子癇前期患者血清miR-155表達(dá)及其與炎癥因子和妊娠結(jié)局的關(guān)系

呂冬梅,尚敏捷,田曉穎,潘忠敏

錦州市婦嬰醫(yī)院：1.產(chǎn)科；2.醫(yī)務(wù)處，遼寧錦州 121000

子癇前期是妊娠期常見(jiàn)的疾病，患者的主要表現(xiàn)為血壓升高、高蛋白尿并出現(xiàn)頭痛、惡心、嘔吐、上腹不適等癥狀，且其引起的血壓異常升高可對(duì)孕婦的多個(gè)靶器官造成損傷，明顯增加不良妊娠結(jié)局的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[1]。目前子癇前期的具體發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，但已經(jīng)確定炎性反應(yīng)可直接損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，并可加劇機(jī)體的氧化應(yīng)激反應(yīng)，引起血管內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙，進(jìn)而引發(fā)一系列的病變[2]。微小RNA(miRNA)是內(nèi)源性非編碼RNA，具有豐富的生物學(xué)功能，可參與多種疾病的發(fā)生、發(fā)展。 miR-155位于人類(lèi)第21號(hào)染色體上B細(xì)胞非編碼集合簇的第3外顯子，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖分化、促進(jìn)炎性反應(yīng)等作用，目前已有研究證實(shí)，miR-155與高血壓、冠心病等多種心血管疾病密切相關(guān)且在子癇前期患者胎盤(pán)組織中呈異常高表達(dá)[3-5]。目前miR-155與子癇前期的研究尚處于初級(jí)階段，作為促炎因子的miR-155是否通過(guò)調(diào)控炎性反應(yīng)影響疾病的進(jìn)展、能否作為預(yù)測(cè)患者不良妊娠結(jié)局的生物標(biāo)志物尚有待進(jìn)一步研究。鑒于此，本研究旨在探討子癇前期患者血清miR-155表達(dá)及其與炎癥因子和妊娠結(jié)局的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年6月至2019年6月本院收治的子癇前期患者143例，根據(jù)疾病嚴(yán)重程度將其分為輕度子癇前期組(102例)和重度子癇前期組(41例)。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)所有患者均符合《婦產(chǎn)科學(xué)(第8版)》制定的子癇前期診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]；(2)均有完整的妊娠結(jié)局隨訪記錄；(3)對(duì)本研究?jī)?nèi)容知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并有妊娠期糖尿病等其他類(lèi)型的妊娠期疾病者；(2)在妊娠期間有吸煙、飲酒、隨意用藥等情況的患者；(3)存在嚴(yán)重器質(zhì)性疾病者；(4)多胎妊娠、非自然受孕者；(5)合并有惡性腫瘤、免疫功能疾病者；(6)在妊娠期間因其他因素(如摔倒、撞傷等)影響妊娠結(jié)局者。另選取同期在本院進(jìn)行體檢的健康孕婦30例作為對(duì)照組，對(duì)照組均未患有妊娠期疾病，且各項(xiàng)孕檢均正常。各組一般資料比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。本研究通過(guò)了本院倫理委員會(huì)制訂的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。

表1 各組一般資料比較

1.2方法

1.2.1血壓、24 h尿蛋白水平定量檢測(cè) 檢測(cè)所有研究對(duì)象的舒張壓(DBP)和收縮壓(SBP)，測(cè)量前應(yīng)靜坐10～15 min，均采用水銀血壓計(jì)(魚(yú)躍)進(jìn)行測(cè)量。另收集所有研究對(duì)象的24 h尿液，應(yīng)避免遺漏尿液，采用雙縮脲法測(cè)定24 h尿蛋白水平。

1.2.2血清炎癥因子檢測(cè) 抽取所有研究對(duì)象的空腹靜脈血6 mL，以3 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心10 min，分離上層血清。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)水平，采用免疫比濁法檢測(cè)超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)水平，檢測(cè)試劑盒均購(gòu)于武漢博士德生物有限公司。

