蒲公英不同溶劑提取物對果蔬采后幾種病原真菌的體外抑制作用

賀建華 賈小慧 宋海慧 閻懷穎

摘要：以純化水和100%乙醇為提取溶劑，對采自永登武勝驛鎮的野生蒲公英全草進行浸提，從浸膏得率、菌絲生長抑制率及孢子萌發抑制率三個方面，探討了不同溶劑提取物對果蔬采后幾種病原真菌的體外抑制效果。結果表明：醇提取法浸膏得率高于水提取法，高出31.2%;隨著蒲公英醇提取物濃度的增加，擴展青霉、鏈格孢、鐮刀菌、灰葡萄孢、葡枝根霉菌絲抑制率均在不斷的提升，隨著蒲公英水提取物濃度的增加，擴展青霉、鏈格孢、鐮刀菌、灰葡萄孢菌絲抑制率均在不斷的提升，但葡枝根霉菌絲抑制率先隨著水提取物濃度的增加而增加，當水提物濃度增加到20mg/mL以上時，菌絲抑制率變化不明顯;80mg/mL的蒲公英水提取物對鐮刀菌、灰葡萄孢的菌絲生長及孢子萌發抑制率均在82%以上;80mg/mL的蒲公英醇提取物對擴展青霉、鏈格孢、葡枝根霉的菌絲生長及孢子萌發抑制率均在63%以上。

關鍵詞：蒲公英;不同溶劑提取物;果蔬采后病原菌;體外抑菌

中圖分類號：S436.3;S436.5文獻標志碼：A

0 引言

我國作為世界果蔬生產大國，因采后處理技術和管理措施未能及時跟進，造成每年約有25%的產品因腐爛變質而被白白浪費，進而造成了一定的環境壓力[]。統計結果進一步顯示，采后由病原真菌引起的果蔬損失率達到了30%[2]。造成果蔬采后腐爛的病原真菌主要有青霉屬（penieillum sp.）、鏈格孢屬（Alternaria sp.）、葡萄孢屬（Botlyris sp.）以及根霉屬（Rhizopus sp.）[3]。目前，化學方法可有效控制果蔬病害，但也伴隨著產生了病原菌抗藥性、藥物殘留以及環境污染等問題[4]。因此，綠色安全的天然果蔬防腐劑的開發利用必將成為一種新型的發展趨勢[5]。

蒲公英是一種常用于臨床的野生中藥材，隸屬于菊科。經測定發現全草含有甾醇、皂苷、多酚、類黃酮、多糖等多種活性成分[6]，具有抗菌消炎等功效。研究表明，蒲公英提取液對細菌[7]以及真菌[8]等均具有一定的抑制作用。蒲公英提取液對植物源病原真菌的抑制作用研究主要集中在板栗疫病菌、萵苣霜霉病、黃瓜霜霉病[8]，蘑菇根霉、番茄灰霉菌、蘑菇青霉菌[9]等病原物上。而對引起果蔬采后腐爛的幾種常見病原菌未見相關報道。因此，本研究探討了不同溶劑提取物對擴展青霉（Penicillium expansum）、鏈格孢（Alternaria alterna-ta）、鐮刀菌（Fusarium sulphureum）、灰葡萄孢（Botrytiscinerea）、葡枝根霉（Rhizopus stolonifer）的體外抑制作用，以期為蒲公英的不斷開發利用提供理論依據，為果蔬采后病害的控制提供新的參考方法。

1材料與方法

1.1試驗材料

帶根野生蒲公英于8月18日采摘自永登武勝驛鎮;試驗所用菌株擴展青霉（Penicillium expansum）、鏈格孢（Alternaria alternata）、鐮刀菌（Fusarium sulphure-um）、灰葡萄孢（Botrytis cinerea）、葡枝根霉（Rhizopusstolonifer）均由甘肅農業大學園藝學院分離保存。

1.2試驗方法

1.2.1蒲公英預處理

參照馬井喜等[方法并作修改。將去除雜質的蒲公英，在65℃恒溫干燥箱中干燥至恒重，粉碎后過60目篩，放于-20℃冰箱保存備用。

1.2.2蒲公英水提取物

參照王留等"的方法并作修改。取預處理好的蒲公英粉末150g，按照料水比1：25的比例加純化水浸泡12h，之后在80℃的水浴條件下浸提5h，提取4次，合并4次的浸提液，將浸提液用四層紗布進行過濾，之后用旋轉蒸發儀將過濾液濃縮成浸膏，最后將浸膏置于4℃冰箱保存備用。

