三氧化二砷聚乳酸納米粒的制備及在大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)

王琪，耿雪，徐世一，蘇慧，李雪瑩，郝若祎，霍元子,閻雪瑩

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

三氧化二砷(As2O3，ATO)為白色霜狀粉末，故稱“砒霜”，是中藥砷的有效成分，自2000年ATO被批準(zhǔn)作為治療急性早幼粒細(xì)胞白血病的一線藥物以來，其對(duì)各種惡性腫瘤的抗癌作用一直是人們研究的熱點(diǎn)[1-3]。然而，由于其藥代動(dòng)力學(xué)差，半衰期短，給藥后消除迅速[4]，還有劑量限制不良反應(yīng)，使它在體內(nèi)對(duì)實(shí)體瘤的作用受到限制[5]。為了改善三氧化二砷的藥代動(dòng)力學(xué)，避免ATO的毒性和副作用，增強(qiáng)其抗腫瘤作用，許多新型的As2O3藥物制劑也受到了廣泛的關(guān)注[6]。

近年來，納米技術(shù)于藥物載體的應(yīng)用，大大提高了難溶藥物的溶解度；對(duì)載體材料表面功能化，使這類載體制備的制劑具有高效低毒的優(yōu)點(diǎn)[7]。目前，許多納米粒子(NPs)正在進(jìn)行藥物釋放研究，包括用于癌癥治療的藥物釋放研究[8]。聚乳酸(PLA)是多個(gè)乳酸分子之間的羥基和羧基脫水聚合形成的高分子聚合物，可生物降解，其降解反應(yīng)容易發(fā)生，最終降解產(chǎn)物為H2O和CO2，隨代謝排出體外，不會(huì)對(duì)機(jī)體產(chǎn)生任何傷害。且作為藥物載體材料，聚乳酸可提高藥物的溶解度和生物利用度，還具有靶向作用[9]。聚乙二醇(polyethylene glycol, PEG)由于分子中含有大量乙氧基，能夠與水形成氫鍵，因而具有良好的親水性，經(jīng)聚乙二醇修飾的藥物分子可明顯增加水溶性。聚乳酸經(jīng)聚乙二醇修進(jìn)入人體后，毒副反應(yīng)更小、且能有效逃避免疫防御系統(tǒng)的吞嚼作用，使聚乳酸成為優(yōu)良的藥物載體材料[10]。

本研究以As2O3為模型藥物，以聚乳酸、聚乙二醇修飾的聚乳酸為載體材料制成納米粒，對(duì)粒徑分布、Zeta 電位、體外釋藥等進(jìn)行研究。比較游離狀態(tài)和不同載體狀態(tài)下的As2O3體內(nèi)藥動(dòng)過程。為As2O3新型遞藥系統(tǒng)的構(gòu)建及其在腫瘤治療中的應(yīng)用提供參考。

1 材料

1.1 儀器

原子吸收光譜儀(德國(guó)耶拿分析儀器股份公司，novAA400p)；氬氣鋼瓶；超聲波細(xì)胞破碎機(jī)(寧波新芝生物科技股份有限公司，Scientz-IID)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海申勝生物技術(shù)有限公司，R-205B)；數(shù)控恒溫水浴鍋(上海申勝生物技術(shù)有限公司，W202B)；pH計(jì)(DELTA320，梅特勒-托利多儀器上海有限公司)；納米粒度及Zeta電位分析儀(Zetasizer Nano-ZS90，馬爾文儀器有限公司)；數(shù)控超聲波清洗器(KQ5200DB，昆山市超聲儀器有限公司)；數(shù)顯恒溫磁力攪拌器(HJ-6A，金壇市榮華儀器制造有限公司)；恒溫水浴振蕩器(哈爾濱市東聯(lián)電子技術(shù)開發(fā)有限公司，HZS-HA型)；分析天平(Sartorius BT25S，德國(guó)Sartorius公司)；數(shù)控超聲波清洗器(KQ5200DB，昆山市超聲儀器有限公司)；2K系列實(shí)驗(yàn)室冷凍干燥機(jī)(美國(guó)Virtis公司)；智能型獨(dú)立通氣大鼠IVC 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物凈化籠具(蘇州市蘇杭科技器材有限公司)；Allegra 64R型高速冷凍離心機(jī)(美國(guó)Beckman 公司)；EHD型智能電熱消解儀(北京萊伯泰科儀器有限公司)。

