不同膽汁酸對花鱸生長性能、血清生化指標及脂肪代謝的影響

于漫涵 董衍鄒 賴州文 唐卓懿 黃藝珠 魯康樂*

(1.集美大學水產學院，廈門市飼料檢測與安全評價重點實驗室，福建廈門361061；2.新奧（廈門）農牧發展有限公司，福建廈門361006)

隨著集約化水產養殖的發展，養殖魚類脂肪肝的頻發成為困擾養殖戶的主要問題之一，病魚的肝功能受損，導致生長下降、免疫低下、抗應激能力降低[1-4]，且在遭受病原體侵襲與環境應激時更易死亡，造成巨大的經濟損失。因此，開發緩解脂肪肝的飼料添加劑具有重要的意義。花鱸是一種廣溫廣鹽性的肉食性魚類，在我國南方地區大量養殖[5]，由于其生長迅速，肉質細嫩，具有較高的經濟價值，2018 年花鱸在我國的年產量已達16.66 萬噸[6]。由于花鱸的腹腔體積較大，使用配合飼料養殖的花鱸常導致脂肪大量沉積，誘發脂肪肝。

膽汁酸是膽汁的主要成分，具有促進脂肪代謝的功能[7-8]。膽汁酸能夠通過調節三酰甘油與膽固醇的代謝維持肝臟的代謝穩態[9-10]。已有研究表明，在齊口裂腹魚飼料中添加膽汁酸能夠提高脂肪代謝酶活性，減少脂肪沉積[11-12]；在大口黑鱸飼料中添加適量膽汁酸能夠提高生長性能，促進脂肪代謝[13-14]；在飼料中添加膽汁酸能夠提高黑鯛的抗氧化能力、脂肪酸β氧化與免疫機能[15]；在大黃魚飼料中添加膽汁酸能夠提高脂肪代謝與抗氧化酶活性，減少肝臟脂肪沉積并提高生長性能[16]。乳化膽汁酸是采用特殊工藝技術，將膽汁酸與油脂乳化制成腸絨毛膜易識別和吸收的體外乳糜微粒，更利于膽汁酸發揮作用。

本實驗以花鱸為研究對象，在飼料中添加不同類型的膽汁酸，研究對其生長與脂肪代謝的影響，以期為膽汁酸在花鱸配合飼料中的應用提供依據。

1 材料與方法

1.1 實驗飼料

根據花鱸的營養需求特點，以魚粉、豆粕、雞肉粉為蛋白源，以魚油、豆油為脂肪源配制蛋白水平為44%，脂肪水平為10%的飼料，分別加入膽汁酸及乳化膽汁酸。各組飼料配方見表1。

各飼料原料經過粉碎并過60目篩后按配方準確稱量，然后逐步充分混勻，加水后制成1.5 mm 與2.5 mm 粒徑的顆粒料，于55 ℃烘箱中風干5 h 后，用自封袋分裝后于-20 ℃冰箱中儲存待用。

1.2 實驗魚與飼養管理

實驗用魚購自漳州一家苗種場，將魚苗運至集美大學水產試驗場后暫養于體積為1 000 L 養殖桶，使用商品飼料馴養一個月。待魚苗適應實驗條件后，挑選240尾體格健壯、形態均一、體重約為（2.50±0.02）g的花鱸，隨機分到12 個水族缸中，每缸20 尾魚。分別用3 種飼料投喂花鱸，每種飼料設4 個重復，養殖實驗持續8周。每日定時飽食投喂三次（8:00、13:00、18:00），并適量換水確保水質良好，實驗期間記錄每個實驗缸的攝食量。水溫25～28 ℃，溶解氧≥6.0 mg/L，氨氮＜0.1 mg/L，pH 7.5～8.5。

表1 實驗飼料配方與主要營養水平(%)

