化痰解郁湯對CUMS 抑郁癥模型大鼠HPA 軸的影響

李 慶，張 慧，馮衛(wèi)星，楊東東

（1.陜西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，陜西 咸陽 712000；2.成都中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，成都 610072）

抑郁癥又稱之為抑郁障礙（depressive disease，DD），是臨床中常見的心理疾病，為多因素致病，主要表現(xiàn)為持久而顯著的心境低落[1]。大部分患者表現(xiàn)為低落的情緒與其處環(huán)境不相符，終日悶悶不樂，心情低落消極，中重度患者可有悲痛欲絕，自卑自閉，部分患者有自殺的想法和行動；部分患者同時合并有焦慮和沖動等異常行為；嚴重的抑郁障礙患者會出現(xiàn)視聽幻覺以及被害妄想等精神癥狀。因其高發(fā)病率、高復發(fā)率、高疾病負擔及高自殺率而備受關注[2]。我國每年因抑郁障礙產生的經濟擔負高達數(shù)百億元人民幣。目前，我國因精神障礙類疾病和自殺導致的疾病負擔已經占到疾病總負擔的第一位[3]。

近年來，中醫(yī)藥治療抑郁癥的療效與機制研究取得了可喜的成就[4]。化痰解郁湯是楊東東教授治療痰熱郁結型郁證的經驗方[5-6]，具有清熱化痰，行氣解郁的作用。本實驗采用目前學術界公認的CUMS 抑郁癥模型大鼠，從ACTH and CORT 進一步探究化痰解郁湯治療抑郁癥的可能作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 從成都達碩實驗動物養(yǎng)殖有限公司購買成年健康SD 大鼠40 只，體質量（190±20）g。許可證號：SCXK（川）2013.24，合格證書號：0015979。化痰解郁湯(藥物購買于成都中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院中藥房)由黃連3 g，夜交藤、酸棗仁各20 g，陳皮、茯苓、積實、竹茹、白芍、石菖蒲、柏子仁各15 g，生甘草5 g 組成。熬制濃縮為中藥藥液，放置在4 ℃冰箱中儲存。鹽酸氟西汀膠囊（百優(yōu)解）由PatheOn France 生產，批號：J20130010。大鼠CORT、ACTH 酶聯(lián)免疫分析ELISA 試劑盒，上海廣銳生物科技有限公司，批號分別為20151023、2015021。

1.2 實驗方法

1.2.1 分組及造模 大鼠適應性飼養(yǎng)1 周后，5%苦味酸溶液標記，采用SPSS 19.0 將40 只大鼠隨機分為:A對照組、B模型組、C鹽酸氟西汀組、D化痰解郁湯組。根據(jù)有關文獻[7]報道的CUMS 方法造模。對照組正常飼養(yǎng)，其他各組均接受長達21 d 的慢性不可預見溫和刺激。第1 周：前3 d 每天游泳20 min，后3 d 每天游泳40 min；第2 周：接受包括足底部電擊（40 V 電壓，每次10 s，每間隔50 s 刺激1 次，電擊30 次）、熱應激（45 ℃，15 min）、夾尾（距大鼠尾根1 cm 處，止血鉗持續(xù)1 min）、冰水游泳（4 ℃，5 min）等環(huán)境刺激；第3 周：通過禁飲、禁食、擁擠、燈光的明暗交替（黑暗1 h，照明1 h，進行12 h）、晝夜顛倒等刺激組成的慢性中等不可預見的溫和刺激，直至造模結束。

1.2.2 藥物干預 對照組可自由進食、攝水，避免刺激；模型組予以氯化鈉注射液（0.9%）3 mL/d；化痰解郁湯組及氟西汀組予以16 g/（kg·d）；各組分別給予生理鹽水或相應藥物16 g/（kg·d），連續(xù)灌胃21 d。根據(jù)《藥理實驗方法學》[8]中的公式計算大鼠給藥劑量，人與大鼠的有效劑量換算系數(shù)為6.3，人的標準體質量按60 kg 計算。化痰解郁湯（生藥）：成人每日用藥劑量：153 g÷60 kg=2.55 g/kg，大鼠每日用藥劑量＝2.55 g/kg×6.3 ≈16 g/kg。

1.2.3 體質量稱量 藥物干預期實驗第4 周、第5 周、第6 周用電子稱稱取大鼠的體質量。

1.2.4 行為學觀察 曠箱試驗（Open-f ieldTest）：實驗大鼠分別放入體積為800 mm×800 mm×400 mm 的曠箱內，且曠箱四周均為黑色不能透光，曠箱底面用白色線條區(qū)分為25 個160 mm×160 mm 的正方形。將各組每只實驗大鼠分別置于曠箱正中央格子后開始測定，以大鼠3 min 總共穿越箱底部方塊的數(shù)量作為水平運動得分，活動時出現(xiàn)的前腳抬離箱底站立的次數(shù)作為垂直活動得分，每只大鼠測評完畢后將大鼠排泄物清理干凈并除味后，方可再進行下一只的測評，實驗過程錄像。蔗糖溶液（1 %）消耗量：實驗前各組大鼠均禁食禁飲24 h，給予蔗糖溶液（1 %）自由攝取1 h 后撤去，大鼠1 h 飲用1 %蔗糖溶液的量為計算前后水瓶的重量的差值得到。最后計算大鼠飲入1 %蔗糖溶液的量為：消耗1 %蔗糖溶液的量（mg）/動物體質量（g）。

1.2.5 血清 ACTH 及 CORT 含量測定 在實驗第42天，大鼠股動脈留取血液5 mL，置于含有10 %EDTA.NA230 μL和抑肽酶40 μL的試管中，設置離心機為4 ℃，轉速設定為3 000 r/min，共離心10 min，分離出血漿，儲存在-20 ℃冰箱中，使用Elisa 試劑盒，根據(jù)說明書按步驟操作以測定標本中ACTH 和CORT 的含量。

