枯草芽孢桿菌對熱應激肉雞睪丸抗氧化功能影響

熊永潔，賀紹君，劉德義，王喜峰，魏 霖，李 靜，胡倩倩（安徽科技學院動物科學學院 233100）

當前， 規模化肉雞的飼養幾乎都是采用集約化的養殖模式，長途運輸、疫苗免疫、溫度變化、飼養密度等眾多因素往往會引起雞群的應激[1]。 熱應激作為夏季肉雞養殖生產過程中最為常見的一種不利應激， 應激發生后通常會引起雞的采食量急劇降低、生長與增重緩慢、免疫抑制。 持續或嚴重的熱應激甚至能夠造成雞只的大量死亡。 熱應激發生后，動物機體自身原有的氧化與抗氧化的平衡狀態被破壞，抗氧化功能出現紊亂，最終引起雞群發病[2]。 枯草芽孢桿菌作為一種益生菌，相關研究表明枯草芽孢桿菌能夠有效提高熱應激時肉雞的采食量，降低料肉比，進而提高雞群的整體成活率，并能顯著提高屠體的肉品質量[3]。 為進一步研究枯草芽孢桿菌在熱應激引起肉雞繁殖性能下降過程中的保護作用，本實驗從睪丸抗氧化的角度出發，研究在雞的日糧中添加適量的枯草芽孢桿菌對熱應激時雞睪丸抗氧化功能的影響， 以期為防治夏季熱應激對雞繁殖性能造成的危害提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

枯草芽孢桿菌飼料添加劑（有效含量：2×1010CFU/g，北京科為博公司）；GSH-Px、SOD、MDA 快速實驗室檢測試劑盒（南京建成生物公司）。 其余所用試劑均為國產分析純，由安徽科技學院動物醫學實驗中心統一采購提供。

1.2 方法

1.2.1 雞的飼養與管理 21 日齡的健康科寶肉雞60 只，隨機分為三組：正常組（Con）、熱應激組（HS）、熱應激+枯草芽孢桿菌組(HS+BS)。 正常組按照商品化肉雞飼養技術標準的正常溫度飼養， 熱應激組、 熱應激+枯草芽孢桿菌組的飼養溫度為33℃±1℃，相對濕度55%±5%。 試驗期間各組均為自由飲水，正常組和熱應激組飼喂商品化的日糧，熱應激+枯草芽孢桿菌組在商品化日糧中添加300mg/kg 的枯草芽孢桿菌制劑，試驗進行21d。

1.2.2 睪丸組織采集與抗氧化功能指標的測定 在雞飼養至42d 結束時， 于每組雞中隨機選擇5 只進行采樣前的預處理，即禁食12h，禁水8h。 預處理后處死采集睪丸，迅速置于液氮罐內保存。 隨后按照GSH-Px、SOD、MDA 檢測試劑盒中附帶的說明書，分別進行相應抗氧化指標的測定。

1.2.3 數據統計與分析 使用SPSS17.0 統計分析軟件進行數據統計與分析，單因素方差分析法（LSD 法）進行組間的多重分析比較，P＜0.05 表示差異顯著，P＞0.05 表示無明顯差異。

2 結果與分析

2.1 各組間GSH-Px 活力分析與比較

不同處理組的雞睪丸組織中GSH-Px 的活力見表1。

表1 枯草芽孢桿菌對熱應激雞睪丸組織中GSH-Px 活力的影響（U/mL）

從表1 可以看出，在雞42d 時，熱應激處理組的雞睪丸組織中的GSH-Px 酶活力與正常飼養組相比顯著下降(P＜0.05)；但熱應激+枯草芽孢桿菌組與熱應激處理組相比較，GSH-Px 的酶活力顯著上升(P＜0.05)。

2.2 各組間SOD 活力分析與比較

不同處理組的雞睪丸組織中SOD 的活力見表2。

從表2 可以看出，在雞42d 時，熱應激處理組的雞睪丸組織中的SOD 酶活力與正常飼養組相比顯著下降(P＜0.05)；但熱應激+枯草芽孢桿菌組與熱應激處理組相比較，SOD 的酶活力顯著上升(P＜0.05)。

表2 枯草芽孢桿菌對熱應激雞睪丸組織中SOD 活力的影響（U/mL）

2.3 各組間MDA 含量檢測與比較

不同處理組的雞睪丸組織中MDA 的含量見表3。

表3 枯草芽孢桿菌對熱應激雞睪丸組織中MDA 含量的影響（nmol/mL）

從表3 可以看出，在雞42d 時，熱應激處理組的雞睪丸組織中的MDA 含量與正常飼養組相比顯著上升(P＜0.05)； 但熱應激+枯草芽孢桿菌組與熱應激處理組相比較，MDA 含量顯著降低(P＜0.05)。

