復方扶芳藤合劑和復方扶芳藤膠囊劑生產后藥渣中有效成分的含量測定

劉巧明，奉建芳，梁健欽,林億龍，吳玉強

（1.廣西中醫藥大學，廣西南寧530001；2.廣西中醫藥大學制藥廠，廣西南寧530023）

隨著中醫藥產業的不斷改革、發展，我國已形成規模龐大的中醫藥產業體系[1]，藥渣年產量早已超過3 000萬噸[2?3]。在中藥渣綜合利用方面，現主要模式有中藥渣培養基（供生產食用菌用）、中藥渣有機肥、中藥渣飼料添加劑等，其他新型綜合利用藥渣模式（如中藥渣可開發作為重金屬吸附劑、能源物質、工程材料、有效成分再提取等）處于應用研究階段[4?5]。

復方扶芳藤合劑和復方扶芳藤膠囊是廣西中醫藥大學制藥廠的特色品種，也是廣西特色中藥產品，合劑收載在2020年版《中國藥典》，目前生產后的藥渣采用填埋的方式處理。由于兩個產品市場需求大，生產量大，且處方中含有人參、黃芪等貴重、補益類藥材，藥渣填埋丟棄造成了極大的資源浪費。藥渣中指標成分、有效成分含量高低是衡量藥渣進一步開發利用價值大小的主要因素。復方扶芳藤合劑組成為紅參、扶芳藤、黃芪，復方扶芳藤膠囊組成為人參、扶芳藤、黃芪；因此，本文通過測定復方扶芳藤合劑和復方扶芳藤膠囊人參藥渣中人參皂苷Re、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1，黃芪藥渣中毛蕊異黃酮葡萄糖苷、黃芪甲苷的質量分數，為掌握人參、紅參、黃芪藥渣中指標成分的積累規律和為更好綜合利用藥渣提供依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器

LC?20A型高效液相色譜儀（配備SPD?M20A型UV檢測器，日本島津公司）；Waters e2695型高效液相色譜儀（配備2424型蒸發光散射檢測器，美國Waters公司）；SQP型電子分析天平（賽多利斯科學儀器北京有限公司）；TGL?16G型離心機（上海安亭科學儀器廠）。

1.2 試藥

D101型大孔吸附樹脂（批號為HG2?885?76，天津市光復精細化工研究所）；人參皂苷Rg1對照品（批號為110703?201832）、人參皂苷Re對照品（批號為110754?201626）、人 參 皂 苷Rb1對 照 品（批 號 為110704?201726）、黃 芪 甲 苷 對 照 品（批 號 為110781?201717）、毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品（批號為111920?201606）均購自中國食品藥品檢定研究院；紅參藥渣（來自復方扶芳藤合劑生產后的藥渣）、人參藥渣（來自復方扶芳藤膠囊生產后的藥渣）、黃芪藥渣（來自復方扶芳藤合劑和來自復方扶芳藤膠囊生產后的藥渣），均由廣西中醫藥大學制藥廠提供；乙腈、甲醇（色譜純，Fisher）；其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 人參藥渣和紅參藥渣中人參皂苷Rb1、Rg1、Re的測定[6]

2.1.1 色譜條件 色譜柱為XB?C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動相為乙腈（A）?水（B）梯度洗脫（0～35 min，19%A；35～55 min，19%→29%A；55～70 min，29%A；70～100 min，29%→40%A）；流速為1.0 mL/min；柱溫為30℃；檢測波長為203 nm；進樣量為10μL。理論板數按人參皂苷Rg1峰計算應不低于6 000。由圖1可見，在該色譜條件下，紅參藥渣供試品溶液、人參藥渣供試品溶液和混合對照品溶液的HPLC圖譜中，人參皂苷Rb1、Rg1、Re分離度均符合要求。

2.1.2 對照品溶液的制備 分別精密稱取人參皂苷Rg1對照品0.002 1 g、人參皂苷Re對照品0.003 0 g、人參皂苷Rb1對照品0.002 1 g，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，制成每1 mL中含人參皂苷Rg10.21 mg、人 參 皂 苷Re 0.3 mg、人 參 皂 苷Rb10.21 mg的混合溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備 分別按2020年版《中國藥典》紅參、人參藥材中“含量測定”項中“供試品溶液的制備”操作，制得紅參藥渣供試品溶液和人參藥渣供試品溶液。