1.2.3血清miR-155檢測(cè) 采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)血清miR-155的相對(duì)表達(dá)量。取適量血清，采用miRNeasy試劑盒(美國(guó)Qiagen公司)提取總RNA，紫外分光光度計(jì)(NanoDrop 2000)檢測(cè)RNA濃度及純度(A260/A280)后，進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)得到cDNA。以U6為內(nèi)參，引物由廣州銳博生物技術(shù)公司設(shè)計(jì)合成。miR-155上游引物：5′-GTC CCA ATG CTG TCT-3′，下游引物：5′-GGA AGT TGC ATG CAT-3′，U6上游引物：5′-CTT AGT TGC ATG CAG-3′，下游引物：5′-AAT CGT GTA TAA GTC-3′。反應(yīng)條件：95 ℃ 20 s，95 ℃ 10 s、60 ℃ 20 s，70 ℃ 10 s，40 個(gè)循環(huán)。每個(gè)樣品設(shè)置 3 個(gè)平行重復(fù)，采用2-ΔΔCt計(jì)算血清中miR-155的相對(duì)表達(dá)量。

1.2.4隨訪 所有子癇前期患者均隨訪至生產(chǎn)，記錄其妊娠結(jié)局，若出現(xiàn)以下情況中的1種或多種則視為存在不良妊娠結(jié)局：胎兒宮內(nèi)窘迫、羊水污染≥Ⅲ度、胎兒死亡、心衰、肺水腫、子癇、HELLP綜合征。

1.2.5分組方法 根據(jù)所有患者的妊娠結(jié)局，將出現(xiàn)不良妊娠結(jié)局的患者納入到不良妊娠組(44例)，其余未出現(xiàn)不良妊娠結(jié)局的患者納入到正常妊娠組(99例)。根據(jù)所有子癇前期患者的血清miR-155的相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行分組，以均值為界，高于或等于均值的納入到miR-155高表達(dá)組(70例)，低于均值的納入到miR-155低表達(dá)組(73例)。

2 結(jié) 果

2.1各組血清miR-155及其他臨床指標(biāo)水平比較 各組血清miR-155、DBP、SBP、24 h尿蛋白、TNF-α、IL-6、hs-CRP水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；重度子癇前期組、輕度子癇前期組、對(duì)照組血清miR-155、DBP、SBP、24 h尿蛋白、TNF-α、IL-6、hs-CRP水平逐漸降低，多組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。

2.2不同妊娠結(jié)局的子癇前期患者的血清miR-155及其他臨床指標(biāo)水平比較 不良妊娠組血清miR-155、DBP、SBP、24 h尿蛋白、TNF-α、IL-6、hs-CRP水平均高于正常妊娠組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表3。

2.3不同miR-155表達(dá)水平組不良妊娠結(jié)局發(fā)生率比較 miR-155高表達(dá)組胎兒宮內(nèi)窘迫、羊水污染≥Ⅲ度發(fā)生率均高于miR-155低表達(dá)組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表4。

表2 各組血清miR-155及其他臨床指標(biāo)比較

表3 不同妊娠結(jié)局的子癇前期患者的血清miR-155及其他臨床指標(biāo)比較

表4 不同miR-155表達(dá)水平組不良妊娠結(jié)局發(fā)生率比較[n(%)]

2.4子癇前期患者miR-155表達(dá)水平與其他臨床指標(biāo)的相關(guān)性分析 相關(guān)性分析顯示，子癇前期患者miR-155表達(dá)水平與DBP、SBP、24 h尿蛋白、TNF-α、IL-6、hs-CRP均呈正相關(guān)(P<0.05)，見(jiàn)表5。

