不同類型HPV 與宮頸上皮內瘤變和宮頸癌的關系探討

蔡方萍

（海門市第二人民醫院婦產科，江蘇 南通 226100）

宮頸癌是一種可預防及可治愈的惡性腫瘤。近年來，隨著宮頸癌篩查力度的加大，提高了臨床早期病變的檢出率，也有助于盡早采取干預措施，提高患者生存率。宮頸上皮內瘤變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）是宮頸癌的癌前病變，如不及時處理，易發展成宮頸癌，影響患者預后[1]。臨床研究發現，人乳頭狀瘤病毒（HPV）感染可引起子宮組織病變，導致CIN 及宮頸癌的發生[2]。臨床將HPV 類型分為高危型與低危型，高危型有20 多種，其中16 和18 型是發生宮頸病變的主要類型，而低危型以6 型、11 型為主，可引發良性病變，從HPV 感染發展到CIN，再發展到宮頸癌要經歷10 年左右的演變期，因此，了解不同類型HPV 感染情況，便于臨床早期對宮頸病變做出準確判斷，對早期預防CIN 及宮頸癌的發生起到積極作用[3]。本文回顧性研究2017 年2 月至2019 年10 月海門市第二人民醫院婦科門診就診的300 例已確診的CIN和宮頸癌患者，均采用實時熒光聚合酶鏈式反應（PCR）技術進行HPV 分型檢測，探討不同類型HPV 病毒感染情況，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取海門市第二人民醫院2017 年2 月至2019 年10 月就診的300 例已確診的CIN 和宮頸癌患者，對其資料進行回顧性分析，納入標準：①符合《臨床腫瘤內科手冊》[4]中CIN 和宮頸癌相關診斷標準者；通過細胞學及病理學確診為CIN 及宮頸癌。②患者臨床資料完整。③無精神疾病。排除標準：①癌細胞轉移。②生存時間不足6個月。③合并嚴重器質性疾病。患者年齡19～74歲，平均（41.25±4.21）歲；其中CIN Ⅰ級患者75例（25.00%），CIN Ⅱ～Ⅲ級患者148 例（49.33%），宮頸癌患者77 例（25.67%）。院內醫學倫理委員會審核并批準此研究，患者或家屬對研究知情同意。

1.2 方法

1.2.1 標本采集與處理采集的檢測樣本為受檢者的宮頸上皮細胞，使用無菌棉拭子進行采集，并放入離心管中，加入適量無菌生理鹽水，靜置10 min，取出采集樣本的棉拭子，并對樣本進行離心處理，離心時間為5 min，轉速14 000 r/min。完成上述操作后，留取沉淀，并將其置于-70 ℃冰箱內保存。

1.2.2 PCR 技術進行HPV 分型檢測主要針對于HPV亞型中的低危型HPV6、HPV11 及高危型HPV16 和HPV18 4 種類型進行檢測，使用的試劑來自華美生物工程公司。首先將樣本從冰箱內取出，然后加入50 μL 裂解液進行裂解處理，將裂解液與處理后的樣本溶液充分搖勻混合后，先進行加熱處理，100 ℃加熱1 min，然后再次進行離心處理，14 000 r/min，離心5 min，將適量（2 μL 左右）上層清液取出后，放置于反應管中，將此作為反應模板。然后進行PCR 檢測，將溫度調整為94 ℃，在5 min 內進行變性循環，共35 個循環，循環完成后，再將溫度調整為72 ℃，進行5 min 的延伸處理。整個處理期間，注意要建立好陽性、陰性以及對照分析。最后，對PCR 產物進行凝膠電泳處理，置于2%瓊脂糖凝膠進行30 min 的電泳，設置參數為8～100 V，然后使用凝膠成像儀在302 nm紫外線處進行觀察，在紫外線下會發生溴化反應，DNA呈現紅橙色的現象。根據對照分析，觀察是否有紅橙色光帶，有紅橙色光帶者判定為陽性。

1.3 觀察指標①分析不同宮頸病變患者年齡分布情況。②分析不同年齡患者HPV 分型結果。③分析不同宮頸病變患者HPV 分型結果。

1.4 統計學方法采用SPSS 20.0 統計軟件分析數據，計數資料用[例(%)]表示，采用χ2檢驗。以P＜0.05 表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同宮頸病變患者年齡分布情況CIN I 及CIN II～III患者中，發病年齡集中在20～35 歲，分別占比為49.33%及41.89%；宮頸癌患者中，發病年齡集中在36～50 歲，占比為38.96%，見表1。

2.2 不同年齡患者HPV 分型結果檢測結果顯示，300 例患者中，HPV 感染213 例，陽性率為71.00%，其中20～35 歲共感染94 例，占HPV 總感染例數的44.13%（94/213）,為感染高發年齡段。低危型HPV 6/11 感染的高峰年齡為＜20 歲、20～35 歲，占這兩個年齡段陽性總例數的53.13%（51/96）；高危型HPV16 感染高峰年齡段為51～65 歲，占該年齡段陽性總例數的15.79%（6/38）；HPV18 感染高峰年齡段為＞65 歲，占該年齡段陽性總例數的40.00%（14/35）；混合感染以20～35歲年齡段占比較高，占該年齡段陽性總例數的24.47%（23/94），見表2。