2.1.4測定方法 分別精密吸取混合對照品溶液、供試品溶液，注入液相色譜儀進行測定。按外標法計算紅參藥渣和人參藥渣中人參皂苷Rg1、Re、Rb1的質量分數。2020年版《中國藥典》規定紅參與人參中人參皂苷Rg1和人參皂苷Re的總量限度分別為≥0.25%、≥0.30%，人參皂苷Rb1的限度均為≥0.20%。

圖1 人參皂苷混合對照品（A）、紅參藥渣供試品溶液（B）和人參藥渣供試品溶液（C）的HPLC圖譜Figue 1 HPLC chromatograms of ginsenosides mixed stan?dards(A),red ginseng residue(B)and ginseng residue(C)

由見表1可見，與《中國藥典》規定的限度相比，紅參藥渣和人參藥渣中，人參皂苷Rb1質量分數均高于《中國藥典》限度規定；在5批次紅參藥渣中有4批次的人參皂苷Rg1+人參皂苷Re總量高于《中國藥典》限度，而在人參藥渣中均低于《中國藥典》限度；在人參皂苷Rg1+人參皂苷Re總量最低的GS10樣品中，總量也能達到《中國藥典》限度的33%；紅參藥渣中人參皂苷Rb1平均質量分數和人參皂苷Rg1+人參皂苷Re的總量均顯著高于人參藥渣（P＜0.005）。

2.2 黃芪藥渣中黃芪甲苷的測定[6]

2.2.1 色譜條件 色譜柱為XB?C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm），以乙腈?水（體積比32∶68）為流動相，流速為1.0 mL/min，柱溫為40℃，蒸發光散射檢測器檢測漂移管溫度為60℃、載氣壓力為206.85 kPa。理論板數按黃芪甲苷峰計算應不低于4 000。由圖2可見，在該色譜條件下，黃芪甲苷分離度符合要求，無干擾。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取黃芪甲苷對照品0.012 5 g，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，制成每1 mL含黃芪甲苷0.5 mg的溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 按2020年版《中國藥典》一部黃芪藥材中“含量測定?黃芪甲苷”項中“供試品溶液的制備”操作，制得黃芪藥渣供試品溶液。

2.3 黃芪藥渣中毛蕊異黃酮葡萄糖苷的測定[6]

2.3.1 色譜條件 色譜柱為XB?C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動相為乙腈（A）?0.2%甲酸溶液（B），梯 度 洗 脫（0～20 min，20%→40%A；20～30 min，40%A）；流速為1.0 mL/min；柱溫為30℃；檢測波長為260 nm；進樣量為10μL。理論板數按毛蕊異黃酮葡萄糖苷峰計算應不低于3 000。從圖3可見，在該色譜條件下，毛蕊異黃酮葡萄糖苷分離度符合要求，無干擾。

表1 紅參藥渣與人參藥渣中人參皂苷（Rg1、Re、Rb1）的測定結果Table 1 Determination results of ginsenoside(Rg1,Re,Rb1)in red ginseng and ginseng residue

圖2 黃芪甲苷對照品（A）和黃芪藥渣（B）的HPLC圖Figue 2 HPLC of astragaloside(A)and astragalus residue(B)

圖3 毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品（A）與黃芪藥渣（B）的HPLC色譜圖Figue 3 HPLC chromatograms of calycosin glycoside（A）and astragalus residue（B）

2.3.2 對照品溶液的制備 精密稱取毛蕊異黃酮葡萄糖苷對照品0.004 8 g，置100 mL量瓶中，加甲醇至刻度，制成每1 mL含毛蕊異黃酮葡萄糖苷48μg的溶液。

2.3.3 供試品溶液的制備 按2020年版《中國藥典》黃芪藥材中“含量測定?毛蕊異黃酮葡萄糖苷”項中“供試品溶液的制備”操作，制得黃芪藥渣供試品溶液。

2.3.4 測定方法 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液，注入液相色譜儀進行測定。按外標法計算黃芪藥渣中毛蕊異黃酮葡萄糖苷的質量分數。2020年版《中國藥典》規定黃芪中黃芪甲苷和毛蕊異黃酮葡萄糖苷含量限度分別為≥0.040%、≥0.020%。

