不同人群血小板抗體篩查結果的研究分析

馬愛萍，馬國寧，張海紅，劉 倩，馮曉榮，張玉春，王明祿

(1.甘肅省紅十字血液中心輸血研究所,甘肅 蘭州 730070；2.中源協和細胞基因工程有限公司甘肅分公司，甘肅 蘭州 730070)

血小板輸注是臨床上重要的支持療法，常用于預防和治療血小板減少或血小板功能缺陷患者的出血。然而患者在多次輸注血小板后，可產生血小板相關抗體，導致血小板輸注無效。《臨床輸血技術規范(2019版)》(征求意見稿)第4.5.2條中明確規定“輸注血小板時宜進行血小板抗體篩查，抗體陽性時申請配合性血小板輸注。”為了預防血小板輸注無效，保證患者的輸血安全，節約寶貴的血液資源，指導臨床合理用血，我們對93名孕產婦、166名患者、90名機采血小板捐獻者、80份臍血樣本進行了血小板抗體篩查，以分析不同人群血小板抗體陽性率及其影響因素。

1 材料與方法

1.1 檢測對象

選取甘肅省紅十字血液中心輸血研究所接收的166份患者標本，這些患者是臨床送檢的免疫性血液病患者，主要是多次輸血的溶血性貧血和自身免疫性疾病、疑難配血、血小板輸注無效(platelet transfusion refractoriness,PTA)等患者標本。93名孕產婦主要是RhD陰性的多胎次孕產婦。血液中心50人份無輸血史和妊娠史的機采血小板捐獻者的標本。80份臍血來自中源協和細胞基因工程有限公司甘肅臍血庫冷凍保存的臍血血漿，抽取首胎產婦的臍血。

1.2 檢測試劑

血小板抗體篩查和交叉配型試劑盒(固相凝集法)主要由廣東睿基生物公司提供，其他的對照試劑有荷蘭Sanquin和長春博德同類產品。

1.3 操作方法

1.3.1 檢測前準備

(1)患者樣本:5mL患者紅頭無添加劑管3000轉離心10分鐘；

(2)機采血小板樣本稀釋5倍，也可以取5mL獻血者EDTA-K2抗凝血，200g離心10分鐘；

(3)取出試劑室溫放置半小時。

1.3.2 樣本檢測

(1)取出兩條微孔板條，標記陰性對照、陽性對照、患者抗體篩查孔；

(2)在陰陽性對照和患者抗篩孔中加入50微升PC(抗篩血小板)；

(3)50RCF離心5分鐘使血小板固定到微孔板表面，用PBS/TWeen洗板3次去掉未結合的；

(4)加入2滴(100微升)紫色LISS液，在陰陽性對照孔中加入陰陽性對照，在抗篩孔中加入患者血清50微升封板膜封板，輕輕混勻；

(5)置37℃孵育30分鐘，然后用PBS/TWeen洗板5次，立即每孔加入1滴抗人IgG試劑，然后加入指示紅細胞，輕輕震蕩后，立即200g離心5分鐘。

1.4 結果判讀

陰性反應：紅細胞在微孔板底形成小小的細胞扣，表明血清中不存在血小板抗體和人類白細胞抗原(human leukocyte antigen，HLA)抗體。

強陽性或弱陽性反應：紅細胞在微孔底部形成均勻分布的一層紅細胞，表明血清中存在血小板抗體或HLA抗體。強陽性和弱陽性判斷是根據實際工作進行細分的。強陽性指紅細胞占底部園一半以上的面積，弱陽性指紅細胞占底部園一半以下的面積。

1.5 統計學處理

采用SPSS 20.0進行數據分析，計數資料以頻率及百分率表示，組間比較采用卡方檢驗，P<0.0083(0.05/6)為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同人群的血小板抗體檢測結果見表1

表1 不同人群的血小板抗體檢測結果

166份血液患者的血小板抗篩強陽性率為(46/166)27.7%，弱陽性率為22.3%，總陽性率為50.0%。93名2胎以上的RHD陰性孕產婦血小板抗篩強陽性率為(22/93)23.7%，弱陽性率為(13/93)14.0%，總的陽性率為(35/93)37.7%。80名臍血的血小板抗體弱陽性率為(2/80)2.5%。50份血小板獻血者的血小板抗體陽性率為0%。

2.2 不同組血小板抗體總陽性率兩兩比較結果

按檢驗水準α’=0.0083，臍血組、血小板捐獻者組的血小板陽性率均有差別；RhD陰性孕產婦組與臍血組、血小板捐獻者組的血小板陽性率均有差別。但還不能認為免疫血液病患組與RhD陰性孕產婦組的陽性率有差別，也不能認為血小板捐獻者組與臍血組的陽性率有差別。見表2。

表2 不同組血小板抗體總陽性率兩兩比較

3 討論

血小板參與維持血管完整性，在止血及血栓形成、固有免疫應答和淋巴系統的發育等方面有重要作用。在人體生理或疾病過程中，血小板主要通過聚集、黏附以及釋放止血因子、生長因子和細胞因子等來發揮作用。但血小板具有復雜的抗原系統，一類是ABO血型系統抗原和人類白細胞抗原(human leukocyte antigen，HLA)等血小板相關抗原，另一類是血小板特異性抗原(human platelet antigen，HPA)。反復輸血及多次妊娠者容易產生血小板抗體，引起PTR(platlet transfusion refractoriness,血小板輸注無效)、FNAIT(fetal and neonatal alloimmune thrombocytopenia，胎兒和新生兒同種免疫性血小板減少癥)等疾病，以及NHTR(non-hemolytic transfusion reaction，非溶血性發熱反應)、PTP(post-transfusion purpura，輸血后紫癜等輸血不良反應[1]。

本文中的臍血是正常孕產婦臍血血漿，產婦生產胎次均為1胎，由于IGG抗體能夠通過胎盤屏障，所以臍血中的血小板抗體能夠代表產婦體內的抗體情況，說明正常產婦的血小板抗體陽性率約為2.5%，而RhD陰性產婦組是2～5次的多胎次或有流產史的產婦，其血小板抗體陽性率為37.7%。RhD陰性產婦組與臍血組、血小板捐獻者組的抗體陽性率有顯著性差異，P<0.0083,說明隨著妊娠次數增加，血小板抗體陽性率也在增高，與國內文獻報道結果基本一致[2-5]，進一步證實了血小板抗體與妊娠次數和流產的相關性。

本文中的166名免疫性血液病患者大部分有多次輸血史，輸注過的血液產品包括血小板、紅細胞和血漿等。這組人群血小板抗體陽性率與血小板捐獻者、臍血組比較的抗體陽性率有顯著性差異，P<0.0083，說明隨著輸血次數的增多，血小板抗體陽性率也增大。這與國內文獻報道相一致[6-7]。

本文中的機采血小板獻血者主要是無妊娠史和輸血史的年輕人，所以未檢出血小板抗體，進一步印證了血小板抗體產生與妊娠和輸血的關系。獻血者血小板抗體的篩查，有助于評估機采血小板的安全性。

通過對不同人群開展血小板抗體檢測，說明血小板抗體產生的主要誘因是多次妊娠和多次輸血，這為我們落實新的臨床技術規范的要求做好了準備，也有助于臨床有針對性地對高風險人群開展血小板抗體檢測。血小板抗體陽性患者需要輸注血小板時進行交叉配型，選擇配合型血小板進行輸注，從而提高臨床血小板療效。