1.2 藥品與試劑

砷單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液(樣品編號(hào)：12071，中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院)；三氧化二砷(批號(hào)：548CC888720，Merck Parmstadt)；Poloxamer 188 (上海協(xié)泰化工有限公司)；聚乳酸(PLA，M=15000，15011603，濟(jì)南岱罡生物工程有限公司)；mPEG-聚乳酸(mPEG-PLA，MPEG=3500，15062303，濟(jì)南岱罡生物工程有限公司)；透析袋(MW：8000-14400，美國(guó)Sigma公司)；實(shí)驗(yàn)用水為去離子水；鹽酸、抗壞血酸、硫脲為優(yōu)級(jí)純，其他試劑均為分析純。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SD大鼠56只，雌雄各半，體質(zhì)量(200±20)g，黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)GLP實(shí)驗(yàn)室提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 三氧化二砷聚乳酸納米粒包封率的測(cè)定方法

2.1.1 儀器工作條件的選擇

參考文獻(xiàn)[11]確定。電燈流：10.0 mA;光譜通帶：0.5 nm;波長(zhǎng)：193.7 nm;空氣流量：13.50 L/min;乙炔流量：2.00 L/min;還原劑：1%硼氫化鈉和0.3%氫氧化鈉溶液(臨用現(xiàn)配);載液：鹽酸(5→100)溶液;載氣：氬氣(分壓為0.3 MPa);背景校正：氚氣。

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

砷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液濃度為1 000 μg/mL，將其以5% HCl逐級(jí)稀釋成濃度為0.10 μg/mL的砷標(biāo)準(zhǔn)工作液，精密吸取0.10、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mL于10 mL容量瓶中，加入5 %硫脲-抗壞血酸溶液1.0 mL，以5%鹽酸定容至刻度線，混勻，使砷濃度為1.00、10.00、20.00、30.00、40.00、50.00 μg/L，測(cè)定其吸光值，結(jié)果扣除空白溶液的吸光值。以砷濃度C (μg/L)為橫坐標(biāo)，扣除空白吸光值后不同濃度砷的吸光值A(chǔ)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得到砷的線性回歸方程為：Y=0.085 6X+0.630 7，相關(guān)系數(shù)為R2=0.999 7。結(jié)果表明：砷對(duì)照品濃度在1.0～50.00 μg/L范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

2.1.3 包封率和載藥量

分別精密吸取As2O3-PLA-NPs、As2O3-mPEG-PLA-NPs分散液1.00 mL，裝入處理后的透析袋中，扎緊袋口，置于透析外液為200.0 mL雙蒸水的燒杯中。將燒杯放入水浴振蕩器中，室溫、恒速(100 rmp)動(dòng)態(tài)透析，在420 min時(shí)，精密吸取透析外液2.0 mL進(jìn)行測(cè)定分析，測(cè)定計(jì)算納米粒溶液中游離的As2O3量為W游，投入的As2O3為W總，同法重復(fù)3次。包封率、載藥量計(jì)算公式如下：

ER (%) = (W總-W游) / W總×100 %

DL (%)= (W總-W游) / WP×100 %

公式中，ER:包封率；DL:載藥量；W總:總藥量；W游:游離藥量；Wp:載體重量。

2.2 納米粒制備工藝優(yōu)化

2.2.1 納米粒的制備工藝

2.2.1.1 As2O3-PLA-NPs的制備工藝

采用復(fù)乳溶劑揮發(fā)法制備納米粒，精密稱量PLA 40.00 mg，加入1.50 mL乙酸乙酯(與水相比例為1∶4)，超聲至完全溶解。精密吸取濃度為10.00 mg/mL的As2O3溶液100.00 μL，100 W超聲60 s(超聲2 s，間歇2 s)，將初乳加入到6.00 mL含6%吐溫20的外水相中，80 W冰浴超聲60 s(超聲2 s，間歇2 s)形成復(fù)乳，以旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)法除去有機(jī)溶劑，以去離子水轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，定容至刻度線，即為最終樣品。

