長鏈非編碼RNA MIAT 表達水平與心房顫動導管消融術后復發的關系

朱文書，張理想，游楊楊，徐 健

（1.安徽醫科大學附屬省立醫院心內科，安徽 合肥 230001；2.中國科學技術大學附屬第一醫院心內科，安徽 合肥 230001）

心房顫動（atrial fibrillation），簡稱房顫，是最常見的心律失常之一，近年來患病率和發病率在逐漸增加。房顫時心房有效收縮和舒張功能喪失會導致泵功能受損或喪失，可引起心力衰竭和動脈栓塞等并發癥。導管消融術是房顫的主要治療方法，治療效果值得肯定，但主要缺點在于復發率高[1]。因此，積極探索房顫患者術后復發的危險因素，有助于更好地篩查房顫患者，提高房顫消融手術的成功率。LncRNA 是大于200 nt 的調節性非編碼RNA，參與基因轉錄和蛋白質翻譯等過程的調控[2]。多項研究從致病機理及分子調控機制方面對LncRNA 在房顫發生和發展中的作用進行過探討，但是仍有許多未知。MIAT 作為一種新發現的LncRNA，已被證實在腫瘤患者中呈現高表達[3]，但與房顫患者的關系報道較少。本研究通過分析房顫患者外周血白細胞中LncRNA MIAT 的表達水平，評估對于導管消融術后復發的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2019 年7 月～2020 年6 月于安徽省立醫院心內科行導管射頻消融術的住院患者150 例。所有患者均有明確的心電圖或動態心電圖診斷依據。排除標準年齡＜50 歲、瓣膜性或結構性心臟疾病、射血分數小于40%的心力衰竭、急性冠脈綜合征、甲亢、腫瘤、急慢性炎癥及肝腎功能不全。本研究經安徽省立醫院倫理委員會批準，所有患者簽署知情同意書。

1.2 方法 入院后次日清晨抽取外周血2 ml 置于EDTA 抗凝管，并立即在4 ℃下保存。采用紅細胞裂解液提取白細胞，加入1 ml Trizol 試劑（康為世紀，貨號CW0580）后吹打混合，-80 ℃保存。其中紅細胞裂解液配制方法：取氯化銨（國藥試劑，批號20190814）82 g 加入1000 ml 純水配制成原液，然后取100 ml 原液加入900 ml 純水配制成紅細胞裂解液。使用高純度RNA 提取試劑盒（DNase I）（康為世紀，貨號CW0597）從白細胞中提取總RNA，使用分光光度計評估RNA 濃度和純度，通過瓊脂糖凝膠電泳判斷其完整性。使用逆轉錄試劑盒（康為世紀，商品貨號CW2569M）將總RNA 逆轉錄為cDNA 后進行RT-PCR 反應，并采用2-△△ct方法分析結果，用以表示LncRNA MIAT 在房顫患者外周血白細胞中的相對表達水平。

1.3 觀察指標 術后每月隨訪1 次，共3 個月，隨訪終點為患者復發或者完成3 次隨訪，根據隨訪是否復發分為復發組和未復發組。比較兩組年齡、性別、高血壓與糖尿病病史、體重指數（BMI）、左心房與左心室內徑、左心室射血分數（LVEF）、白細胞計數及外周血白細胞中LncRNA MIAT 表達水平。

1.4 統計學方法 使用SPSS 24.0 軟件進行數據分析，計量資料以（）表示，采用方差分析和t檢驗進行比較。計數資料以（%）表示，使用χ2檢驗進行分析。采用箱式圖表示不同組別之間差異，二元Logistic 回歸分析評估房顫患者臨床特征與導管消融術后復發的關系，P＜0.05 認為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組一般資料比較 隨訪復發率為27.33%。兩組年齡、性別、高血壓、糖尿病、BMI、左心室內徑、LVEF 及白細胞計數比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；復發組左心房內徑大于未復發組，差異有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組一般資料比較[，n（%）]

表1 兩組一般資料比較[，n（%）]

2.2 兩組外周血白細胞中LncRNA MIAT 表達水平比較 復發組LncRNA MIAT 表達水平為（2.13±0.67），高于未復發組的（1.70±0.69），差異有統計學差異（P＜0.05），見圖1。

圖1 復發組與未復發組患者外周血白細胞中LncRNA MIAT 表達水平比較

2.3 導管消融術后復發影響因素的Logistic 回歸分析 將P＜0.1 指標納入回歸分析，對BMI、左心房內徑及LncRNA MIAT 表達水平進行Logistic 回歸分析結果顯示，左心房內徑及LncRNA MIAT 表達水平是房顫導管射頻消融手術復律成功后復發的獨立危險因素（P＜0.05），見表2。

