěn)態(tài)模型評價(jià)(HOMA)計(jì)算胰島素抵抗(IR)指數(shù)(HOMA-IR)，計(jì)算公式:HOMA-IR=FBG×FINS/22.5。(4)SFRP1及SAA水平檢測：被研究者禁食10 h后，使用無抗凝劑的無菌離心管收集肘部靜脈血5 mL，室溫靜置30 min，3 000 r/min離心15 min，分離血清，存于EP管中，-70 ℃保存待用，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測血清SFRP1及SAA水平，試劑盒分別購于美國R&D公司與Bioswamp公司。

1.3觀察指標(biāo) (1)4組人群的臨床資料、臨床生化指標(biāo)、HOMA-IR及SFRP1、SAA水平。(2)分別分析SFRP1及SAA與其他因素間的相關(guān)性。(3)繪制受試者工作特征曲線(ROC曲線)，分析SFRP1與SAA在診斷早期DN中的價(jià)值。

2 結(jié) 果

2.14組間臨床資料及臨床生化指標(biāo)水平的比較 4組間糖尿病病程、BMI、FBG、FINS、HbA1c、HDL、LDL、TG及HOMA-IR比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。對照組，男27例、女23例；T2DM組男33例、女24例；DN1組，男30例、女23例；DN2組，男19例、女15例。4組間性別比例、年齡、TC水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 4組間臨床資料及臨床生化指標(biāo)的比較

2.24組間SFRP1及SAA水平的比較 SFRP1及SAA水平在對照組、單純T2DM組、DN1組及DN2組呈依次上升的趨勢，組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 4組間SFRP1及SAA水平的比較

2.3DN患者SFRP1水平與其余因素的相關(guān)性分析 DN患者SFRP1水平與FBG、HOMA-IR、HbA1c及TG水平均呈正相關(guān)(r=0.563、0.619、0.412、0.441，P<0.05)。

2.4DN患者SAA水平與其余因素的相關(guān)性分析 DN患者外周血SAA水平與糖尿病病程、FBG、HOMA-IR及HbA1c水平均呈正相關(guān)(r=0.442、0.352、0.251、0.339，P<0.05)。

2.5SFRP1及SAA在診斷早期DN中的價(jià)值分析 繪制ROC曲線，SFRP1及SAA單獨(dú)應(yīng)用于DN診斷的效能以SFRP1更高，兩者聯(lián)合應(yīng)用能提高診斷效能，見表3、圖1。

表3 SFRP1及SAA在診斷早期DN中的價(jià)值分析

圖1 SFRP1與SAA診斷DN的ROC曲線

3 討 論

隨著我國經(jīng)濟(jì)水平及生活水平的不斷提高，人們的血脂代謝紊亂情況加重，糖尿病患者增多，糖尿病相關(guān)并發(fā)癥的發(fā)病率也增高[5-6]。DN是糖尿病最為嚴(yán)重的并發(fā)癥之一，是導(dǎo)致終末期腎衰竭和糖尿病患者死亡的主要病因[7-8]。及時(shí)有效地診斷DN，對于阻止疾病進(jìn)展，改善患者預(yù)后有重要作用。本研究發(fā)現(xiàn)，隨著DN程度的加重，患者糖尿病病程、BMI、FBG、FINS、HbA1c、HDL、LDL、TG及HOMA-IR水平均有相應(yīng)改變；此外，隨著UAER的增加，患者外周血SFRP1及SAA水平也發(fā)生明顯改變，且DN患者SFRP1及SAA水平與FBG、HOMA-IR、HbA1c水平存在正相關(guān)性，提示外周血FSRP1及SAA水平可能在DN的早期診斷中有一定價(jià)值。

DN的發(fā)生發(fā)展過程緩慢，且與遺傳、糖脂代謝、血流動(dòng)力學(xué)、氧化應(yīng)激及炎性反應(yīng)等多種因素相關(guān)[9-10]。DN的早期確診難度較大，但某些血清標(biāo)志物能有效提示DN病程，在診斷DN中具有較高的應(yīng)用價(jià)值。有學(xué)者通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，DN大鼠腎組織中SFRP1蛋白表達(dá)量上升，腎細(xì)胞癌組織中SFRP1水平也上升，SFRP1可能與腎組織纖維化進(jìn)程密切相關(guān)[11-12]。這提示SFRP1可能參與DN發(fā)生、發(fā)展。本研究發(fā)現(xiàn)，對照組、單純T2DM組、DN1組及DN2組血清SFRP1水平呈依次上升趨勢，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與上述研究結(jié)論相似。