2.2.1.2 As2O3-mPEG-PLA-NPs的制備工藝

采用“2.2.1.1”上述制備方法，精密稱量mPEG-PLA 40.00 mg，加入2.50 mL乙酸乙酯(與水相比例為1∶3)，超聲至完全溶解。精密吸取濃度為10.00 mg/mL的As2O3溶液100.0 μL，100 W超聲60 s(超聲2 s，間歇2 s)，將初乳加入到6.00 mL含3 %吐溫20的外水相中，80 W冰浴超聲60 s(超聲2 s，間歇2 s)形成復(fù)乳，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)法除去有機(jī)溶劑，以去離子水轉(zhuǎn)移至25.00 mL容量瓶中，定容至刻度線，即為最終樣品。

2.2.2 正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化制備工藝

2.2.2.1 As2O3-PLA-NPs正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化制備工藝

結(jié)合前期As2O3-PLA-NPs單因素考察的結(jié)果綜合來看，PLA的量( A )、As2O3的量(B)、Tween20的濃度(C)和有機(jī)相與水相的比例(D)為主要影響因素。各因素設(shè)計(jì)3個(gè)不同水平，以包封率為主要評(píng)價(jià)指標(biāo),按L9(34)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表安排實(shí)驗(yàn)，篩選最優(yōu)處方和制備工藝。因素水平和實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)見表1。

表1 As2O3-PLA-NPs正交設(shè)計(jì)結(jié)果(n=3)

根據(jù)表1中極差值Rj和方差分析(表2)可知，各因素影響的主次順序是B>C>A>D可以得出最優(yōu)處方組合為：A3B3C3D2。即PLA為40.00 mg， As2O3為3.00 mg，吐溫20濃度為6 %，有機(jī)相為1.50 mL，且與水相比例為1:4。按照優(yōu)化后的處方工藝制備3批As2O3-PLA-NPs，結(jié)果顯示，平均包封率為91.75%，RSD=0.38%，重現(xiàn)性良好。

表2 As2O3-PLA-NPs方差分析結(jié)果

2.2.2.2 As2O3-mPEG-PLA-NPs正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化制備工藝

結(jié)合前期As2O3-mPEG-PLA-NPs單因素考察的結(jié)果綜合來看，mPEG-PLA的量(A)、As2O3的量(B)、Tween20的濃度(C)和有機(jī)相與水相的比例(D)為主要影響因素。各因素設(shè)計(jì)3個(gè)不同水平，以包封率為主要評(píng)價(jià)指標(biāo)按L9(34)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表安排實(shí)驗(yàn)，篩選最優(yōu)處方和制備工藝。因素水平和實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)見表3。

表3 As2O3-mPEG-PLA-NPs正交設(shè)計(jì)結(jié)果(n=3)

根據(jù)表3中極差值Rj和方差分析(表4)可知，各因素影響的主次順序是A>D>B>C可以得出最優(yōu)處方組合為：A3B3C2D1。即mPEG-PLA:40.00 mg；As2O3：3.00 mg；吐溫20濃度為3%；有機(jī)相為2.50 mL，且與水相比例為1:3。按照優(yōu)化后的處方工藝制備3批As2O3-PLA-NPs，結(jié)果顯示，平均包封率為86.32%，RSD=0.54%，重現(xiàn)性良好。

表4 As2O3-mPEG-PLA-NPs方差分析結(jié)果

2.3 三氧化二砷納米粒凍干工藝研究

制得的納米粒子溶液采用4 ℃的低溫離心(1 000 rpm)5 min，沉淀用去離子水反復(fù)洗滌，除去游離藥物，所得納米粒沉淀用2 mL去離子水再分散。分別考察以5%乳糖、海藻糖、甘露糖、蔗糖為凍干保護(hù)劑及不加凍干保護(hù)劑的凍干樣品的質(zhì)量。其中納米粒子分散液按體積比1:1加入凍干保護(hù)劑溶液。結(jié)果顯示，As2O3-PLA-NPs和As2O3- mPEG-PLA-NPs均以5%甘露醇(w/v)凍干后的質(zhì)量最理想，肉眼觀察均為白色、疏松的固體，表面光潔細(xì)膩，振搖后能整塊脫落。

2.4 三氧化二砷納米粒基本性質(zhì)