1.3 樣品采集

養殖實驗結束后，饑餓處理24 h，分別稱量魚體的重量用于計算增重率等指標。每缸隨機取3 尾魚于-20 ℃冰箱儲存，用于測定全魚體成分；取3 尾魚麻醉（丁香酚1：10 000）后尾靜脈取血，取出的血液于4 ℃冰箱中靜置12 h 后，離心后取上層血清存于-80 ℃冰箱中待用。每缸取5 尾魚稱量體重和體長，解剖分離肝臟、腹脂、胴體分別稱重，以計算形體指標，取背鰭以下側線以上肌肉，存于-20 ℃冰箱用作肌肉組成分析；取6 尾魚解剖取肝臟，其中3 尾魚的肝臟取出后迅速裝入凍存管，用液氮速凍后保存于-80 ℃冰箱，另3 尾魚的肝臟固定于Bouin's 液中，保存于4 ℃冰箱。

1.4 樣品分析

花鱸的全魚與肌肉的水分、粗脂肪、粗灰分測定參考AOAC[17]的方法，水分采用105℃烘箱干燥法測定，粗脂肪采用索氏抽提法測定，以乙醚為溶劑，粗灰分采用550 ℃馬弗爐灼燒法測定，粗蛋白采用杜馬斯燃燒定氮法測定。

血清溶菌酶(LZM)、谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)、酸性磷酸酶(ACP)、堿性磷酸酶(AKP)活性，血清與肝臟三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)含量、肝臟脂蛋白脂酶(LPL)、肝脂酶(HL)、脂肪酸合成酶(FASN)活性均使用南京建成生物工程研究所的試劑盒測定，具體步驟參考說明書。

肝臟組織切片制備：將花鱸肝臟從固定液取出→切成0.5 cm×0.3 cm×0.3 cm大小的組織塊→于50%酒精中靜置6 h→脫水→二甲苯透明→石蠟包埋→切片機切片→脫蠟后用HE染液染色→中性樹脂封片制成永久切片→用顯微鏡觀察、拍照。

1.5 計算公式與數據統計

增重率(%)=（末體重-初體重）/初體重×100

蛋白質效率=（末體重-初體重）/蛋白質攝入量

肥滿度(g/cm3)=體重(g)/[體長(cm)]3×100

腹脂率(%)=腹腔脂肪重/體重量×100

用SPSS 22.0 軟件進行單因素方差分析（Oneway ANOVA），采用Duncan's法進行多重比較，差異顯著水平為P＜0.05。

2 結果

2.1 不同膽汁酸對花鱸生長的影響(見表2)

表2 不同膽汁酸對花鱸生長的影響

由表2 可知，與對照組相比，乳化膽汁酸提高了花鱸的增重率與攝食量（P＜0.05）。各組間的餌料系數、蛋白質效率、肝體比、肥滿度、胴體率與腹脂率均無顯著差異（P＞0.05）。

2.2 不同膽汁酸對花鱸血清生化指標的影響(見表3)

表3 不同膽汁酸對花鱸血清生化指標的影響

由表3可知，膽汁酸與乳化膽汁酸對溶菌酶和酸性磷酸酶無顯著影響（P＞0.05）。與對照組相比，添加膽汁酸與乳化膽汁酸均顯著降低了ALT和AST的活性（P＜0.05），并顯著提高了TC含量（P＜0.05）。膽汁酸與乳化膽汁酸使TG 含量略有升高，但差異不顯著（P＞0.05）。乳化膽汁酸顯著提高了AKP活性（P＜0.05）。

2.3 不同膽汁酸對花鱸全魚與肌肉組成的影響（見表4）

由表4可知，各組花鱸全魚的水分、粗蛋白、粗灰分無顯著差異（P＞0.05），添加膽汁酸與乳化膽汁酸對肌肉水分、粗蛋白、粗灰分無顯著影響（P＞0.05），膽汁酸顯著降低了肌肉的粗脂肪水平（P＜0.05），而乳化膽汁酸則對肌肉粗脂肪含量無顯著影響（P＞0.05）。

表4 不同膽汁酸對花鱸全魚與肌肉組成的影響（%）

2.4 不同膽汁酸對花鱸肝臟脂肪代謝的影響(見表5)