2.3 不同宮頸病變患者HPV 分型結果在CINI 組患者中，低危型HPV6/11 占比最高，為84.48%，顯著高于CIN II～III 及宮頸癌患者，差異均有統計學意義（均P＜0.05）；在CINII～III 患者中，以低危型HPV6/11 占比最高，為43.00%，其次為混合感染，為25.00%；宮頸癌患者中，以高危型HPV18 占比最高，為34.55%，其次為混合感染，為30.91%，見表3。

3 討論

臨床認為宮頸癌的發生與發展是一個漸變的過程，最終有兩種結局，好的結局是自然消退，壞的結局是發生癌變，漸變過程為CIN 發展到原位癌，再發展到早期浸潤癌，最終發展為宮頸癌。由于宮頸癌的發病過程較為緩慢，因此早期采取干預措施，可逆轉其結局[5]。可見，早期對宮頸癌進行篩查對疾病預后有利。

表1 不同宮頸病變患者年齡分布情況[例(%)]

表2 不同年齡患者HPV 分型結果[例(%)]

表3 不同宮頸病變患者HPV 分型結果[例(%)]

HPV 存在于自然界，目前有多個亞型，是一種與皮膚或黏膜增生性病變有關的DNA 病毒，其中HPV6、11 及42 等均為低危型，不會產生癌變，常見于生殖道良性疾病中；HPV16、18 及31 等均為高危型，會產生癌蛋白，使得細胞周期失控進而發生癌變。宮頸癌發病與高危型HPV 感染有關，其以隱性感染為主，引發不典型增生，其他協同因子參與其中即可發生癌變[6-7]。但顯性感染在臨床易發現，因此不能忽視隱性感染者追蹤，需加大篩查力度。本次研究結果顯示，CIN I 及CIN II～III 患者中，發病人群集中在20～35 歲，而宮頸癌患者，發病人群集中在36～50 歲。可見宮頸病變程度隨著年齡增長而不斷加重，宮頸癌發展為一個連續發展的過程，從正常宮頸過度到宮頸上皮內瘤變，最后發展為宮頸癌需要5～10 年的漸變過程。本次研究結果顯示，HPV 感染高峰年齡為35 歲以下，而與宮頸癌的高峰年齡相比，有10 歲以上的差異，但兩類患者的發展時間相似。應當將36～50 歲的群體作為高危人群，給予重點防治宣教。同時從研究中可知，HPV 陽性率逐漸低齡化，低危型HPV 6/11 感染的年齡較低，峰值＜35 歲，可見應當加強對年輕女性的健康指導，讓年輕女性要注意生殖系統健康，并定期接受HPV 病毒篩查、宮頸細胞檢查等。

本次研究結果顯示，300例患者中，HPV總感染213例，陽性率71.00%，且低危型HPV6/11 所占陽性例數比例為46.01%，而高危型所占陽性例數比例為53.99%，表明HPV 感染隨著宮頸病變的加重而持續升高。在不同宮頸病變中，高危型18 陽性率以宮頸癌最高，為34.55%，低危型6/11 陽性率以CIN I 最高，為84.48%，提示隨著CIN 級別的增高，患者的宮頸病變越嚴重，高危型HPV 的陽性率也越高，此結果與楊惠霞等[8]的文獻報道結果相符。有學者認為，宮頸的輕度病變主要由HPV感染細胞形態及結構變異導致，而增加機體抵抗力，HPV感染會消失，且細胞形態會逐漸恢復，反之，病情則會進展，而多數HPV 感染是短暫性的，是有持續HPV 感染才可引發宮頸癌[9]。有研究證實，年輕女性感染高危型16/18 更易引發宮頸癌，且年齡較大的女性，其發生宮頸癌與多種因素有關，如早婚及多產導致宮頸裂傷等，因此，對年輕女性的預防應在預防及治療HPV 感染方面，尤其是高危型16 與18，檢出后需要及時采取有效的治療措施[10]。PCR 檢測技術是檢測HPV 的良好技術，其靈敏度高且操作簡單，具有較好的陰性預測值，便于臨床采用。但目前HPV 檢測的成本較高，尚不能大面積用于宮頸癌的篩查中，臨床應重視HPV 陽性患者的隨訪，加強關注力度。

綜上，女性生殖道HPV 感染率隨宮頸病變程度的加重呈現升高趨勢，HPV 感染與年齡、不同程度宮頸病變均存在相關性。臨床對重點人群進行PCR 檢測，再根據篩查結果，對高危型人群進行密切追蹤，了解HPV 感染患者的轉歸情況，以預防宮頸癌的發生。