有毒蜜源植物博落回花粉顆粒電鏡掃描觀察

姚丹 張錦華 袁揚(yáng) 趙恬 張定紅 徐祖蔭 王胤晨

（1 貴州省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展研究所；2 貴州省農(nóng)科院畜牧獸醫(yī)研究所；3 貴州省養(yǎng)蜂學(xué)會，貴陽 550006）

1 引言

博落回（學(xué)名：Macleaya cordata(Willd.)R.Br.）是罌粟科，博落回屬，別名號筒桿、喇叭筒、空洞草等。莖光滑呈綠色，多白粉；葉片寬卵形或近圓形；裂片半圓形、方形，邊緣波狀[1]；大型圓錐花序多花，頂生和腋生，花淺黃色，雄蕊花絲絲狀，花藥條形[2]；每年6～11月開花結(jié)果。喜生長于溫暖濕潤的山林邊緣，路邊、二荒地中。主要分布于我國長江以南，南嶺以北，海拔150～1000 m 的地區(qū)，分布不均，如貴州東部地區(qū)較為常見，而西部地區(qū)較少[3]。

博落回全草有大毒[4,5]，不可內(nèi)服。植株及花蜜、花粉皆有毒，含血根堿、白屈菜紅堿、博落回堿等[6-8]。20世紀(jì)80年代，貴州省梵凈山區(qū)曾發(fā)生過三家夏季食蜜中毒死亡的事件，這三家蜂蜜中，昆明山海棠（有毒蜜源）成分檢出均呈陽性，其中一家蜂蜜中還檢出有博落回花粉，占比為40%～80%[9]。人中毒后主要為輕者出現(xiàn)口渴、頭暈、惡心、嘔吐、胃燒灼感及四肢麻木、乏力，重者出現(xiàn)煩躁、嗜睡、昏迷、心律失常甚至死亡[5]。

博落回花粉量大，每年開花時間正值外界缺粉季節(jié)，蜜蜂大多會采集其花粉。本次研究將夏季收集到的博落回花粉，通過掃描電鏡觀察花粉形狀，豐富有毒蜜源植物的鑒定標(biāo)記，同時為養(yǎng)蜂實踐生產(chǎn)提供理論基礎(chǔ)。

2 材料和方法

2.1 實驗材料

博落回花粉由貴州省畜牧獸醫(yī)研究所提供。實驗時間：2020年6～10月。

2.2 實驗方法

將采集到的新鮮花粉投入電鏡固定液（廠家：Servicebio，貨號：G1102）固定，并用真空泵抽氣直至沉底，室溫放置2 小時，0.1M 磷酸緩沖液PB（pH7.4）漂洗3 次，每次15 分鐘；隨后用1%的鋨酸·0.1M 磷酸緩沖液PBS（pH7.4）室溫（20℃）固定5 小時。0.1M磷酸緩沖液PB（pH7.4）漂洗3 次，每次15 分鐘。組織依次入30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%酒精上行脫水，每次1 小時。丙酮（廠家：國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）：812 包埋劑（廠家：SPI，貨號：90529-77-4）=3∶1 滲透4 小時，將樣品插入包埋板后37℃烤箱過夜；60℃烤箱聚合48 小時；超薄切片機(jī)切片60～80 nm 超薄切片（廠家：Leica，型號：Leica UC7）；鈾鉛雙染色（2%醋酸鈾飽和酒精溶液，枸櫞酸鉛，各染色15 分鐘），切片（廠家：Daitome，型號：Ultra 45°）室溫干燥過夜；透射電子顯微鏡（廠家：hitachi，型號：HT7700）下觀察，采集圖像分析。

3 結(jié)果與分析

電鏡在放大1000x 時的掃描結(jié)果，博落回花粉顆粒有的呈圓球形、長球形等，呈圓球形的大都呈串珠狀相連，呈長球形的大都呈簇狀，花粉表面有突起，形似羊肚菌（圖1-1）；當(dāng)電鏡放大4000x 時，掃描結(jié)果為博落回花粉顆粒呈圓球形，表面布滿蜂窩狀的小孔（圖1-2）；對花粉顆進(jìn)行粒表面切片后，在掃描電鏡下放大20000x 時，其花粉表面紋飾呈結(jié)繩狀或姜塊狀，或核桃表面的突起（圖1-3），期間有許多小孔。

圖1 博落回花粉顆粒掃描電鏡結(jié)果

4 討論

蜜蜂能夠采集，但其花粉或花蜜對蜜蜂或人有毒的蜜粉源植物統(tǒng)稱為有毒蜜源植物[11]。判斷一種植物是否是有毒蜜源植物的標(biāo)準(zhǔn)，就是其花蜜、花粉是否對人或蜜蜂有毒。誤食有毒蜂蜜致人中毒死亡事件，已見報道的有云南（1977、1983、2005～2013）、廣西（1972、2014）、貴州（1988）、廣東（1992）、重慶（2011、2015）、湖北（2015）等省市[12]，因此，對特定地區(qū)（有毒蜜源分布區(qū)）、特定時間（夏季）采收到的蜂蜜，應(yīng)當(dāng)進(jìn)行鑒定。

蜜蜂在采集某種植物的花蜜時，一定會混入少量該種植物的花粉，所以花粉鑒定也是一個重要方法。王憲曾[13]曾對雷公藤、鉤吻的花粉通過掃描電鏡的觀察，進(jìn)行過報道描述。這次對我省發(fā)生過蜂蜜中毒的博落回花粉開展了電鏡觀察進(jìn)一步豐富了花粉鑒別有毒蜂蜜的鑒定標(biāo)記，同時，對蜂蜜安全檢測具有重要的指導(dǎo)意義。