高效液相色譜法測(cè)定米格來(lái)寧片的溶出度

解 鈺1，李嶸立1，宋 軍1，高宏娟

(1.山西省食品藥品檢驗(yàn)所，山西 太原 030031；2.大連理工大學(xué)，遼寧 大連 116024)

米格來(lái)寧片又名“安比咖片”，是由安替比林、咖啡因、枸櫞酸等組成的復(fù)方制劑，為解熱鎮(zhèn)痛藥。目前國(guó)內(nèi)米格來(lái)寧片共34家企業(yè)獲得批準(zhǔn)文號(hào)，有1種規(guī)格：每片含安替比林270 mg，咖啡因27 mg，枸櫞酸3 mg[1]。

對(duì)于固體制劑而言，溶出度測(cè)定能反映主藥的晶型、粒度、處方組成、輔料品種和性質(zhì)、生產(chǎn)工藝的差異等特征，既用于藥品一般質(zhì)量控制，也可用于評(píng)價(jià)各種制劑生物利用度的體外方法，已成為評(píng)價(jià)藥物制劑質(zhì)量的內(nèi)在指標(biāo)[2-7]。高效液相色譜法具有測(cè)定簡(jiǎn)便、快速、精確的特點(diǎn)，已被廣泛使用。米格來(lái)寧片現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》1963年版，標(biāo)準(zhǔn)中未規(guī)定溶出度檢查。本試驗(yàn)建立高效液相色譜法測(cè)定米格來(lái)寧片的溶出度，并繪制溶出曲線。

1 資料與方法

1.1 試劑與儀器

咖啡因?qū)φ掌?批號(hào)171215-201512，含量99.9%)與安替比林對(duì)照品(批號(hào)100506-201602，含量100%)購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；四氫呋喃、乙腈購(gòu)自北京迪科馬科技有限公司，水為實(shí)驗(yàn)室自制超純水。高效液相色譜儀(型號(hào)：Agilent 1200)購(gòu)自美國(guó)安捷倫公司；高效液相色譜儀(型號(hào)：Ultimate 3000)購(gòu)自美國(guó)戴安公司；全自動(dòng)溶出儀(型號(hào)：Agilent 708+850DS)購(gòu)自美國(guó)安捷倫公司。

共收集米格來(lái)寧片103批次，涉及6家生產(chǎn)企業(yè)。

1.2 溶液的制備

1.2.1 對(duì)照品溶液 取安替比林和咖啡因?qū)φ掌愤m量，精密稱(chēng)定，加水溶解并稀釋成含安替比林300 μg/mL、咖啡因30 μg/mL的溶液，作為對(duì)照品溶液。

1.2.2 供試品溶液 取待測(cè)樣品，照溶出度與釋放度測(cè)定法(《中國(guó)藥典》2015年版四部通則0931第二法)，以0.1 mol/L鹽酸溶液900 mL為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為50 r/min，依法操作，經(jīng)30 min時(shí)，取溶液濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

1.2.3 空白溶液 按處方量稱(chēng)取空白輔料淀粉、硬脂酸鎂、枸櫞酸、吐溫80等，置100 mL量瓶中，加水振搖溶解并稀釋至刻度，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

1.2.4 對(duì)照品儲(chǔ)備液 取安替比林和咖啡因?qū)φ掌愤m量，精密稱(chēng)定，加溶出介質(zhì)溶解并稀釋成含安替比林1.2 mg/mL、咖啡因0.12 mg/mL的溶液，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。

1.3 方法學(xué)考察

1.3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 采用Agilent-C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)；以醋酸鈉緩沖液(稱(chēng)取0.82 g無(wú)水醋酸鈉，加水溶解并稀釋至1 000 mL，加15 mL四氫呋喃和2 mL三乙胺，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH至6.0)-乙腈(85∶15)；流速為1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為275 nm；進(jìn)樣量10 μL。按安替比林計(jì)塔板數(shù)不低于3 000，分離度應(yīng)符合規(guī)定。

1.3.2 溶出方法的建立

1.3.2.1 溶出方法的選擇 米格來(lái)寧片屬于高溶解高滲透類(lèi)藥物(安替比林與咖啡因均屬于高溶解高滲透類(lèi)藥物)(屬BCS第Ⅰ類(lèi))，試驗(yàn)選用槳法。