2.4.1 載藥量、外觀、粒徑分布及Zeta電位

按照“2.1.3”項(xiàng)下測(cè)定方法，測(cè)得As2O3-PLA-NPs和As2O3-mPEG-PLA-NPs的平均載藥量為6.88%(RSD=0.36%)和6.47%(RSD=0.62%)。取兩種三氧化二砷納米粒凍干品適量，加水輕微振搖分散，稀釋后滴加在超薄碳膜上，在透射電鏡下觀察粒子形態(tài)并拍攝照片(圖1)。結(jié)果表明，納米粒子呈現(xiàn)較均勻圓形，分散性良好。采用粒徑分析儀測(cè)定三氧化二砷納米粒粒徑和Zeta電位(圖2)。測(cè)定結(jié)果顯示，As2O3-PLA-NPs、As2O3-mPEG-PLA-NPs平均粒徑為(133.20±5)nm、(123.40±6)nm；Zeta電位為-7.11 mV、-6.7 mV。

2.4.2 三氧化二砷聚乳酸納米粒體外釋藥行為

取適量?jī)龈煞?相當(dāng)于0.40 mg As2O3)，加2 mL去離子水，轉(zhuǎn)入已處理后的透析袋中，將袋口扎緊，放入盛有200 mL釋放介質(zhì)的燒杯中，將燒杯放到恒溫水浴振蕩器37 ℃水浴中，恒速(100 rpm )振搖。分別于0、0.25、0.5、1、2、4、6、8、10、12、24、36、48、60、72 h量取1 mL釋藥介質(zhì)，同時(shí)補(bǔ)入等量同溫空白介質(zhì)，測(cè)定各時(shí)間點(diǎn)的藥物含量，并計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)的累積釋放度，繪制體外溶出曲線見圖3。由結(jié)果可知，將三氧化二砷制備成納米粒后，體外釋藥具有明顯的緩釋釋藥特征。

圖2 As2O3-PLA-NPs和As2O3-mPEG-PLA-NPs的粒徑和Zeta電位分布

圖3 As2O3、As2O3-PLA-NPs、As2O3-mPEG-PLA-NPs凍干粉針劑體外釋放曲線(n=3)

2.4.3 釋藥模型擬合

對(duì)As2O3-PLA-NPs、As2O3-mPEG-PLA-NPs體外釋藥分別采用零級(jí)、一級(jí)、Higuchi 及 Weibull 模型進(jìn)行擬合(表5, 6)，制備的As2O3-PLA-NPs、As2O3-mPEG-PLA-NPs體外釋藥模型符合Weibull 模型。

Ln[ln(100/100-Q)]=0.334ln(t)-1.256 9(R2=0.969)

Ln[ln(100/100-Q)]=0.380 3ln(t)-1.445 8(R2=0.976 8)

表5 As2O3-PLA-NPs釋放模型和相關(guān)系數(shù)

表6 As2O3-mPEG-PLA-NPs釋放模型和相關(guān)系數(shù)

2.5 藥動(dòng)學(xué)研究

2.5.1 血漿樣品的處理

解凍凍存血樣，渦旋后離心(4 000 rpm,5 min)，精密吸取上清液100 μL置于聚四氟乙烯消解罐中，加入硝酸與高氯酸的混酸(硝酸∶高氯酸=4∶1) 1.5 mL，加蓋，室溫下放置過夜，進(jìn)行預(yù)反應(yīng)，電熱消解儀130 ℃進(jìn)行加熱消解，至冒濃煙，隨時(shí)觀察溶液顏色，待樣品冷卻至室溫，轉(zhuǎn)移至10 mL比色管中，同時(shí)加入硫脲-抗壞血酸1.0 mL，以5%鹽酸定容至刻度線，作為樣品溶液。

2.5.2 對(duì)照品溶液的配制及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

按照“2.1.2”配置砷溶液，精密吸取一系列不同濃度的砷標(biāo)準(zhǔn)溶液各100 μL，置于10 mL EP管中，精確加入100 μL的大鼠空白血漿，渦旋混勻，按照“血液樣品處理”項(xiàng)下操作配制成相當(dāng)于含砷濃度為1.00、10.00、20.00、30.00、40.00、50.00 μg/L 的標(biāo)準(zhǔn)含藥血漿，進(jìn)樣分析，以砷吸光值為縱坐標(biāo)A，以血漿中砷的藥物濃度作為橫坐標(biāo)C (μg/L)進(jìn)行線性回歸，得出線性回歸方程為Y=0.084 25X+0.307 2，相關(guān)系數(shù)r2=0.993。由相關(guān)系數(shù)r可知，在1.0～50.00 μg/L范圍內(nèi)與吸光值呈良好的線性關(guān)系。

