宮頸炎癥感染不同微生物檢驗(yàn)方法的效果及其診斷價(jià)值

陳旭璇，吳金，蔡曉如，馮萍香，許秀鋒

（廣東省普寧華僑醫(yī)院婦產(chǎn)二區(qū)，廣東 普寧 515300）

0 引言

宮頸炎是女性常見的下生殖道炎癥，在正常情況下，宮頸有多種防御功能，包括黏膜免疫、體液免疫和細(xì)胞免疫，這是防止病原體進(jìn)入上生殖道的重要防線[1]。然而，宮頸也容易受到性交、分娩和宮腔手術(shù)造成的損傷，宮頸管為柱狀上皮，抗感染能力差，易感染[2]。宮頸炎是指子宮頸的炎癥，炎癥主要影響子宮頸腺體的柱狀上皮細(xì)胞和鱗狀上皮細(xì)胞。宮頸炎由于傳染性或非傳染性病因，分為急性和慢性，急性宮頸炎通常是感染（衣原體，淋球菌）的結(jié)果，而慢性宮頸炎具有非感染性來源。宮頸癌在病因?qū)W上與高致癌風(fēng)險(xiǎn)人乳頭瘤病毒（Human papillomavirus，HPV）感染有關(guān)，這種腫瘤具有轉(zhuǎn)移到遠(yuǎn)處組織和器官的能力，這一事實(shí)與宮頸癌治療失敗密切相關(guān)。本研究分析探討宮頸炎癥感染不同微生物檢驗(yàn)方法的效果及其診斷價(jià)值。

1 一般資料

1.1 基本資料

2020 年7 月至2020 年11 月，選80 例宮頸炎癥感染患者，18-68 歲，均值（37.56±6.82）歲，簽知情同意書，倫理批準(zhǔn)，納入：符合宮頸炎癥感的診斷，配合研究。入組標(biāo)準(zhǔn)：所有女性均年齡≥18 歲；前一個(gè)月沒有接受抗生素治療或接受過婦科干預(yù)；目前沒有月經(jīng)或懷孕；沒有宮內(nèi)避孕器具。排除標(biāo)準(zhǔn)：患有盆腔炎的婦女；處女或懷孕婦女；語言表達(dá)障礙患者；嚴(yán)重精神疾病患者。

1.2 研究方法

①標(biāo)本采集，準(zhǔn)備和處理

研究參與者使用結(jié)構(gòu)化問卷進(jìn)行訪談，以收集社會(huì)人口和生殖健康信息。然后收集子宮頸刮片檢查和陰道拭子樣本，窺鏡用于檢查外生殖器，陰道和子宮頸是否有任何病變或炎癥。使用基于液體的細(xì)胞學(xué)獲得。取樣后無菌棉簽放到防腐劑小瓶中，涂片染色。在樣品采集后4-6 小時(shí)內(nèi)進(jìn)行載玻片制備和染色。通過巴氏染色技術(shù)處理和涂抹子宮頸刮片檢查標(biāo)本，使用宮頸上皮內(nèi)瘤變報(bào)告系統(tǒng)檢測(cè)念珠菌感染，放線菌和宮頸癌前病變。處理陰道拭子進(jìn)行濕支架和革蘭氏染色檢查，以診斷宮頸微生物感染，陰道滴蟲感染通過顯微鏡觀察潮濕毛滴中的運(yùn)動(dòng)毛滴蟲，革蘭氏陰性雙球菌表示淋病感染和假菌絲或菌絲或酵母芽的存在表示革蘭氏染色中的白色念珠菌感染。

②宮頸炎細(xì)胞病理學(xué)檢測(cè)

使用X40 物鏡，核仁和染色質(zhì)模式是不同的。炎癥過程被分類為急性（＞ 70%的炎癥細(xì)胞是中性粒細(xì)胞）、亞急性或慢性活動(dòng)（50-70%的炎性細(xì)胞是嗜中性粒細(xì)胞和30-50%的巨噬細(xì)胞）和慢性（＞ 50%的炎癥細(xì)胞是巨噬細(xì)胞）。

③免疫細(xì)胞化學(xué)染色

液基細(xì)胞學(xué)(liquid-based cytology，LBC)載玻片用于通過免疫細(xì)胞化學(xué)分析確定基質(zhì)金屬蛋白酶-9（matrix met alloprotein，MMP-9 ）和RECK 的表達(dá)。

④實(shí)時(shí)定量PCR 技術(shù)

使用TRizol 試劑（Invitrogen）從來自對(duì)照組和宮頸炎組中的女性宮頸樣品中提取總RNA。合成cDNA。使用針對(duì)目的基因的TaqMan 特異性引物進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR。使用ABI Prism 7500 序列檢測(cè)系統(tǒng)設(shè)備，在以下條件下進(jìn)行測(cè)定：在50℃下激活2 分鐘，95℃下變性10 分鐘，40 個(gè)循環(huán)的在95℃下15 秒以結(jié)束變性過程，最后在60℃下退火和延伸1 分鐘。使用循環(huán)閾值（Ct）方法計(jì)算。

1.3 觀察指標(biāo)

分析各種方法病原微生物的檢出率，以及檢測(cè)時(shí)間。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 各種方法病原微生物的檢出率

宮頸炎細(xì)胞病理學(xué)檢測(cè)、免疫細(xì)胞化學(xué)染色的檢出率沒有顯著差異（P＞0.05），實(shí)時(shí)定量PCR 技術(shù)檢出率高于宮頸炎細(xì)胞病理學(xué)檢測(cè)、免疫細(xì)胞化學(xué)染色（P＜0.05），見表1。