1.2.3蒲公英醇提取物

參照劉海燕等[2并作修改。取預處理好的蒲公英粉末150g，按照料液比1：25的比例加100%的乙醇浸泡12h，之后在80℃的水浴條件下浸提5h，提取4次，合并4次的浸提液，將浸提液用四層紗布進行過濾，之后用旋轉蒸發儀將過濾液濃縮成浸膏，最后將浸膏置于4℃冰箱保存備用。

1.2.4蒲公英提取物對菌絲生長抑制的影響

參照孟雅君[的方法并作修改。將擴展青霉、鏈格孢、鐮刀菌、灰葡萄孢、葡枝根霉5種菌種在PDA培養基上連續培養幾代，實驗前7d再活化一次。用0.6cm的打孔器將供試菌株打成菌餅備用。將蒲公英浸膏分別用100%乙醇配置成初始濃度為0.075g/mL、0.15g/mL、0.3g/mL、0.6 g/mL、1.2g/mL的藥液，緊接著將藥液用細菌過濾器過濾，隨后各吸取1mL加入到14mL的PDA培養基中使其混勻倒成平板，此時，藥濃度即為5mg/mL、10mg/mL、20mg/mL、40mg/mL、80mg/mL。同時設置溶劑對照。將長有菌落的菌餅朝下放置在平板中央，每個培養皿接種一個菌餅，重復9次。在25℃培養箱中培養7d后用十字交叉法測定菌落直徑。菌絲生長抑制率用下列公式計算。

1.2.5蒲公英提取物對孢子萌發的抑制作用

參照戴岳等[14]的方法。將配置好的孢子懸浮液10pL分別均勻涂布到蒲公英提取物濃度為80mg/mL的PDA平板上（9cm），在25℃的培養箱中培養48h，隨后在顯微鏡下觀察孢子萌發數，每個處理重復3次。計算孢子萌發率和孢子抑制率。

2結果與分析

2.1蒲公英不同提取物得率比較

從浸膏得率可以看出，100%乙醇的提取得率高于水提取得率，兩種提取物的得率分別為12.45%和9.49%，醇提取法得率比水提取法高出31.2%。試驗時發現醇提法過濾速度較水提法快，整體用時較短，同時提取率也高于水提法，因此，可選擇100%乙醇對蒲公英進行提取。王超群等研究發現醇提法用時較短，但提取物的得率低于水提取法，造成差別的原因可能與所用的提取工藝不同有關，見表1所列。

2.2不同濃度的蒲公英提取物對供試菌種菌絲生長活性的影響

由表2可以看出，不論是醇提取物還是水提取物，均對供試菌絲的生長產生一定的抑制作用。同時，隨著蒲公英醇提取物濃度的增加，擴展青霉、鏈格孢、鐮刀菌、灰葡萄孢、葡枝根霉菌絲抑制率均在不斷的提升，隨著蒲公英水提取物濃度的增加，擴展青霉、鏈格孢、鐮刀菌、灰葡萄孢菌絲抑制率均在不斷的提升，但葡枝根霉菌絲抑制率先隨著水提取物濃度的增加而增加，當水提物濃度增加到20mg/mL以上時，菌絲抑制率變化不明顯。

對擴展青霉而言，醇提取物的菌絲抑制率高于水提取物，當提取物濃度達到80mg/mL時，水提取物的菌絲抑制率為45.51%，而醇提取物的菌絲抑制率達到了為82.10%;對鏈格孢而言，醇提取物的菌絲抑制率高于水提取物，當提取物濃度達到80mg/mL時，水提取物的菌絲抑制率為54.49%，而醇提取物的菌絲抑制率為63.11%;對鐮刀菌而言，水提取物的菌絲抑制率高于醇提取物，當提取物濃度達到80mg/mL時，水提取物的菌絲抑制率為88.36%，而醇提取物的菌絲抑制率僅為46.87%;對灰葡萄孢而言，水提取物的菌絲抑制率高于醇提取物，當提取物濃度達到80mg/mL時，水提取物的菌絲抑制率為89.92%，而醇提取物的菌絲抑制率僅為66.02%;對葡枝根霉而言，醇提取物的菌絲抑制率高于水提取物，當提取物濃度達到80mg/mL時，水提取物的菌絲抑制率為30.37%，而醇提取物的菌絲抑制率達到了87.24%。