2.5.3 方法學(xué)驗(yàn)證

配制成濃度為2.00、20.00、40.00 μg/L的質(zhì)控樣品來考察日內(nèi)精密度RSD值。結(jié)果顯示RSD值分別為7.29%，6.22%和5.37% (n=6)。考察3 d的日間精密度，3種濃度RSD值分別為2.93%，4.14%和8.04%(n=6)。取100 μL大鼠空白血漿樣品，向其中加入濃度為0.20 μg/mL、2.00 μg/mL、4.00 μg/mL的砷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，制成質(zhì)控樣品，按照“2.5.1”項(xiàng)下方法處理血漿樣品。另取100 μL大鼠空白血漿樣品，按照“2.5.1”項(xiàng)下方法處理后，再加入低、中、高3個(gè)濃度的等量的砷標(biāo)準(zhǔn)溶液，制備成標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照樣品，相同方法測(cè)定，記錄吸光值，將質(zhì)控樣品的吸光值與對(duì)照樣品的吸光值比較，計(jì)算提取回收率，結(jié)果顯示3種濃度的回收率分別為(77.26±5.33)%、(86.74±4.18)%和(80.67±6.24)%(n=3)。其中，3種濃度的 RSD值<7.16%。任取一份血漿樣品，置于-40 ℃冰箱中于24 h內(nèi)反復(fù)融凍，高效液相色譜測(cè)定血藥濃度變化。結(jié)果顯示，冰凍-溶解重復(fù)3次砷血漿樣品依然穩(wěn)定，RSD為9.2%，滿足樣品分析測(cè)定要求。

2.5.4 給藥方案及樣品采集

將SD大鼠隨機(jī)分為7組，每組8只。稱取納米粒凍干粉適量，以生理鹽水為分散介質(zhì)，配制濃度分別為6.33 mg/mL和6.67 mg/mL的As2O3-PLA-NPs，As2O3-mPEG-PLA-NPs分散液。給藥劑量如下：As2O3生理鹽水注射組(2 mg/kg)，As2O3-PLA-NPs高(3 mg/kg)、中(2 mg/kg)、低(1 mg/kg)劑量組，As2O3-mPEG-PLA-NPs高(3 mg/kg)、中(2 mg/kg)、低(1 mg/kg)劑量組。

給藥前12 h禁食，不禁水，各組稱重后，按劑量尾靜脈注射方式對(duì)大鼠進(jìn)行給藥。給藥前采集空白血樣。尾靜脈注射給藥后0.25、0.5、0.75、1、2、4、6、8、10、24、36 h，大鼠眼眶取血0.5 mL，置于裝有肝素鈉抗凝劑的離心管中，混勻，-80 ℃凍存待測(cè)。

2.5.5 房室模型的建立

分別測(cè)定As2O3-PLA-NPs高(3 mg/kg)、中(2 mg/kg)、低(1 mg/kg)劑量組和As2O3-mPEG-PLA-NPs高(3 mg/kg)、中(2 mg/kg)、低(1 mg/kg)劑量組血漿樣品血藥濃度，繪制藥動(dòng)學(xué)曲線。藥動(dòng)學(xué)曲線結(jié)果見圖4及表7。在As2O3同等劑量下，經(jīng)尾靜脈注射，比較As2O3生理鹽水組和As2O3-PLA-NPs組主要藥動(dòng)學(xué)數(shù)據(jù)，As2O3-PLA-NPs組的消除半衰期是生理鹽水組的1.52倍；藥時(shí)曲線下面積明顯增大，As2O3-PLA-NPs組AUC是生理鹽水組的1.42倍。As2O3-mPEG-PLA-NPs組的消除半衰期是生理鹽水組的2.53倍；藥時(shí)曲線下面積，As2O3-mPEG-PLA-NPs組AUC是生理鹽水組的2.20倍。藥動(dòng)學(xué)特征顯示，在相同劑量下，As2O3制成納米粒后藥物在循環(huán)系統(tǒng)中的滯留時(shí)間明顯延長(zhǎng)，清除率降低，起到一定的緩釋作用。