表1 各種方法病原微生物的檢出率（n%)

2.2 檢測(cè)時(shí)間分析

各種方法檢測(cè)時(shí)間存在差異（P＜0.05），見表2。

表2 檢測(cè)時(shí)間分析（ ±s）

表2 檢測(cè)時(shí)間分析（ ±s）

組別 n 檢測(cè)時(shí)間（h）宮頸炎細(xì)胞病理學(xué)檢測(cè) 80 122.36±20.36實(shí)時(shí)定量PCR 技術(shù) 80 182.62±35.62免疫細(xì)胞化學(xué)染色 80 154.35±30.04

3 討論

宮頸炎是指宮頸的炎癥，通常包括宮頸陰道和宮頸管粘膜的炎癥，它可分為急性宮頸炎和慢性宮頸炎[4]。急性宮頸炎常由特異性細(xì)菌感染的宮頸黏膜引起，臨床表現(xiàn)可為白帶增多、外陰瘙癢或下腹痛等，監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)宮頸充血、白帶多、白細(xì)胞多，需使用抗生素進(jìn)行治療[5]。慢性宮頸炎是由不完全或未經(jīng)治療的急性宮頸炎引起的，通常包括宮頸息肉、宮頸肥大、宮頸囊腫等[6]。宮頸炎癥感染常見的微生物有細(xì)菌、真菌、支原體、衣原體、病毒、滴蟲等。

微生物檢測(cè)是對(duì)病原微生物或其抗原、代謝物、核酸等的直接檢測(cè)。病原微生物檢測(cè)方法：生化方法檢測(cè)病原微生物的生化方法實(shí)際上是微生物特異性酶。由于各種微生物的酶系統(tǒng)不同，許多物質(zhì)的分解能力也不一致。因此，不同底物產(chǎn)生的不同代謝產(chǎn)物可間接檢測(cè)該微生物中是否存在酶，從而達(dá)到檢測(cè)特定微生物的目的。病原微生物檢測(cè)方法血清免疫學(xué)方法免疫學(xué)技術(shù)是一種利用特異性抗原抗體反應(yīng)來觀察和研究組織細(xì)胞和特異性抗原(抗體)的定性和定量技術(shù)。為了顯示和觀察這種抗原-抗體反應(yīng)，必須事先將某種標(biāo)記物綁定到抗體上，并借助標(biāo)記物的熒光或著色反應(yīng)、放射性或高電子密度，在光學(xué)或電子顯微鏡下進(jìn)行定性、定位或定量研究。各種文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫提供的數(shù)據(jù)表明，幾乎所有病原體的血清學(xué)檢測(cè)方法已經(jīng)建立，這表明該方法也已成為實(shí)驗(yàn)室常用的一種成熟的檢測(cè)技術(shù)。

對(duì)于宮頸炎癥感染微生物檢驗(yàn)當(dāng)前臨床常用的如分離培養(yǎng)、PCR、生化檢測(cè)技術(shù)等。分離培養(yǎng): 分離培養(yǎng)是臨床診斷病原微生物的“金標(biāo)準(zhǔn)”。分離培養(yǎng)技術(shù)通常需要3-5 天或更長的時(shí)間才能獲得檢測(cè)結(jié)果。然而，由于不同細(xì)菌的特性、生長條件的要求以及一些苛刻細(xì)菌的存在，大多數(shù)病原微生物無法通過分離培養(yǎng)獲得陽性檢測(cè)結(jié)果。根據(jù)相關(guān)數(shù)據(jù)，通過分離培養(yǎng)社區(qū)感染性肺炎的臨床樣本獲得的病原微生物陽性率僅為10%，因此，該技術(shù)不適用于急性和嚴(yán)重感染病人的病原體診斷。生化檢測(cè): 生化檢測(cè)技術(shù)通常需要建立在分離培養(yǎng)技術(shù)的基礎(chǔ)上，因此生化檢測(cè)技術(shù)也存在分離培養(yǎng)技術(shù)的局限性。此外，由同一種病原菌分泌的蛋白質(zhì)或酶通常是相同的，因此只能透過這項(xiàng)技術(shù)得到定性的檢測(cè)結(jié)果。核酸檢測(cè): 基于病原菌傳染病的檢測(cè)技術(shù)，解決了傳染病分離培養(yǎng)周期長的問題，更適用于已知病原微生物的檢測(cè)，但不適用于新的和未知病原體的檢測(cè)。

本次研究中，宮頸炎細(xì)胞病理學(xué)檢測(cè)、免疫細(xì)胞化學(xué)染色的檢出率沒有顯著差異（P＞0.05），實(shí)時(shí)定量PCR 技術(shù)檢出率高于宮頸炎細(xì)胞病理學(xué)檢測(cè)、免疫細(xì)胞化學(xué)染色（P＜0.05），各種方法檢測(cè)時(shí)間存在差異（P＜0.05）。說明實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)在臨床微生物檢驗(yàn)中存在優(yōu)勢(shì)，但是目前各指南中，微生物檢測(cè)仍以培養(yǎng)法為金標(biāo)準(zhǔn)，因此檢驗(yàn)將測(cè)序與培養(yǎng)結(jié)合診斷，可以增加微生物的檢出率，具有較大的診斷價(jià)值。

綜上所述，宮頸炎癥感染微生物檢驗(yàn)使用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)的靈敏度更高，檢測(cè)時(shí)間也大大縮短，需要結(jié)合培養(yǎng)法金標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分析。