1.3.2.2 轉(zhuǎn)速的選擇 取待測(cè)樣品，分別以50 r/min、75 r/min進(jìn)行轉(zhuǎn)速試驗(yàn)，依法操作，按照“1.3.1”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，結(jié)果表明樣品在75 r/min下溶出較快，且在8 min時(shí)已達(dá)峰值。通常認(rèn)為50 r/min與中老年人胃腸道蠕動(dòng)強(qiáng)度基本一致，而且溶出度試驗(yàn)應(yīng)采用較為緩和的轉(zhuǎn)速，使溶出方法具有更好的區(qū)分能力，因此轉(zhuǎn)速選擇50 r/min。

1.3.2.3 溶出介質(zhì)的選擇 取待測(cè)樣品，以pH1.0鹽酸溶液、pH4.5醋酸鹽緩沖液、pH6.8磷酸鹽緩沖液、水各900 mL作為溶出介質(zhì)，依法操作，按照“1.3.1”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，結(jié)果表明四者之間無(wú)顯著差異。結(jié)合人體胃部環(huán)境與溶出行為，選擇pH1.0鹽酸溶液(0.1 mol/L)作為溶出介質(zhì)。

1.3.2.4 取樣時(shí)間點(diǎn)的確定 分別于溶出開(kāi)始后的第3，8，15，30，45，60 min時(shí)，各取樣10 mL(同時(shí)補(bǔ)充同體積同溫度溶出介質(zhì))，用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，按照“1.3.1”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，計(jì)算累積釋放率。當(dāng)連續(xù)兩點(diǎn)溶出率均達(dá)85%，且差值在5%以內(nèi)，可作為采樣截點(diǎn)，故選擇取樣時(shí)間點(diǎn)為30 min。

1.3.3 方法學(xué)考察

1.3.3.1 專(zhuān)屬性試驗(yàn) 取“1.2.3”項(xiàng)下的空白溶液，按照“1.3.1”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定。結(jié)果顯示空白溶液在與安替比林與咖啡因相對(duì)保留時(shí)間處無(wú)色譜峰出現(xiàn)，不干擾主峰的測(cè)定，表明該方法專(zhuān)屬性良好，見(jiàn)圖1。

圖1 專(zhuān)屬性試驗(yàn)(吉林省銀河制藥有限公司，批號(hào)：171105)

1.3.3.2 線性關(guān)系考察 取“1.2.4”項(xiàng)下的對(duì)照品儲(chǔ)備液1，3，3.5，5，6.5，7，10 mL，分別置25 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得系列濃度的對(duì)照品溶液，按照“1.3.1”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定。以濃度(X)為橫坐標(biāo)，以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得安替比林回歸方程Y=0.212 1X+0.237 6(r=0.999 9，n=7)，咖啡因回歸方程Y=0.336 7X+0.028 9(r=0.999 9，n=7)。結(jié)果表明，安替比林在141.72～307.06 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系；咖啡因在16.72～31.04 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

1.3.3.3 準(zhǔn)確度試驗(yàn) 按處方比例分別取相當(dāng)于樣品標(biāo)示量60%、80%、100%的安替比林和咖啡因原料適量，精密稱(chēng)定，分別置500 mL容量瓶中，加入處方比例空白輔料，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液，按照“1.3.1”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，見(jiàn)表1，表2。

表1 安替比林準(zhǔn)確度試驗(yàn)

表2 咖啡因準(zhǔn)確度試驗(yàn)

1.3.3.4 精密度試驗(yàn) 取“1.2.1”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，按照“1.3.1”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，重復(fù)進(jìn)樣6次，安替比林的RSD為0.08%，咖啡因的RSD為0.17%，表明精密度良好。

2 結(jié)果

2.1 參比制劑的選擇 在6家企業(yè)中選擇綜合質(zhì)量較高的樣品作為參比制劑。溶出曲線考察表明，A企業(yè)在四種介質(zhì)中的溶出曲線相似程度最高，批間差異小，故選擇該企業(yè)樣品作為參比制劑。

2.2 樣品測(cè)定 采用f2因子分析其余5家生產(chǎn)企業(yè)與參比制劑的差異，其中B、C、D的f2因子大于50.0，溶出行為與A企業(yè)相似。

3 討論

本研究采用高效液相色譜法測(cè)定了米格來(lái)寧的溶出量，結(jié)果表明該方法靈敏簡(jiǎn)便，專(zhuān)屬性強(qiáng)，結(jié)果準(zhǔn)確，適用于測(cè)定該制劑中米格來(lái)寧的含量，為建立體外相關(guān)性提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。