中藥成分對人肝癌細胞HepG2增殖變化影響的研究進展

莫貞鈺 向 欣 潘健寧 黃金昌 高 月 武 麗

（廣西中醫藥大學 廣西南寧 530200）

肝癌是嚴重危害人類健康的惡性腫瘤之一，其死亡率高。近年來，我國肝癌發病率呈逐年遞增趨勢。因廣西地區長期處于潮濕、高溫這種特殊氣候條件，黃曲霉菌在多種農作物中肆意生長，并產生大量致癌物質——AFB1，進而引發甚至加重肝癌發病，因而，我省肝癌發病率及死亡率已居全國之首[1]。目前，臨床治療肝癌的手術、放、化療等方法都存在一定的弊端，加之我國經濟發展不平衡，醫療衛生水平同樣受到影響，尋求更加經濟、毒副反應小的治療勢在必行。中醫中藥作為我國特色抗癌手段，中藥是臨床治療肝癌的重要方法之一。其恰巧可以彌補手術治療、放射治療、化學治療等治療方法的不足。據浙江省中醫院癌癥治療專家介紹，中醫中藥治癌有四大特點，其一是具有較強的整體觀念。腫瘤雖然生長在身體的某一局部，但實際上是一種全身性疾病。對于多數的腫瘤病人來說，局部治療是不能解決根治問題的，而中醫由于從整體觀念出發，實施辨證論治，既考慮了局部的治療，又采取扶正培本的方法，對于改善患者的局部癥狀和全身狀況都具有重要的作用。我國傳統醫學及多種民族藥抗炎、增強免疫等作用明顯，其多歸根于我國民族藥材中的多成分組成[2,3]。本文綜述了中藥成分對人肝癌細胞HepG2增殖變化影響的研究進展，著重分析中藥成分中的多糖、黃酮類、皂苷和生物堿成分對HepG2增殖變化的影響，以期能對由HepG2引起的肝癌治療方法的發展提供理論依據。

一、中藥中多糖、黃酮類、皂苷和生物堿成分對HepG2增殖變化的影響

（一）多糖

我國傳統醫學及多種民族藥抗炎、增強免疫等作用明顯，其多歸根于我國民族藥材中的多成分組成。其中，廣泛存在于各類植物中的多糖成分，因其寬泛的生物活性，且具有增強機體免疫功能、強心降壓、降糖、抗應激、抗腫瘤及抗氧化等功效[4]（如表1所示）。因此，其在臨床治療及科研實驗中應用及研究頗多。

1.山茱萸多糖。山茱萸多糖是山茱萸Cornus officinalis Sieb.et Zucc.干燥果肉中成分，其在抗肺癌、乳腺癌功效顯著，可抑制肺癌細胞生長轉移，調節細胞增殖、凋亡相關基因表達，提高腫瘤抗原表達。李媛等人通過流式、免疫印跡、熒

光染色等方法得出山茱萸多糖可能通過表達抑制PI3K/AKT通路活化來抑制HepG2增殖，并促進其凋亡的結論[5]。

2.黃芪多糖。黃芪多糖（astragalus polysaccharide,AP）是黃芪中最重要的天然有效成分，由葡聚糖和雜多糖組成，具有增強免疫、調控炎癥反應等作用[10,11,12]，是黃芪中最重要的天然有效成分。程玥等人通過CCK-8檢測和RT-PCR法檢測所得結果表明，AP可提高胰島素抵抗模型中HepG2細胞存活率[6]。

3.金針菇多糖。金針菇營養豐富，含有多糖、粗纖維、萜類等多種活性物質。已有報道，金針菇多糖具有抗腫瘤、抗衰老、保肝作用等生物活性。其抗腫瘤活性的報道多著眼于免疫調節作用，吉林農業大學功能性蘑菇多糖研究室前期優化研究得到金針菇多糖。張愛龍等人通過MTT法、Annexin V-FITC/PI雙染檢測及細胞凋亡染色法本試驗研究發現，金針菇多糖誘導肝癌HepG2細胞凋亡作用機制涉及線粒體凋亡途徑與死亡受體途徑[7]。

表1 不同種屬植物多糖類的抗腫瘤作用

（二）黃酮類

1.漢黃芩素。《本草經集注》記載黃芩性寒味苦，主治溫熱病、上呼吸道感染、止血、安胎等作用。由此可知，我國對于黃芩的應用已經有許多經驗，科技的發展使得黃芩中的活性成分得到提取并且加以研究，已經取得了一定的成果。從黃芩根莖部提取出來的漢黃芩素（C16H12O5），屬于黃酮類化合物[8]（結構如圖1所示）。

圖1 漢黃芩素的基本結構

據研究發現，漢黃芩素屬于活性成分，具有一定的抗腫瘤效果[9]。腫瘤的治療方法之一就是通過激活體內的免疫細胞和加強機體抗腫瘤免疫應答，特異性地清除腫瘤細胞和抑制腫瘤細胞的生長。免疫應答過程中主要有兩種細胞參與：一個是T細胞，另一個是自然殺傷細胞(natural killer cell,NK)。漢黃芩素能夠促進免疫細胞的增殖，使得機體的免疫功能強化[10]。馬永波[9]、李曉楠[11]等的研究表明，漢黃芩素在適宜濃度范圍內能夠促進CD3AK細胞的增殖，增強其對肝癌細胞的殺傷活性,從而抑制肝癌細胞生長，誘導腫瘤細胞凋亡。

