熟地黃不同炮制方法對質量的影響

王丕明1，張府君1，任建萍

(1.山西藥科職業學院, 山西 太原 030031;2.山西衛生健康職業學院，山西 晉中 030619)

熟地黃為玄參科植物干燥塊根生地黃(Rehmannia glutionsa Libosch.)依照《中國藥典》炮制通則酒燉法和蒸法炮制加工而成的，其外觀烏黑發亮有光澤，質柔軟黏性大而味甜[1]。近年來大量藥理實驗證明熟地黃活性成分毛蕊花糖苷具有抗氧化、抗腎炎、神經保護、強心等多種生物活性[2,3]。故本實驗采用陶瓷蒸煮罐傳統炮制法和雙門蒸柜新工藝兩種不同的炮制方法制備熟地黃，考察新工藝對其質量的影響，報告如下。

1 實驗材料

1.1 實驗儀器

高效液相色譜儀(島津LC-15C)，電子分析天平(賽多利斯公司，CP225D型)，電熱恒溫水浴鍋(上海雙旭電子有限公司，HH.S11-4)，數控超聲波清洗器(昆山禾創超聲儀器有限公司，KH7200DB型)，高速萬能藥材粉碎機(西安特普訊儀器設備有限公司，DFY-400C)，數顯鼓風干燥箱(上海博迅實業有限公司，GZX-9146MBE)

1.2 藥品與試劑

地黃(產地：河南省，購置于國藥樂仁堂河北藥業有限公司)，按《中國藥典》2020年版一部的檢測方法檢驗合格。 試劑：甲醇(色譜純，OCEANPAK)；乙腈(色譜純，OCEANPAK)；娃哈哈純凈水

1.3 對照品

毛蕊花糖苷(中國食品藥品檢定研究院，批號：111530-201310，純度為93.3%)

2 實驗方法與結果

2.1 性狀

兩種炮制工藝制得的熟地黃性狀相對穩定。陶瓷蒸煮罐傳統炮制法制得的熟地黃樣品性狀較優良達到了“黑如漆，甜如飴”的傳統炮制要求。雙門蒸柜新方法制得的熟地黃樣品性狀達到《中國藥典》要求。

2.2 熟地黃浸出物測定

依據《中國藥典》2020年版四部，水溶性浸出物測定法(通則2201)項下的冷浸法測定。熟地黃水溶性浸出物的測定結果見表1、2。

表1 傳統炮制法制得熟地黃水溶性浸出物測定結果

表2 新方法制得熟地黃水溶性浸出物的測定結果

雙門蒸柜新方法制得的熟地黃水溶性浸出物(平均值為79.44%)比陶瓷蒸煮罐傳統炮制法制得的熟地黃水溶性浸出物(平均值為70.56%)含量高。

2.3 熟地黃毛蕊花糖苷含量測定

照《中國藥典》2020年版一部高效液相色譜法測定。

2.3.1 色譜條件 色譜柱：VP-ODS/C18/SHIMADZU(250 mm×4.6 mm)；流動相：乙腈-0.1%醋酸(16∶84)；流速：1.0 mL/min；檢測波長：334 nm；柱溫：40℃；進樣量：20 μL。理論板數按毛蕊花糖苷峰計不低于5 000。

2.3.2 對照品溶液制備 取毛蕊花糖苷對照品5.04 mg，精密稱定，置50 mL的容量瓶中，加流動相適量使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得。另取1 mL，置10 mL的容量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，即得。對照品溶液濃度為(0.010 08 mg/mL×93.3%)9.404 64 μg/mL。

2.3.3 供試品溶液制備 稱取熟地黃最粗粉約2 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入甲醇100 mL，密封，稱定重量，加熱回流30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，用0.45 μm的微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。

用島津LC-15C型高效液相色譜儀，對照品溶液和供試品溶液進樣體積各為20 μL進行檢測，記錄色譜圖，計算，即得。

2.3.4 方法學考察

2.3.4.1 線性關系 取上述毛蕊花糖苷對照品溶液(濃度為9.404 64 μg/mL)進樣，體積分別為5，10，15，20，25 μL，按“2.3.1”項下的含量測定的色譜條件分別進行測定，記錄色譜圖。所得線性關系結果見表3。以峰面積(Y)為縱坐標，其進樣量(X)為橫坐標，得到的回歸方程為：Y=14 540X-6 006.3，r=0.999 6，見圖1。結果表明毛蕊花糖苷進樣量在0.047～0.235 μg范圍內線性關系良好。