圖4 PLA組和mPEG-PLA組As2O3血藥濃度-時(shí)間曲線

組別MRT 0-∞(h)AUC0-24[mg/(L·h)]AUC 0-∞[mg/(L·h)]t1/2α(h)t1/2β(h)As2O3生理鹽水組13.83±2.3323 207.31±422.8824 510.01±177.421.11±0.283.25±1.09As2O3-PLA-NPs(L)17.73±1.0214 952.72±271.8817 597.82±164.651.84±0.344.86±1.16As2O3-PLA-NPs (M)29.40±2.7132 907.62±329.6147 465.37±483.222.24±0.634.93±2.11As2O3-PLA-NPs (H)21.48±2.5552 212.56±33.6764 973.25±527.742.51±0.644.82±1.04As2O3-mPEG-PLA-NPs (L)13.68±2.2619 270.23±216.54*21 224.51±334.511.47±0.557.89±1.82*As2O3-mPEG-PLA-NPs (M)17.19±4.8546 546.42±513.29#53 986.41±447.620.93±0.248.21±3.21#As2O3-mPEG-PLA-NPs (H)19.00±2.6674 456.47±379.83△89 191.22±577.391.59±0.787.98±1.92△

3 討論

三氧化二砷納米粒系采用復(fù)乳溶劑揮發(fā)法進(jìn)行制備，推測(cè)形成納米粒的過程為：將溶有三氧化砷的水相溶劑加入到溶有聚乳酸的有機(jī)溶劑中進(jìn)行第一次初乳化，形成W/O型反膠團(tuán)，再加入含表面活性劑的外水相中，進(jìn)行第二次乳化，形成W/O/W型復(fù)乳，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑得到納米粒[11]。在此過程中，乳化充分、超聲時(shí)間、超聲功率是形成均一納米粒的關(guān)鍵，通過對(duì)制備條件的優(yōu)化，最終選用復(fù)乳溶劑揮發(fā)法制備納米粒，得到As2O3-PLA-NPs、As2O3-mPEG-PLA-NPs平均包封率為91.75%、86.32%和平均載藥量為6.88%、6.47%的最佳的納米粒。雖然在mPEG-PLA和PLA中聚乳酸分子量相同，但是由于每批原料差異和工藝技術(shù)的原因，不能保證分子量完全相同，而這直接導(dǎo)致相同工藝下，兩組納米粒的粒徑可能相差甚遠(yuǎn)，而粒徑的差異，會(huì)直接影響納米粒的體內(nèi)外釋放及對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用，故本部分實(shí)驗(yàn)的重點(diǎn)，是通過工藝技術(shù)，得到兩組粒徑相近、包封率較好的納米粒。通過比較不同復(fù)乳超聲時(shí)間、超聲功率以及調(diào)整油相比例發(fā)現(xiàn)，雖然超聲時(shí)間和功率能在一定程度上影響粒徑，但對(duì)包封率影響較大，而隨有機(jī)相比例增加，納米粒粒徑變化顯著。這是因?yàn)椋?dāng)聚合物濃度低時(shí)，有機(jī)相黏度低，表面張力較小，分散速度比較快，有利于有機(jī)相快速擴(kuò)散和揮發(fā)除去，因此得到的納米粒粒徑變小[12]。實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，納米粒溶液在室溫放置長(zhǎng)時(shí)間，會(huì)引起沉降，影響納米粒穩(wěn)定性，故采用凍干法，制備成凍干粉，可提高納米粒穩(wěn)定性。

本實(shí)驗(yàn)制備的三氧化二砷納米粒粒徑分布均勻，體外釋藥模型符合Weibull模型。體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)結(jié)果顯示，在相同劑量下，As2O3制成納米粒后藥物在循環(huán)系統(tǒng)中的滯留時(shí)間明顯延長(zhǎng)，清除率降低，起到一定的緩釋作用，改善藥物體內(nèi)生物過程[13]。本研究成功制備了形態(tài)均勻、包封率較高、具有良好生物相容性的三氧化二砷納米粒，為三氧化二砷的后續(xù)開發(fā)及研究拓寬了思路并提供了試驗(yàn)依據(jù)。