2 結果

2.1 大鼠體質量變化 見表1。

2.2 大鼠行為學變化 曠場試驗（Open-f ieldTest ）見表2、表3。

表1 各組大鼠干預階段體質量的比較（） g

表1 各組大鼠干預階段體質量的比較（） g

注：與對照組的比較，# P ＜0.05；與模型組的比較，△P ＜0.05

表2 各組大鼠干預階段水平活動比較（） 次/3 min

表2 各組大鼠干預階段水平活動比較（） 次/3 min

注：與對照組比較，# P ＜0.05；與模型組比較，△P ＜0.05

表3 各組大鼠干預階段垂直活動比較（） 次/3 min

表3 各組大鼠干預階段垂直活動比較（） 次/3 min

注：與對照組比較，# P ＜0.05；與模型組比較，△P ＜0.05

2.3 蔗糖水消耗量 見表4。

表4 各組大鼠干預階段糖水消耗量比較（） mg/g

表4 各組大鼠干預階段糖水消耗量比較（） mg/g

注：與對照組比較，# P ＜0.05；與模型組比較，△P ＜0.05

2.4 各組大鼠血清ACTH、CORT 含量變化 見表5。

表5 各組大鼠血清ACTH、CORT 的比較（） ng/L

表5 各組大鼠血清ACTH、CORT 的比較（） ng/L

注：與對照組比較，# P ＜0.05；與模型組比較，△P ＜0.05

3 討論

抑郁癥模型大鼠大約20 余種，根據(jù)不同的建模方法，可將其分為應激化模型、孤養(yǎng)和隔離動物模型、基因敲除改造動物模型、神經生化功能轉化模型等[9]。在這些不同方法中與臨床抑郁癥患者病因相比較相似的是應激抑郁模型。20 世紀90 年代Willner[10]在Katz[11-12]提出的慢性不可預見性的應激模型（CUS）基礎上發(fā)展了CUMS 抑郁癥模型，其對造模方案的優(yōu)化主要體現(xiàn)在明顯降低了應激因子的強度，減少了造模過程大鼠的死亡率。其在模型的評價上以大鼠快感缺乏與否作為標準。CUMS 抑郁癥模型建造需要花費較多的時間，工作繁瑣，給研究者帶來較大的壓力[13]。但因為該抑郁癥模型能更好的模擬人類在抑郁中的快感缺失等核心癥狀，同時能夠很好的模擬重型抑郁障礙患者的社會交際能力下降、探索行為能力減少、性功能障礙等臨床表現(xiàn)。通過代謝組學、大鼠海馬形態(tài)學及神經元糖皮質激素受體的表達也已證實[14-16]CUMS抑郁模型較其他抑郁大鼠模型具有更好的成效，造模成功后大鼠所表現(xiàn)出的抑郁癥狀可持續(xù)數(shù)月之久，符合抑郁模型的要求，可以作為研究抑郁障礙的理想動物模型，同樣此模型被國內外文獻廣泛采用[17]。

中醫(yī)典籍中沒有抑郁癥病名的明確記載，根據(jù)抑郁癥臨床癥狀判斷，與中醫(yī)情志疾病“郁證 ”相似。總結歸納本病病因為臟腑功能失調[18]，與先天稟賦，飲食不節(jié)，生活創(chuàng)傷等相關，主要病機可歸納為氣機郁滯，情志不暢。脾胃歸屬于中焦，升清依賴于脾，降濁則主要為胃所主，二者共主氣機之升降。氣機失司，可進一步導致了肝之疏泄功能障礙，脾不能運化水谷，化生精血，心失所養(yǎng)，臟腑功能失去平衡。病位在肝，但與脾、胃、心、腎等臟器密切關聯(lián)，五臟皆參與情緒的調節(jié)[19]。郁證初起病理屬性多為實，病久則可見虛或虛實兼夾。郁證初始，主要為氣機郁滯，但常兼瘀邪，易化火夾雜痰及食滯等，即屬實證。病久則可由實轉虛，治療上實證當以疏肝解郁，健脾清熱，化痰解郁，行氣安神為法。化痰解郁湯可清熱化痰，行氣安神。

抑郁癥的發(fā)生發(fā)展中，神經遞質釋放異常、氧化應激反應和炎癥[20-21]及腦神經元突觸結構與功能障礙均參與其中[22]。近年來關于腦源性神經生長因子（BDNF）能同時調控多條與抑郁癥發(fā)生相關的信號通路[23]也得到了高度重視。同時抑郁癥與認知功能障礙相關，有學者就其內在機制做了探究[24]。有研究證實[25]在抑郁癥患者的血漿中皮質醇水平較正常人群增高明顯，反應出抑郁癥患者的HPA 軸功能亢奮。本研究中通過對大鼠 HPA 軸激素水平變化的探究，發(fā)現(xiàn)模型組較對照組血清中ACTH、CORT 含量顯著增高，證實了抑郁癥模型大鼠存在HPA 軸功能亢進。在與模型組比較中，化痰解郁湯組大鼠血清中 ACTH、CORT含量顯著降低。這也可以說明，化痰解郁湯可能通過矯正功能亢進的HPA 軸發(fā)揮其抗抑郁療效。對于郁證應做到未病先防，已發(fā)早治，防止傳變，采取情志疏導、針藥結合等方法綜合治療，預防病情反復發(fā)作，遷延不愈[26-27]。中醫(yī)藥對于疾病的治療具有多途徑、多部位、多靶點的作用。化痰解郁湯能治療抑郁癥除能糾正HPA 軸亢進外，是否還存在其他干預機制，尚需進一步研究。