綜上所述，較醇提物相比，蒲公英水提取物對鐮刀菌、灰葡萄孢的菌絲生長可發揮較好的抑制作用，且在濃度達到80mg/mL時，水提取物對灰葡萄孢的抑制作用（89.92%）>鐮刀菌的抑制作用（88.36%）。與水提物相比，蒲公英醇提取物對擴展青霉、鏈格孢、葡枝根霉可發揮較好的抑制作用，且在濃度達到80mg/mL時，醇提取物對葡枝根霉的抑制作用（87.24%）>擴展青霉的抑制作用（82.10%）>鏈格孢的抑制作用（63.11%）。這也表明蒲公英不同溶劑提取物可對不同的菌種表現出不同的抑制作用。王超群等[15]在研究蒲公英醇提法、水提法及超聲波法3種方法對黃瓜灰霉病菌的抑制作用時，研究發現乙醇提取所得的蒲公英活性成分更有利于對擴展青霉發揮抑制作用;也有研究發現蒲公英水提物對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌等表現出較強的抑制作用，而蒲公英醇提物對炭疽桿菌等菌種有很好的抑制作用161。因此，在以后的研究中，還需要針對不同菌種選用適合的提取方法，以期使活性成分能最大限度地發揮作用。

2.3蒲公英提取物對供試菌種孢子萌發的抑制作用

由表3可以看出，80mg/mL的蒲公英水提取物和醇提取物均可對供試菌種的孢子萌發產生一定的抑制作用。較醇提物而言，80mg/mL的蒲公英水提取物對鐮刀菌和灰葡萄孢的孢子萌發可產生較好的抑制作用，抑制率分別為82.32%和88.67%;和水提物相比，80mg/mL的蒲公英醇提取物對擴展青霉、鏈格孢、葡枝根霉的孢子萌發抑制較好，其對葡枝根霉的孢子萌發抑制率（89.24%）>擴展青霉（75.65%）>鏈格孢（72.61%）。

3結論

（1）從浸膏得率可以看出，醇提取法浸膏得率高于水提取法，浸膏得率達到了12.45%，比水提取法高出31.2%。

（2）隨著蒲公英醇提取物濃度的增加，擴展青霉、鏈格孢、鐮刀菌、灰葡萄孢、葡枝根霉菌絲抑制率均在不斷的提升，隨著蒲公英水提取物濃度的增加，擴展青霉、鏈格孢、鐮刀菌、灰葡萄孢菌絲抑制率均在不斷的提升，但葡枝根霉菌絲抑制率先隨著水提取物濃度的增加而增加，當水提物濃度增加到20mg/mL以上時，菌絲抑制率變化不明顯。

（3）蒲公英不同溶劑提取物可對不同菌種的菌絲生長表現出不同的抑制作用。蒲公英水提取物對鐮刀菌、灰葡萄孢的菌絲生長可發揮較好的抑制作用，且在濃度達到80mg/mL時，水提取物對灰葡萄孢的抑制作用（89.92%）>鐮刀菌的抑制作用（88.36%）。與水提物相比，蒲公英醇提取物對擴展青霉、鏈格孢、葡枝根霉可發揮較好的抑制作用，且在濃度達到80mg/mL時，醇提取物對葡枝根霉的抑制作用（87.24%）>擴展青霉的抑制作用（82.10%）>;鏈格孢的抑制作用（63.11%）。

（4）80mg/mL的蒲公英水提取物和醇提取物均可對供試菌種的孢子萌發產生抑制作用。蒲公英水提取物對鐮刀菌和灰葡萄孢的孢子萌發可產生較好的抑制作用，抑制率分別為：82.32%和88.67%;蒲公英醇提取物對擴展青霉、鏈格孢、葡枝根霉的孢子萌發可產生較好的抑制作用，其抑制順序為：葡枝根霉的孢子萌發抑制率（89.24%）>擴展青霉（75.65%）>鏈格孢（72.61%）。

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