2.花青素。花青素(anthocyanidins)是一種植物中的色素，是花色苷(anthocyains) 水解而得的有顏色的背元，并且使水果、蔬菜、花卉具有它獨有的顏色。這個呈色就是花青素的作用結果。花青素屬于類黃酮，它的基本結構為2-苯基苯并吡喃陽離子(如圖2所示)。

圖2 花青素的基本結構

研究表明，花青素可以抑制組織和某些腫瘤細胞的活性[12]。通過體外細胞研究，發現花青素可以化學預防腫瘤細胞的活性。這個過程為激活體內的免疫細胞和增強機體抗腫瘤免疫應答，從而抑制腫瘤細胞的增殖，誘導腫瘤細胞凋亡。多個基因的活化和表達功能可以被花青素所調節[12]。Bishayee A等[13]通過實驗證實花青素是可以預防肝癌的。

3.水飛薊素。根據《中藥大辭典》記載水飛薊可以清熱利濕、疏肝行氣、化瘀消積；可以用于治療肝、膽管疾病。由此可知，水飛薊在治療肝臟疾病具有悠久的歷史。水飛薊素 (Silymarin) 屬于黃酮木質素類混合物，可從水飛薊的種子中提取。Lah JJ等[15]利用肝癌細胞系Hep3B、PLC/PRF/5、Hu H7、Hep G2研究水飛薊賓的作用機制，均表明水飛薊可對肝癌細胞有增殖抑制和細胞凋亡的作用。

（三）皂苷類

1.麥冬皂苷B。周志紅的研究中表明麥冬皂苷B可以通過誘導人肝癌HepG2細胞發生自噬的作用機制來抑制細胞增殖。流式細胞術結果顯示，其對HepG2細胞周期及凋亡皆無影響；吖啶橙染色和Lyso-Tracker Red染色均提示細胞內自噬囊泡數量增加；Western blot結果表明其引起Beclin-1（自噬標志性蛋白）表達提高，胞漿型LC3（即LC3I）向自噬體膜型（即LC3II）轉變，自噬抑制劑3-MA幾乎完全逆轉其抗增殖作用，提示麥冬皂苷B通過誘導自噬產生作用。

2.桔梗皂苷-D。桔梗皂苷-D (platycodin-D)是桔梗總皂苷的活性成分，有鎮痛、抗炎、抗腫瘤、免疫調節等作用。MTT法和流式細胞術檢測結果均顯示其對HepG2細胞增殖有抑制作用；熒光定量PCR結果和Western blot試驗發現桔梗皂苷D可使Beclin-1、LC3II和BNIP3（促凋亡蛋白）表達水平均有顯著提高，從而誘導細胞自噬和凋亡。

3.柴胡皂苷D。柴胡皂苷D是柴胡的主要活性成分之一，具有抗菌、抗炎、抗癌、抗病毒等作用。免疫組化檢測腫瘤組織增殖蛋白Ki67表達顯著減弱、凋亡標記蛋白cleaved caspase-3表達顯著增強，表示柴胡皂苷可抑制腫瘤細胞生長，促進腫瘤細胞凋亡[19]。

（三）生物堿類物質對人肝癌細胞損傷的影響

1.吳茱萸堿。吳茱萸堿為吳茱萸主要活性成分之一，國內外研究都有表示其藥理作用多樣。吳茱萸堿可濃度依賴性抑制細胞存活，吳茱萸堿影響HepG2細胞后，細胞內MMP-9、PCNA蛋白表達相對下降，而凋亡蛋白Bax、p53表達水平上升，細胞的核固縮、核邊集等形態改變明顯，表示吳茱萸堿可誘導人肝癌HepG2細胞的凋亡。

2.小檗堿 (berberine)。小檗堿來源于傳統中藥黃連和黃柏，是一種異喹啉類生物堿，在我國藥用歷史悠久，有抗菌、抗炎、抗癌、降血糖、降血脂及免疫抑制等多種藥理作用。研究發現，小檗堿可以誘導HepG2細胞自噬性死亡, 通過去除自噬相關基因或活化AMPK后, 細胞存活率顯著上升, 而使用激活劑AMPK后細胞死亡率上升。

四、小結

肝癌嚴重危害著人類健康，其死亡率高，近年我國肝癌發病逐年遞增，廣西肝癌發病率及死亡率居全國之首[1]。目前，臨床治療肝癌的手術、放、化療等方法都存在一定的弊端，加之我國經濟發展不平衡，醫療衛生水平同樣受到影響，因此，尋找一種相對安全、可靠的治療方案已迫在眉睫。我國自古以來關于中藥的應用記載就非常多，我們現在中藥的應用也基本建立在古人的記載之上，且中藥資源豐富。這就意味著我們需要不斷創新、不斷發掘中藥在人類機體內的作用機理，從而擴大中藥的利用價值。隨著科研技術的不斷發展，我們更是研究出多種中藥有效成分對于治療腫瘤的作用，也發現了許多中藥有效成分對腫瘤細胞作用的機制。其具有共同點，就是通過影響腫瘤細胞增殖，誘導腫瘤細胞的凋亡，從而達到抑制腫瘤生長的目的，而且還可以降低化療藥物產生的副作用，減輕治療過程中給身體帶來的傷害。中藥作為我國特色抗癌手段，恰巧可以彌補手術治療、放射治療、化學治療等治療方法的不足。研究中藥有效成分對于抗腫瘤的作用機制，不僅讓我們了解機體免疫細胞在抗腫瘤時發揮的巨大作用，也為人類未來在戰勝腫瘤方面提供至關重要的指導，中藥有效成分治療腫瘤的研究和開發將會為人類抗腫瘤事業做出貢獻，具有很大的研究價值。