有研究發(fā)現(xiàn)，Wnt信號通路參與了多種器官纖維化進(jìn)程，而分泌型卷曲相關(guān)蛋白家族(SFRPs)屬于分泌型糖蛋白家族，是Wnt通路的拮抗劑，SFRPs蛋白與Wnt蛋白相結(jié)合可阻斷Wnt配體與其他受體結(jié)合，進(jìn)而參與腎纖維化病變。有研究發(fā)現(xiàn)，腎小管間質(zhì)中SFRP1表達(dá)的上調(diào)能抑制β-Catenin上調(diào)，發(fā)揮對腎臟的保護(hù)作用，抑制腎組織纖維化，并提出SFRP1對Wnt的調(diào)控活動(dòng)可能與SFRP2的共同作用有關(guān)，低密度脂蛋白與Wnt抑制因子-1可與SFRP協(xié)同作用，共同調(diào)控Wnt通路[13]。本研究發(fā)現(xiàn)，隨著患者UAER的增加，其SFRP1水平呈上升趨勢，相關(guān)性分析提示，DN患者SFRP1水平與FBG、HOMA-IR、HbA1c及TG水平均呈正相關(guān)，提示SFRP1水平的上升可能加重患者糖尿病病情，進(jìn)而導(dǎo)致DN的發(fā)生。繪制ROC曲線發(fā)現(xiàn)，當(dāng)血清SFRP1水平超過70.13 pg/L時(shí)，診斷DN的AUC為0.808，靈敏度及特異度分別為69.13%和73.26%，提示其用于診斷早期DN具有一定效能。

SAA是組織淀粉樣蛋白A的前體物質(zhì)，在機(jī)體受炎癥刺激后其血清水平急速上升，該物質(zhì)參與脂質(zhì)代謝與運(yùn)轉(zhuǎn)、趨化炎癥細(xì)胞等生理反應(yīng)[14]。有研究發(fā)現(xiàn)，SAA在多種慢性炎癥性疾病的病理過程中發(fā)揮功能，已證實(shí)其參與了動(dòng)脈粥樣硬化、淀粉樣變性及血栓形成的病理過程。作為促炎性脂肪細(xì)胞因子，SAA在DN的發(fā)生、發(fā)展中也扮演著重要角色[15]。而DN患者腎臟組織中存在巨噬細(xì)胞浸潤現(xiàn)象，巨噬細(xì)胞產(chǎn)物能進(jìn)一步促進(jìn)炎癥，炎性反應(yīng)發(fā)生的同時(shí)會(huì)聯(lián)合免疫反應(yīng)共同加重DN病情，故炎性反應(yīng)在加重DN病情中也發(fā)揮作用。本研究發(fā)現(xiàn)，對照組、單純T2DM組、DN1組、DN2組患者血清SAA水平差異明顯，DN1、DN2組SAA水平明顯高于對照組及單純T2DM組，且隨著DN病程的加重，患者血清SAA水平不斷上升。相關(guān)性分析提示，DN患者外周血SAA水平與糖尿病病程、FBG、HOMA-IR及HbA1c水平呈正相關(guān)。繪制的ROC曲線提示，當(dāng)外周血SAA水平超過398.46 μg/L時(shí)，其診斷DN的效能較高，AUC達(dá)到0.733。外周血SFRP1、SAA水平聯(lián)合檢測能有效提高DN的診斷的效能，AUC為0.879，靈敏度及特異度分別為88.43%和41.55%。本研究樣本量過小，需加大研究樣本量；另外，本研究未能對SFRP1及SAA在DN進(jìn)程中的具體作用機(jī)制進(jìn)行探討，需要開展動(dòng)物實(shí)驗(yàn)來進(jìn)一步研究。

綜上所述，DN患者血糖代謝紊亂及胰島素抵抗情況更為嚴(yán)重，且患者SFRP1及SAA水平均異常升高。相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，SFRP1及SAA水平與FBG、HOMA-IR及HbA1c等指標(biāo)呈明顯正相關(guān)，提示SFRP1、SAA水平能判斷患者病情嚴(yán)重程度。繪制ROC曲線發(fā)現(xiàn)，兩者在診斷早期DN中均具有一定的應(yīng)用價(jià)值，可作為篩查早期DN的血清標(biāo)志物，但本文未對比不同血糖水平、脂質(zhì)代謝紊亂程度、氧化應(yīng)激程度患者的SFRP1及SAA水平，且研究樣本過小，為增強(qiáng)研究結(jié)論的準(zhǔn)確性，應(yīng)在后續(xù)研究中進(jìn)一步完善。