表5 子癇前期患者miR-155表達(dá)水平與其他臨床指標(biāo)的相關(guān)性分析

2.5血清miR-155對(duì)妊娠結(jié)局的預(yù)測(cè)價(jià)值分析 經(jīng)ROC曲線分析顯示，血清miR-155對(duì)妊娠結(jié)局有較高的預(yù)測(cè)價(jià)值，ROC曲線下面積為0.765(95%CI：0.676～0.854)，最佳截?cái)嘀禐?.52，靈敏度為79.55%，特異度為66.67%，約登指數(shù)為0.462，ROC曲線見(jiàn)圖1。

圖1 血清miR-155對(duì)妊娠結(jié)局的ROC曲線圖

3 討 論

子癇前期是妊娠期高血壓的常見(jiàn)類(lèi)型，可導(dǎo)致孕婦出現(xiàn)心、肺等多個(gè)靶器官損傷，引發(fā)子癇、HELLP綜合征等嚴(yán)重并發(fā)癥，并可導(dǎo)致胎兒早產(chǎn)、宮內(nèi)窘迫等，嚴(yán)重時(shí)還可導(dǎo)致胎兒死亡[7]。由于孕期治療受到諸多限制，目前臨床尚無(wú)有效治療子癇前期的方法，終止妊娠是治愈子癇前期的唯一方式，然而過(guò)早終止妊娠會(huì)增加不良妊娠結(jié)局的發(fā)生，但過(guò)度延長(zhǎng)期待治療時(shí)間又可能會(huì)導(dǎo)致子癇前期患者出現(xiàn)各種并發(fā)癥，最終也將影響妊娠結(jié)局。子癇前期患者不良妊娠結(jié)局預(yù)測(cè)方面的研究依然是目前臨床的重要研究方向，國(guó)內(nèi)外學(xué)者期待通過(guò)建立風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)系統(tǒng)來(lái)準(zhǔn)確評(píng)估患者不良妊娠結(jié)局發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)，但至今尚未取得明顯進(jìn)展[8]，因此探究新的生物標(biāo)志物，為建立風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)系統(tǒng)提供新的臨床指標(biāo)或?qū)嶒?yàn)室指標(biāo)具有重要的臨床價(jià)值。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的與子癇前期密切相關(guān)的生物標(biāo)志物均與疾病的發(fā)病機(jī)制有著緊密的聯(lián)系，如與滋養(yǎng)細(xì)胞增殖、侵襲相關(guān)的胎盤(pán)生長(zhǎng)因子，與血管內(nèi)皮功能相關(guān)的可溶性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體-1[9]。根據(jù)兩階段發(fā)病學(xué)說(shuō)中的闡述，子癇前期的發(fā)病可分為兩個(gè)階段，第一階段時(shí)滋養(yǎng)細(xì)胞增殖、侵襲能力下降，胎盤(pán)血流灌注不足，導(dǎo)致大量的胎盤(pán)因子被釋放，第二階段中進(jìn)入母體血液循環(huán)的胎盤(pán)因子通過(guò)各種途徑激活炎性反應(yīng)和氧化應(yīng)激反應(yīng)，損傷血管內(nèi)皮功能，可見(jiàn)炎性反應(yīng)在子癇前期的發(fā)生、發(fā)展中起到關(guān)鍵作用[10-11]。本研究旨在探討與炎性反應(yīng)密切相關(guān)的miR-155能否作為子癇前期新的生物標(biāo)志物。