表3 毛蕊花糖苷線性關系

圖1 毛蕊花糖苷標準曲線

2.3.4.2 精密度試驗 取毛蕊花糖苷對照品溶液(濃度為9.404 64 μg/mL)進樣，體積為20 μL，按“2.3.1”項下的色譜條件連續進樣6次，記錄色譜圖，測定峰面積，所得的平均峰面積值為281 091.5，RSD為1.21%，結果表明該儀器具有良好的精密度。精密度試驗結果見表4。

表4 精密度試驗結果

2.3.4.3 穩定性試驗 取一份供試品溶液，于室溫下放置，分別在0、4、8、10、12、16、24 h進樣，記錄色譜圖，測定毛蕊花糖苷的峰面積，在24 h內毛蕊花糖苷的平均峰面積值為791 527.6，RSD為0.23%，表明熟地黃提取溶液在24 h內穩定性良好。穩定性試驗結果見表5。

表5 穩定性試驗結果

2.3.4.4 重復性試驗 精密稱取相同批次的熟地黃粗粉6份，按“2.3.1”項下方法平行制備供試品溶液，進樣，體積為20 μL，按“2.3.1”項下的色譜條件進行測定，并記錄色譜圖，計算含量，測得熟地黃中毛蕊花糖苷的平均含量為0.027 0%，RSD值為1.20%。結果見表6。

表6 重復性試驗結果

2.3.4.5 回收率試驗 取已知含量的熟地黃粗粉6份，每份約2 g，精密稱定，分別精密加入濃度為100 μg/mL的毛蕊花糖苷儲備液5 mL，按“2.3.3”項下方法制備供試品溶液并且按“2.3.1”項下的色譜條件進行含量測定，并記錄色譜圖，然后計算回收率，所得的平均回收率為98.71%，其RSD值為1.29%，表明該方法的回收率良好。加回收率試驗結果見表7。

表7 回收率試驗結果

2.3.4.6 熟地黃樣品含量測定結果 分別取不同批號的熟地黃粗粉，按“2.3.3”項下的方法制備供試品溶液。對照品溶液和供試品溶液進樣，體積各為20 μL，按“2.3.3”項下的色譜條件進行測定，記錄色譜圖，并計算各樣品中毛蕊花糖苷含量。色譜圖見圖2、3，計算結果見表8、9。

圖2 毛蕊花糖苷對照品

圖3 供試品溶液色譜圖

表8 陶瓷蒸煮罐傳統炮制法制得熟地黃毛蕊花糖苷含量測定結果

表9 雙門蒸柜新方法制得熟地黃毛蕊花糖苷含量測定結果

結果表明，陶瓷蒸煮罐傳統炮制法制得的熟地黃毛蕊花糖苷含量在0.021 9%～0.023 1%之間，雙門蒸柜新方法制得的熟地黃毛蕊花糖苷含量在0.025 5%～0.026 8%之間，比較穩定。

3 結論

通過對傳統炮制工藝與新工藝兩種方法制得的熟地黃進行檢測比較，兩種方法制得的熟地黃的毛蕊花糖苷含量、浸出物含量及性狀均達到《中國藥典》2020年版一部的要求，陶瓷蒸煮罐傳統炮制法制得的熟地黃毛蕊花糖苷含量及浸出物含量略低，雙門蒸柜新方法制得的熟地黃其炮制工藝還不夠成熟，在性狀上還需進一步改進。

4 討論

對于熟地黃的炮制一直以來都秉承著古法炮制九蒸九曬的傳統，近來有研究發現，地黃在炮制加工后會產生異毛蕊花糖苷，且異毛蕊花糖苷的產生及變化受時間及溫度的影響較大該發現對地黃炮制機制的探討及炮制工藝的優化具有一定的參考意義。