表2 導管消融術后復發影響因素的Logistic 回歸分析

3 討論

心房具有發生房顫的基質是房顫發作和維持的必要條件，以心房有效不應期的縮短和心房擴張為特征的電重構和結構重構是房顫持續的基質，重構變化可能有利于形成多發折返子波。雖然心房重構的過程始終沒有闡明，但心房纖維化是結構重構的重要原因之一[4]，且房顫導管消融術的成功率與左心房心肌纖維化的程度顯著相關。LncRNA 參與基因表達和翻譯多個階段，如果發生突變或失調會引起相應的疾病。房顫患者和正常人的外周血淋巴細胞中長鏈非編碼RNA 的表達特征存在明顯差異，這種差異主要表現在細胞粘附、炎癥、免疫反應、細胞外基質生成等病理生理過程[5]。MIAT 作為一種新型的疾病相關性LncRNA，與房顫之間的關系主要體現在心肌纖維化，通過不同的信號通路影響著下游基因的表達[6]。在心肌梗死小鼠模型中，研究人員發現MIAT 上調比較明顯，同時miR-24 下調以及TGF-β1 上調，并伴有心臟間質纖維化,可以通過siRNA 抑制內源性MIAT 以改善心臟功能、減少心臟纖維化[7]。LncRNA MIAT 通過負調控miR-29a 的表達，參與肥厚型心肌病（HCM）心肌纖維化的發展[8]。房顫患者外周血白細胞中LncRNA MIAT 高度表達，miR-133a-3p 顯著降低，在大鼠心房組織中有相似的表達特點。MIAT 的下調通過靶向miR-133a-3p 可增加心房有效不應期（AERP），減少房顫持續時間和心肌細胞凋亡，同時減輕心肌纖維化程度[9]。在本研究中，在對房顫患者行導管消融手術復律成功后進行隨訪，結果發現復發組房顫患者外周血白細胞LncRNA MIAT 表達水平顯著高于未復發組患者，初步說明LncRNA MIAT 表達水平與復發之間存在聯系。這也提示因為心房纖維化程度不同，患者MIAT表達水平存在差異，可以用來評估患者的預后。

炎癥與房顫的發生和維持密切相關，可能來自與房顫發生相關的疾病，諸如高血壓、肥胖、心力衰竭等[10]。白細胞作為炎癥及免疫反應的重要組成部分，在房顫中具有重要作用。多種促炎細胞因子和激素可以增強中性粒細胞的活化，導致心肌組織中浸潤的中性粒細胞增多，從而促進房顫的結構重塑[11]。心房纖維化與年齡有關，并且房顫患者的心房組織中有大量白細胞浸潤，促炎細胞因子如VEGF 和CCL-2/MCP-1 表達更高[12]。超重與肥胖明顯增加普通人群新發房顫的風險，隨著BMI 水平的增加，新發房顫風險也在逐級增加[13]。在超重及肥胖患者中，體重控制與房顫射頻消融術后房顫復發率低具有相關性[14]。研究表明房顫與左心室纖維化存在密切關系[15]。存在兩種可能性：一是心室纖維化是由房顫及心動過速心肌病導致；二是由于其他類型的心臟病導致心肌纖維化，引起左心室舒張功能障礙，使左心房血流動力學發生改變，從而導致房顫。本研究兩組年齡、性別、高血壓、糖尿病、BMI、左心室內徑、LVEF 及白細胞計數比較，差異無統計學意義（P＞0.05），排除上述與房顫相關指標對于研究結果的影響。但是復發組左心房內徑大于未復發組（P＜0.05）。本研究患者排除了結構性心臟病，雖然部分患者合并高血壓，但兩組高血壓指標間比較無明顯差異，心房增大可考慮為房顫本身的影響。既往研究顯示，左心房內徑是復發的獨立預測因子，但預測的準確性不高。在左心房內徑等因素的基礎上增加血液學指標，可能有助于提高預測的準確性。本研究多因素回歸分析顯示，左心房內徑和LncRNA MIAT 表達水平是房顫復發的獨立危險因素，而外周血白細胞中LncRNA MIAT 表達水平是房顫術后復發的獨立危險因素增加了對房顫復發治療預后判斷的依據，可能有助于提高復律患者選擇的準確性。

總之，外周血白細胞LncRNA MIAT 表達水平與房顫導管消融術后復發密切相關，LncRNA MIAT表達水平及左心房內徑是房顫射頻消融術后復發的獨立危險因素。