3 結論與討論

雞發生熱應激時，機體中一系列的生理生化、機能代謝均會受到嚴重影響而發生紊亂，最終導致機體產生大量的自由基，當過量的自由基超過機體的處理與清除能力時， 就會進一步干擾和破壞動物正常的生理生化代謝過程和生理功能。 對于飼養的種雞， 熱應激對繁殖功能造成的損傷往往嚴重影響雞的種用價值，進而降低養殖的經濟效益。 本實驗研究了枯草芽孢桿菌對熱應激飼養條件下雞的睪丸抗氧化功能關鍵指標的影響，為科學、合理地使用枯草芽孢桿菌制劑防治家禽熱應激提供理論依據。

3.1 枯草芽孢桿菌對熱應激雞睪丸組織中GSH-Px 活性的影響

GSH-Px 是動物體內分解和清除過氧化物的一種重要抗氧化酶，其通過分解GSH 形成GSSG，從而使體內有害的過氧化物轉變為無毒無害的化合物，同時加速過氧化氫的分解，使細胞膜在氧化條件下能夠維持結構的完整性， 并保持正常的生理功能不受氧化因子的侵害[4]。 熱應激能夠引起機體組織器官中GSHPx 的酶活力降低，導致動物組織器官的抗氧化能力下降。本試驗的研究結果顯示， 熱應激顯著降低了雞睪丸組織中GSH-Px 的酶活力，而在日糧中添加300mg/kg 的枯草芽孢桿菌制劑可以顯著增強睪丸組織中的GSH-Px 酶活力， 表明枯草芽孢桿菌能夠通過增強睪丸中GSH-Px 的酶活力進而提高雞睪丸的抗氧化能力，從而降低熱應激對公雞繁殖性能造成的危害。

3.2 枯草芽孢桿菌對熱應激雞睪丸組織中SOD 活性的影響

SOD 作為生物體內抗氧化酶家族的重要成員之一，能夠使超氧陰離子自由基發生歧化反應形成氧和過氧化氫， 從而調節機體的氧化與抗氧化平衡。 動物機體在新陳代謝等一系列生理生化反應過程中會不，同程度地產生有害的自由基，但由于體內SOD 對自由基能夠起到清除作用，不會引起自由基的過量蓄積，最終使機體內自由基的產生和清除處于一種動態平衡之中。 但是， 一些病理因素如應激常常會引起體內自由基的大量異常增加。 當自由基的產生速度超過SOD 對其的清除能力時，動物的細胞、組織和器官等就會出現氧化損傷，進而表現出疾病等異常癥狀。 本研究結果顯示，雞在熱應激的環境中，其睪丸組織中的SOD 酶活力明顯降低。 表明雞在面臨熱應激時，其體內的SOD大量消耗，SOD 的產生以及代謝活性受到了熱應激的影響。而在日糧中添加300mg/kg 的枯草芽孢桿菌制劑能夠顯著提高雞睪丸組織中SOD 的酶活力，增強睪丸的抗氧化能力。

3.3 枯草芽孢桿菌對熱應激雞睪丸組織中MDA 含量的影響

現有研究已經證明， 機體在遭受熱應激時會產生大量的自由基， 自由基與組織中的脂質發生過氧化反應后進一步產生大量的MDA，最終導致組織中的蛋白質和核酸等功能性分子發生交聯聚合化反應，從而損傷組織器官正常的生理功能。 有研究顯示應激能夠引起家禽體內脂質過氧化反應的產物MDA 的含量升高、誘發氧化損傷而影響組織器官生理功能的正常發揮。 本試驗結果顯示，熱應激時雞睪丸中的MDA 含量顯著增加，這與前人的研究結果相一致。日糧中添加300mg/kg 的枯草芽孢桿菌制劑可顯著降低雞睪丸組織中MDA 的含量，表明枯草芽孢桿菌能通過抑制熱應激時雞睪丸中MDA 的產生，進而緩解熱應激對雞睪丸生理功能的損傷。

以上結果表明，雞發生熱應激后，睪丸的抗氧化能力顯著降低，日糧中添加300mg/kg 的枯草芽孢桿菌可有效增強睪丸的抗氧化能力，提高雞的種用價值。