2.4 黃芪藥渣中黃芪甲苷與毛蕊異黃酮葡萄糖苷的測定結果

由表2可見，10批次黃芪藥渣中黃芪甲苷與毛蕊異黃酮葡萄糖苷的平均質量分數為(0.027±0.004)%、(0.012±0.005)%，均低于《中國藥典》限度，但仍然達到萬分之一及以上的水平。來源于復方扶芳藤合劑和復方扶芳藤膠囊生產后的兩組黃芪藥渣，黃芪甲苷與毛蕊異黃酮葡萄糖苷質量分數組間差異均無統計學意義（P值分別為0.21、0.85）

3 討論

本文結果顯示有4批次紅參藥渣人參皂苷（人參皂苷Re、人參皂苷Rb1和人參皂苷Rg1）質量分數均高于《中國藥典》規定的紅參藥材的含量限度，人參藥渣和黃芪藥渣指標成分質量分數均低于相應原藥材的含量限度，但也能保持在萬分之一的水平上。以上結果說明紅參藥渣、人參藥渣和黃芪藥渣中相應指標成分含量較高，具有再綜合利用的潛力；人參、黃芪原藥材中有效成分大部分經提取后轉移至制劑中，導致藥渣中含量降低。同時，由于紅參藥渣指標成分含量高于《中國藥典》限度，藥廠相關部門要及時、妥善、按GMP要求處理藥渣，嚴防紅參藥渣冒充紅參飲片回流藥品市場。

表2 黃芪藥渣中黃芪甲苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷的含量Table 2 Contents of astragaloside and calycosin glycoside in astragalus residue

本文結果顯示紅參藥渣指標成分質量分數顯著高于人參藥渣（P＜0.05），雖然人參藥渣中人參皂苷Rg1+人參皂苷Re的總量略低于《中國藥典》人參藥材限度，但人參皂苷Rb1的則高于《中國藥典》人參藥材限度。造成上述結果的原因可能與人參皂苷脂溶性較高以及制劑中紅參、人參的提取工藝不同有關。首先，從HPLC測定結果分析，人參皂苷出峰時間＞50 min，提示3種人參皂苷脂溶性較大，從出峰時間排序提示3種人參皂苷脂溶性排序為人參皂苷Rg1＜人參皂苷Re＜人參皂苷Rb1。其次，對比分析復方扶芳藤合劑紅參的提取工藝（紅參用65%乙醇回流提取3次，每次2 h，合并提取液，濾過，濾液備用，藥渣加水煎煮3次，每次1.5 h）和復方扶芳藤合劑人參的提取工藝（人參用85%乙醇回流提取3次，每次2 h）發現，人參采用更高濃度的乙醇作為提取溶劑，更適合人參皂苷等脂溶性成分的萃取，提示復方扶芳藤合劑紅參的提取工藝存在問題，需要進一步優化。最后，紅參藥渣和人參藥渣中人參皂苷Rb1質量分數均高于《中國藥典》限度，結合人參皂苷Rb1的高脂溶性，提示需要優化復方扶芳藤合劑、復方扶芳藤膠囊的提取工藝，建議可對提取的關鍵因素（提取工藝、乙醇濃度、料液比、提取時間、提取次數、藥材粉碎度）進行綜合考察。

本研究參照2020年版《中國藥典》一部中相應指標成分、有效成分的含量測定方法進行測定藥渣中的殘留含量，方法準確、可靠。結果顯示，人參、紅參和黃芪藥渣的指標成分的殘留較高，藥渣填埋處理造成資源浪費。研究表明黃芪藥渣對動物免疫系統有一定的強化作用和可促進植物快速增長的作用[7]，紅參藥渣的發酵產物可增強雌性大鼠的抗氧化能力和提高大鼠免疫器官（脾臟、胸腺）的指數[8]，人參藥渣中的人參皂苷可改善雞的促進體成熟與性成熟同步，提升雞群的生產水平[9]。最近研究表明，復方扶芳藤合劑還有抗衰老作用[10?11]、提高免疫力[12?13]、輔助化療[14]等作用，由于藥渣中保留具有較高水平的有效成分，可以將藥渣整方或把人參藥渣、紅參藥渣、黃芪藥渣單獨分類后二次利用。