本研究結(jié)果顯示，重度子癇前期組、輕度子癇前期組、對(duì)照組的miR-155的表達(dá)水平逐漸降低，且子癇前期患者miR-155表達(dá)水平與DBP、SBP、24 h尿蛋白等指標(biāo)均呈正相關(guān)，提示miR-155在子癇前期患者血清中呈高表達(dá)，且可在一定程度上反映患者的疾病嚴(yán)重程度。相關(guān)研究顯示[12-13]，miR-155在子癇前期患者中呈異常高表達(dá)，這與本研究結(jié)果一致。張展等[14]研究顯示，miR-155可通過(guò)調(diào)節(jié)CXCR4/PI3 K/AKT途徑抑制滋養(yǎng)細(xì)胞的侵襲與遷移，進(jìn)而導(dǎo)致子宮肌層內(nèi)螺旋小動(dòng)脈的重鑄障礙；另有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示[15]，子癇前期模型大鼠的胎盤(pán)組織中miR-155表達(dá)升高，并推測(cè)miR-155可能通過(guò)調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)參與子癇前期的疾病進(jìn)展。TNF-α、IL-6、hs-CRP等均可在一定程度上反映機(jī)體的炎性反應(yīng)程度，其中TNF-α、IL-6均是炎性反應(yīng)的重要促進(jìn)因子，可級(jí)聯(lián)放大機(jī)體的炎性反應(yīng)，而hs-CRP是常見(jiàn)的炎性反應(yīng)標(biāo)志物，TNF-α、IL-6等炎癥因子均可促進(jìn)肝細(xì)胞分泌hs-CRP[16]。本研究結(jié)果顯示，重度子癇前期組、輕度子癇前期組、對(duì)照組TNF-α、IL-6、hs-CRP水平均逐漸降低，提示子癇前期患者存在明顯的炎性反應(yīng)，這與相關(guān)研究結(jié)果一致[17]。另一方面，子癇前期患者miR-155表達(dá)水平與TNF-α、IL-6、hs-CRP等指標(biāo)均呈正相關(guān)。張曉亮等[18]通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)，miR-155可通過(guò)激活核轉(zhuǎn)錄因子-κB、下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子3等經(jīng)典的炎癥信號(hào)通路促進(jìn)炎癥因子的釋放；盧健翔等[19]研究發(fā)現(xiàn)，miR-155可促進(jìn)滋養(yǎng)層細(xì)胞內(nèi)的炎性反應(yīng)，增加炎癥因子的分泌；YANG等[20]研究顯示，miR-155可促進(jìn)CD4+T細(xì)胞分泌炎癥因子IL-17，miR-155的表達(dá)水平與IL-17呈正相關(guān)。從上述研究和本研究結(jié)果可以推測(cè)，miR-155可能通過(guò)促進(jìn)炎癥因子的表達(dá)影響機(jī)體的炎性反應(yīng)，進(jìn)而參與子癇前期的疾病進(jìn)展。

本研究結(jié)果還顯示，不良妊娠組的miR-155表達(dá)水平高于正常妊娠組，且miR-155高表達(dá)組患者的妊娠結(jié)局明顯更差，這些均表明miR-155與子癇前期患者的妊娠結(jié)局存在一定的聯(lián)系，有望成為預(yù)測(cè)患者妊娠結(jié)局的新的生物標(biāo)志物。通過(guò)ROC曲線分析可以發(fā)現(xiàn)，血清miR-155的曲線下面積為0.765(95%CI：0.676～0.854)，提示其對(duì)子癇前期患者的妊娠結(jié)局有較高的預(yù)測(cè)價(jià)值。由于miRNA可在血液中穩(wěn)定表達(dá)，且血液樣本易于獲取，因此血清miR-155的檢測(cè)或?qū)εR床有一定應(yīng)用價(jià)值。

綜上所述，血清miR-155在子癇前期患者中呈異常高表達(dá)，且其表達(dá)水平與機(jī)體的炎性反應(yīng)及妊娠結(jié)局密切相關(guān)，miR-155有望成為預(yù)測(cè)患者妊娠結(jié)局的新的生物標(biāo)志物。然而本次研究選取的病例數(shù)較少，可能造成研究結(jié)果存在一定的偏倚，且為了便于隨訪，均選取的本院收治的患者，研究區(qū)域較為單一，因此本研究結(jié)論還有待多中心、大樣本、前瞻性的臨床試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。