表5 不同膽汁酸對花鱸肝臟脂肪代謝的影響

由表5 可知，與對照組相比，膽汁酸與乳化膽汁酸均顯著提高了脂蛋白脂酶和總脂酶的活性（P＜0.05）、顯著降低了三酰甘油的含量（P＜0.05）。各組間肝脂酶、脂肪酸合成酶活性，總膽固醇含量無顯著差異（P＞0.05）。

2.5 不同膽汁酸對花鱸肝臟組織學的影響(見圖1)

圖1 不同膽汁酸對花鱸肝臟組織學的影響

如圖1 所示，各組細胞形態正常，未出現明顯的空泡化、細胞核偏移等異常現象，但膽汁酸組與乳化膽汁酸組的肝細胞結構更加緊密。

3 討論

膽汁酸作為一種安全高效的飼料添加劑，已在多種水產動物中開展了廣泛的研究[15]。大量研究表明膽汁酸對魚類的生長有顯著的影響，Ding等[16]在大黃魚高脂飼料中添加膽汁酸，顯著提高了增重率和蛋白質效率；Zhou 等[18]的研究表明，在草魚飼料中添加膽汁酸，能夠提高特定生長率和飼料效率；向梟等[12]在齊口裂腹魚高脂飼料中添加膽汁酸，顯著提高了增重率和蛋白質效率，且降低了飼料系數。本實驗中，乳化膽汁酸是采用特殊工藝技術將膽汁酸與油脂乳化制成腸絨毛膜易識別和吸收的乳糜微粒狀。經過8周的養殖實驗，乳化膽汁酸提高了花鱸的增重率，且顯著提高了攝食量；然而添加未經乳化處理的膽汁酸則對生長沒有顯著的影響。這表明：經乳化后的膽汁酸產品因產品均勻度好，更利于其發揮功效。乳化膽汁酸對花鱸的促生長作用的機制，可能是其提高了魚體對脂肪的消化吸收；乳化膽汁酸呈微粒狀，可擴大與脂肪的接觸面積；此外，乳化膽汁酸提高了魚體的攝食量，也表明其對消化有改善作用，這些原因導致乳化膽汁酸組的增重率顯著提高。

溶菌酶是魚類天然免疫系統中的重要組成，其活性能夠反映魚體的免疫機能[19]。Jin等[15]的研究表明，飼料中添加膽汁酸提高了黑鯛的肝臟溶菌酶活性，從而改善了黑鯛的免疫力。Guo等[20]在大口黑鱸的飼料中添加膽汁酸，顯著提高了其血清溶菌酶的活性。本實驗中，花鱸的血清溶菌酶活性無顯著的差異，這表明膽汁酸對于魚體免疫的作用還需進一步的研究。

谷草、谷丙轉氨酶在血清的含量能夠反映肝臟的健康狀況[21]。本實驗中，膽汁酸與乳化膽汁酸均顯著降低了這兩種酶的活性，表明膽汁酸可以維護肝臟健康。堿性磷酸酶能催化核苷酸、蛋白質、生物堿等多種分子去磷酸化，可間接反映魚體的健康狀況[22-23]。本實驗中，乳化膽汁酸顯著提高了花鱸血清堿性磷酸酶的活性，表明乳化膽汁酸能夠促進花鱸的健康。

血脂含量可以反映脂肪的代謝情況，膽汁酸與乳化膽汁酸均提高了三酰甘油和膽固醇的含量，這表明促進了肝脂向肝外組織的轉運，有利于緩解魚體的脂肪肝發生。此外，肝脂酶與脂蛋白脂酶是脂肪代謝的重要酶，其活性是評估脂肪分解代謝的主要指標之一[24]。本實驗中，膽汁酸與乳化膽汁酸均顯著提高了肝臟肝脂酶與脂蛋白脂酶的活性，且肝臟三酰甘油的含量也顯著地降低了，這表明肝臟脂肪分解加強。因此，膽汁酸對于預防或緩解魚類脂肪肝有非常好的效果。

本實驗表明，飼料中添加乳化膽汁酸能顯著促進花鱸的生長、提高脂肪分解能力而降低肝臟脂肪沉積，維持肝臟的健康。