龍蒲定神丸對小鼠行為學的影響及其急性毒理學研究

袁岳鵬，宏亞麗，萬美霞，吳國泰

(1.慶陽市人民醫院，甘肅 慶陽 745000；2.隴東學院，甘肅 慶陽 745000；3.甘肅中藥藥理與毒理學重點實驗室,甘肅 蘭州 730000)

1 材料與方法

1.1 實驗動物

昆明種小鼠，SPF級，體重20±2g，雌雄各半，由甘肅中醫藥大學實驗動物中心提供，動物質量合格證號：SCXK(甘)2011-0004，喂食標準飼料(由甘肅中醫藥大學實驗動物中心提供)，飼養溫度：20±2℃，相對濕度：60%-70%，適應環境7d后開始實驗。

1.2 藥品與試劑

DSW(DSW，慶陽市第二人民醫院制，甘藥制字Z7101638)口服，成年人每次10g，每天2次。處方為龍齒、磁石、珍珠母各30g，三棱、莪術、天竺黃、棗仁、遠志、柴胡、香附、牡丹皮、黃連各10g，當歸、合歡皮、節菖蒲、寒水石各15g，蜈蚣3條，琥珀(沖服)3g。

小鼠受試物的制備：取DSW 28.6g，研磨成粉末，加150ml蒸餾水浸泡過夜，超聲提取30min，過濾，取上清液，蒸餾水定容至100ml，作為高劑量受試品；取高劑量受試品減半稀釋，為中劑量受試物；取中劑量受試品減半稀釋，為低劑量受試物。

戊巴比妥鈉(北京普博斯生物科技有限公司提供)，養血安神片(國藥準字Z14020770，亞寶藥業集團股份有限公司，批號121203)。

1.3 主要儀器

ZZ-6型小鼠自主活動測試儀(成都泰盟科技有限公司)；Sartorius電子天平(北京賽多利斯有限公司)；BA-200型小鼠避暗儀(成都泰盟科技有限公司)；超聲波清洗器(上海冠特超聲儀器有限公司)。

2 方法

2.1 DSW對小鼠自主活動的影響

昆明小鼠60只，雌雄各半，隨機分為5組，陰性對照組、陽性對照組(養血安神片)、DSW高、中、低劑量組，每組12只。給藥劑量：陽性對照組小鼠灌胃養血安神片(2.36g·kg-1)；DSW高、中、低劑量組分別灌胃DSW(5.71g·kg-1、2.86g·kg-1和1.43g·kg-1)；陰性對照組小鼠灌胃等容量生理鹽水。每天1次，連續給藥3d，末次給藥前均禁食8h。于給藥前60min和末次給藥60min后，將小鼠于PM 8:00～22:00逐一放入ZZ-6型小鼠自主活動測試儀中，適應環境5min后，記錄5min內各組小鼠的自主活動量和站立次數[1,2]。

2.2 DSW對小鼠避暗實驗的影響

動物分組、給藥劑量及給藥方式同“2.1 DSW對小鼠自主活動的影響”項下，每天1次，連續給藥3d，末次給藥60min后，將小鼠放入BA-200型小鼠避暗儀中，適應環境5min后，記錄小鼠第一次從明室進入暗室的逃避潛伏期及5min內受到電擊的總次數(即犯錯次數)[3-5]。

2.3 DSW對戊巴比妥鈉催眠作用的影響

動物分組、給藥劑量及給藥方式同“2.1 DSW對小鼠自主活動的影響”項下，每天1次，連續給藥7d。末次給藥60min后，各組小鼠分別腹腔注射戊巴比妥鈉35mg·kg-1(預實驗中得到的使80%的小鼠翻正反射不消失的最大劑量)。觀察并記錄入睡小鼠數量(15min內小鼠翻正反射消失大于等于1min的小鼠數作為入睡動物數)和入睡率，同時記錄注射戊巴比妥鈉后，小鼠從出現翻正反射到翻正反射消失的這段時間為睡眠潛伏期[6-8]。

2.4 急性毒性實驗

2.5 統計學分析

3 結果

3.1 DSW對小鼠自主活動的影響

與陰性對照組比較，陽性對照組和DSW高劑量組小鼠自主活動量和站立次數明顯降低，差異有統計學意義(P<0.05或P<0.01)；DSW低劑量組小鼠站立次數明顯減少，與陰性對照組比較，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 DSW對小鼠自主活動的影響

3.2 DSW對小鼠學習記憶的影響

與陰性對照組比較，陽性對照組和DSW高、中劑量組小鼠受電擊的次數(犯錯誤次數)明顯降低，差異有統計學意義(P<0.05或P<0.01)；陽性對照組和DSW中、低劑量組小鼠逃避潛伏期(記憶時間)較短，與陰性對照組比較，差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 DSW對小鼠學習記憶的影響

3.3 DSW對戊巴比妥鈉催眠作用的影響

與陰性對照組比較，陽性對照組和DSW各劑量組小鼠入睡率均有不同程度的增加，陽性對照組和DSW高、中劑量組差異有統計學意義(P<0.05或P<0.01)；陽性對照組和DSW各劑量組小鼠入睡潛伏期明顯縮短，與陰性對照組比較，差異有統計學意義(P<0.05或P<0.01)，見表3。

表3 DSW對戊巴比妥鈉催眠作用的影響

3.4 急性毒性實驗

DSW給藥劑量2.86g·kg-1、11.44g·kg-1、34.32g·kg-1給藥，持續觀察14d，小鼠飲食、活動均未出現異常，皮毛膚色、大小便未見異常，未見動物死亡，無法測得DSW小鼠灌胃LD50；與對照組相比，給藥組小鼠體重增加差異無統計學意義(P>0.05)，結果見表4。

表4 DSW對小鼠體重的影響

4 討論

精神分裂癥是一種復雜性腦病，其病因及發病機制目前仍然不清楚。現代醫學藥物治療雖然取得了確切療效，但出現了藥物依賴等諸多副作用，近年來諸多中醫學者致力于中醫藥治療精神分裂癥，已取得了可喜的臨床療效。DSW是慶陽市第二人民醫院的純中藥復方院內制劑，前期臨床研究發現，該方劑輔助治療妄想型精神分裂癥取得良好治療效果，且復發率低。對DSW組方主要藥物的現代中藥藥理學研究發現：磁石、香附、龍齒、牡蠣對中樞神經系統有一定的抑制作用，具有鎮靜催眠作用；龍齒、黃連具有保護和恢復腦損傷神經的作用；莪術可增強學習記憶[11]。

本研究旨在觀察DSW對小鼠的行為學(小鼠自主活動、學習記憶、鎮靜催眠)的影響并考察其急性毒性，為DSW的臨床應用提供參考。結果顯示：DSW能改善小鼠的自主活動、增強學習記憶，并具有鎮靜催眠作用，且毒性甚小，在規定劑量范圍內應用是安全可靠的，值得臨床推廣。對DSW治療精神分裂癥的機制是通過多巴胺D2受體還是5-HT受體系統的問題還有待進一步研究。